ICS 65.020.01 CCS B 61 44 广东省 地方 标准 DB44/T 2715—2025 木麻黄抗青枯病新品种选育技术规程 Code of practice on breeding of bacteria wilt -resistant cultivar of Casuarina spp. 2025 - 07 - 28发布 2025 - 10 - 28实施 广东省市场监督管理局 发布 DB44/T 2715 —2025 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 选育材料 ................................ ................................ ........... 2 5 青枯菌制备 ................................ ................................ ......... 2 6 抗病选育 ................................ ................................ ........... 3 7 档案管理 ................................ ................................ ........... 6 附录A（规范性） 培养基成分及配制方法 ................................ ................. 7 附录B（规范性） 木麻黄青枯病抗性鉴定结果记录表 ................................ ....... 8 DB44/T 2715 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广东省林业局提出并组织实施。 本文件由广东省林业标准化技术委员会（ GD/TC 146 ）归口。 本文件起草单位：中国林业科学研究院热带林业研究所。 本文件主要起草人：张勇、马海宾、魏永成、孟景祥、仲崇禄。 DB44/T 2715 —2025 1 木麻黄抗青枯病新品种选育技术规程 1 范围 本文件规定了木麻黄（ Casuarina spp. ）抗青枯病新品种选育的选育材料、青枯菌制备、抗病选育、 分析评价、档案管理等技术要求。 本文件适用于木麻黄抗青枯病新品种的选育。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 DB44/T 1235 木麻黄栽培技术规程 DB44/T 2346 木麻黄青枯菌强致病性菌株筛选技术规程 DB44/T 2414 木麻黄主要病虫害综合防治技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 青枯病 bacterial wilt 由青枯雷尔氏杆菌（ Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.）引起的维管束病害，该病害主 要由土壤传播并从根系侵入植物，大量繁殖后导致维管束被堵塞造成植物死亡。 抗青枯病新品种 new variety resistant to bacterial wilt 利用木麻黄种源、家系、杂交子代或实生苗人工林中的优良单株经无性繁殖获得无性系，再通过抗 病测试定向选择培育对青枯病有较强抵抗力的新品系。 切枝水培接种法 pathogenic bacteria inoculation using water -culture cuttings 将半木质化枝条剪 成15 cm～20 cm长的切枝，将其下端浸入青枯菌悬浮液体中培养一段时间后，观 察切枝的发病情况，统计分析该遗传材料对青枯菌的抗病能力。 伤根接种法 pathogenic bacteria inoculation through wounded roots 把苗木的根部基质去除，修剪部分细根形成伤口，再把根部浸泡在青枯菌悬浮液中促进病菌感染， 然后移栽入苗盆中继续培养，观察苗木的发病情况。 DB44/T 2715 —2025 2 4 选育材料 指不同来源的木麻黄遗传材料，包括从木麻黄天然分布区和主要引种区收集引进的种源 /家系，或 通过控制或自由授粉获得的杂交子代，或从实生苗人工林经选优后获得的个体，经生长和适应性评价， 表现比均值高 1个标准差以上的优良单株材料。 5 青枯菌制备 青枯菌鉴定与收集 5.1.1 病株选取 木麻黄青枯病发病症状为小枝黄化，稀疏，凋落，侧枝枯死或枯梢多；根系发黑，树干内木质部局 部或全部变褐色；正发病植株的根、主干和侧枝横切面有乳白色至黄褐色的菌脓溢出。 5.1.2 快速检测 使用快速检测农作物青枯病常用的免疫层析试纸条对发病植株根系横切面溢出的菌脓进行检测， 当试纸条出现青枯菌特征条带表明植株已经感染青枯菌。 5.1.3 样本采集 剪取青枯病症状明显但 仍然存活的植株上直径粗 1 cm，8 cm～10 cm长的根系，装入自封袋中并保 持湿润状态，带回实验室进行菌株分离。 分离 5.2.1 溢出分离法 将发病株的 根系清洗干净后剥去外皮，并用 75%的酒精浸泡消毒 30 s，置无菌水冲洗 3次，将两端切 成平整的新鲜断面，把其中一端浸泡于无菌水中， 12 h～36 h后在病根的另一端断面会溢出乳白色的菌 脓。用接种针挑取菌脓在 TTC（2, 3, 5 -氯化三苯基四氮唑，见附录 A.1）培养基表面划线，于 30℃下恒温 培养 48 h。 5.2.2 稀释分离法 取发病株3 cm长的根系 1条，冲洗干净表面泥土，用 75%的酒精浸泡消毒 30 s，无菌水冲洗 3次。在 超净工作台上剥去根系表皮，切除两端，再横切成 3份～ 5份，放入含有 5 mL～10 mL无菌水的培养皿内 30 min，让根系的青枯菌渗出形成病菌悬浮液。用移植环蘸取菌液在 TTC培养基上划线分离，于 30℃下 恒温培养 48 h。 纯化培养 在培养皿内挑取不规则圆形、乳白色且中心部位淡红色的单个菌落，在 TTC培养基上 30℃培养 36 h～48 h。 扩繁 将分离纯化后的青枯菌接种于 CPG液体培养基 （见附录 A.2） ， 装入三角瓶中放在摇床上振荡培养， 100 r/min ～150 r/min ，30℃培养 12 h～24 h。 DB44/T 2715 —2025 3 致病性检测 5.5.1 伤根接种法 5.5.1.1 材料 使用2个～3个具不同抗青枯病能力的木麻黄无性系小苗 （高 50 cm）进行菌株致病性的检测，如易 感、中等抗病和抗病的无性系。 5.5.1.2 接种方法 先用流水冲 洗干净小苗根系的培养基质，剪去部分细根形成伤口。将小苗根系放入装有青枯菌悬浮 液的容器中，置于 30℃水浴锅中培养 1 h促进青枯菌的侵染。将青枯菌悬浮液换成无菌水作为对照。 5.5.1.3 小苗移栽 接种青枯菌后将小苗移栽至育苗盘中继续生长， 育苗基质用黄心土 :河沙:蛭石按体积比 2:2:1混合， 种植株行距 10 cm× 10 cm 。单个无性系苗每处理使用 30株，重复 3次以上。 5.5.1.4 发病率测定 人工接种小苗在育苗盘中生长 15 d后，小苗表现萎蔫甚至干枯死亡，使用青枯病免疫检测试纸条检 测根系出现青 枯菌特征条带， 表明木麻黄苗已发病， 计算人工接种菌株小苗的发病率。 发病率 （ Incidence rate,IR）按公式（1）计算。 发病率（ %）=发病单株数 调查单株数×100% ································ ······················· (1) 5.5.1.5 致病性判断 人工接种青枯菌的无性系苗达到如下发病率，可以判定该菌株为强致病性菌株，判定标准见表 1。 表1 青枯菌致病性判断 三种木麻黄无性系抗病等级 发病率（ IR，%） 易感 IR≥70 中等