ICS 11.020 CCS C 62 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1439—2025 代替 SN/T 1439—2013 2025 ‑07‑25发布 2026 ‑02‑01实施国境口岸埃博拉病毒检验 Test methods for Ebola virus at frontier ports 中华人民共和国海关总署 　　发　 布SN/T 1439—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 本文件代替 SN/T 1439 —2013《国境口岸埃博拉病毒分子生物学检测方法 》 ，与SN/T 1439 —2013 相比，除结构调整和编辑性改动外 ，主要技术变化如下 ： ——删除了当前极少实验室开展的电子显微镜检查 、埃博拉病毒抗原检测 （ELISA法） 、间接免疫荧 光试验、免疫印迹试验 、基因芯片试验等 （见2013年版的 8.3） ； ——针对四种对人类有致病性的埃博拉病毒 ，更改了病毒核酸检测方法 （见附录 E、附录 C，2013年 版的 8.1和8.2） ； ——增加了世界卫生组织推荐的现场快速检测方法 （见附录 B） ； ——增加了埃博拉病毒的分离和鉴定方法 （见附录 B） 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 ：广州海关技术中心 、中国科学院武汉病毒研究所 。 本文件主要起草人 ：黄吉城、林志伟、王冰、郑夔、孙芳芳、袁帅、戴俊、师永霞、黄弋。 本文件及其所代替或废止文件的历次版本发布情况为 ： ——2004年首次发布为 SN/T 1439 —2004，2013年第一次修订 ； ——本次为第二次修订 。 ⅠSN/T 1439—2025 引 言 埃博拉出血热 ，是由丝状病毒科的埃博拉病毒导致的一种严重且往往致命的疾病 ，临床表现主要为 发热、出血和多器官损伤 。人主要通过接触病人或感染动物的体液 、排泄物、分泌物等而感染 。 在现有标准 SN/T 1439 —2013《国境口岸埃博拉病毒分子生物学检测方法 》 、SN/T 4346 .8—2015 《国境口岸烈性接触性传染病卫生检疫技术规范　第 8部分：实验室检测 》和SN/T 1231 —2010《国境口 岸埃博拉出血热和马尔堡出血热疫情监测与控制规程 》基础上进行修订 ，剔除了一些不适合口岸检测的 方法，补充完善世界卫生组织推荐的抗原快速检测方法 ，优化基因检测方法的引物和探针设计方案 。 ⅡSN/T 1439—2025 国境口岸埃博拉病毒检验 1 范围 本文件规定了国境口岸埃博拉病毒的检验对象 ，生物安全 和PCR防污染要求，标本采集 、运送与保 存，检验方法与结果报告 。 本文件适用于对国境口岸可疑病人进行埃博拉病毒检验 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文件 ，仅 该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 GB 19489　实验室　生物安全通用要求 WS/T 230　实时荧光聚合酶链反应　临床实验室应用指南 WS/T 573　感染性疾病免疫测定程序及结果报告 病原微生物实验室生物安全管理条例 人间传染的病原微生物目录 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 埃博拉病毒病 Ebola virus disease 由丝状病毒科的埃博拉病毒导致的一种严重且往往致命的疾病 ，临床表现主要为发热 、出血和多器 官损伤。人主要通过接触病人或感染动物的体液 、排泄物、分泌物等而感染 。 注： 以往称作埃博拉出血热 。 3.2 埃博拉病毒 Ebola virus 属丝状病毒科 ，为单股负链 RNA病毒。埃博拉病毒属中 ，有六个种已得到确认 ，分别为扎伊尔 、苏 丹、塔伊森林 、本迪布焦 、雷斯顿和邦巴里病毒 。其中，只有四种 （扎伊尔、苏丹、塔伊森林 、本迪布焦埃博 拉病毒）在人类中引发疾病 。 3.3 逆转录 －聚合酶链式反应 reverse transcription PCR ；RT‑PCR 聚合酶链式反应 （PCR）的一种广泛应用的变形 。在RT‑PCR 中，由一条 RNA单链转录为互补 DNA（cDNA）的过程称为 “逆转录” ，由依赖 RNA的DNA聚合酶（逆转录酶 ）完成。随后，DNA的另一 条链通过脱氧核苷酸引物和依赖 DNA的DNA聚合酶完成 ，随每个循环倍增 ，即通常的 PCR。原先的 RNA模板被 RNA酶降解，留下互补 DNA。 3.4 实时荧光 PCR　real‑time PCR 在PCR扩增过程中 ，通过荧光信号 ，对PCR进程进行实时检测 ，即通过对 PCR扩增反应中每一个 1SN/T 1439—2025 循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板的定量及定性分析 。 注： 在实时荧光 PCR反应中，引入了一种荧光化学物质 ，随着 PCR反应的进行 ，PCR反应产物不断累积 ，荧光信号 强度也等比例增加 。每经过一个循环 ，收集一个荧光强度信号 ，从而得到一条荧光扩增曲线图 。多重荧光 PCR 则是在扩增产物的检测上引入两种或多种荧光信号 ，根据不同荧光信号强度的变化反映相应检测靶标的扩增情 况，从而达到同一次 PCR扩增反应同时检测多种检测靶标的目的 。 3.5 免疫层析 immuno‑chromatography assay ；ICA 将特异性抗体 （或抗原）先固定于硝酸纤维素膜的某一区带 ，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品 后，由于毛细管作用 ，样品将沿着该膜向前移动 ，当移动至固定有特异性抗体 （或抗原）的区域时 ，样品中 相应的抗原 （或抗体）即与该抗体 （或抗原）发生特异性结合 ，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显 示一定的颜色 ，从而实现特异性的免疫诊断 。 4 检测对象 4.1 埃博拉病毒病留观病例 、疑似病例和确诊病例 。 4.2 其他申请埃博拉病毒检验的人员样本 。 5 生物安全和 PCR防污染要求 实验室生物安全应符合 GB 19489和《病原微生物实验室生物安全管理条例 》中的规定 。PCR防污 染措施按 WS/T 230的规定执行 。 埃博拉病毒相关的未经培养的感染性材料的操作应在生物安全三级 （BSL -3）实验室内进行 。 埃博拉病毒相关的灭活材料的操作在生物安全二级 （BSL -2）实验室内进行 。 埃博拉病毒感染材料的运输包装分类为 A类，UN编号为 UN 2814，采用三层包装系统 。 6 样本采集 、运送与保存 6.1 血液样本采集 6.1.1 抗凝全血样本采集方法 ：以含 EDTA抗凝剂的紫色橡胶盖无菌真空抗凝采血管采血 3 mL。采血 后立即颠倒混匀 ，使抗凝剂与血液充分混合 。采血管上应有个人信息的唯一性标识 。置4 ℃冰箱冷藏 ， 并尽快低温运送到实验室待进一步检测 。 6.1.2 口腔拭子样本采集方法 ：采集口腔拭子时 ，一只手按压被采样者下巴使嘴张开 ，取出聚酯拭 子，以旋转拭子的方式擦拭脸颊双内侧 ，收集唾液和脱落细胞 ，取出后将拭子头浸入病毒运输液中 ， 折断拭子尾部 ，弃去，旋紧管盖并做好标识 。置4 ℃冰箱冷藏 ，并尽快低温运送到实验室待进一步 检测。 6.2 样本的运送与保存 样本于 2 ℃~ 8 ℃下运送至实验室检测 。上述样本如 72 h内不能送到实验室 ，应置于 -70 ℃保 存。样本运输应按照相关生物安全规定 ，采取三层包装系统 A类包装，低温冷藏运输 ，避免反复 冻融。 2SN/T 1439—2025 7 检验方法与结果报告 埃博拉病毒核酸检验的样本处理及病毒 RNA提取按附录 A进行；胶体金免疫层析法快速检验埃博 拉病毒抗原及结果报告按附录 B进行；实时荧光 RT‑PCR 检验及结果报告按附录 C进行；埃博拉病毒 病毒分离鉴定及结果报告按附录 D进行；常规 RT‑PCR 检验、测序分析及结果报告按附录 E进行。 3SN/T 1439—2025 附 录 A （规范性 ） 埃博拉病毒核酸检验的样本处理及病毒 RNA提取 A.1 核酸提取的准备 A.1.1 核酸提取试剂 QIAamp Viral RNA Mini Kit 试剂盒1） 、TRIzol®LS试剂2） 、无水乙醇 。 A.1.2 核酸提取设备及消耗品 下面仅列出埃博拉病毒核酸提所需的常用仪器设备及消耗品 ： ——移液器 （1 000 μL） ； ——带滤芯的移液器 Tip（1 000 μL） ； ——移液器 （200 μL） ； ——带滤芯的移液器 Tip（200 μL） ； ——一次性巴氏吸管 （已灭菌） ； ——核酸提取试剂盒配套 2 mL收集管； ——核酸提取试剂盒配套过滤柱 ； ——5 mL Eppendorf 离心管； ——离心管架 ； ——镊子； ——样本转移盒 ； ——螺旋盖 50 mL离心管； ——样本保存管 。 A.1.3 消毒防护用品及其他 下面仅列出埃博拉病毒消毒防护等用品 ： ——废液桶 （含5 000 mg/L有效氯消毒液 ） ； ——吸水垫 ； ——记录纸和记录笔 ； ——记号笔 ； ——计时器 ； ——纱布（泡在 1 000 mg/L有效氯消毒液中 ） ； ——1 000 mg/L有效氯消毒液 （装在喷壶中 ） ； ——吸水纸 ； ——去离子水 （装在喷壶中 ） ； 1） 给出这一信息是为了方便本标准