中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口危险化学品　海洋鱼类胚胎 急性毒性试验 Import and export of dangerous chemicals —Marine fish embryo acute toxicity test 中华人民共和国海关总署 　　发　 布ICS 13.300 CCS A 80 SN/T 5913—2025 2025 ‑07‑25发布 2026 ‑02‑01实施SN/T 5913—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 ：中华人民共和国宁波海关技术中心 、深圳市检验检疫科学研究院 、宁波检验检疫科 学技术研究院 （宁波国检贸易便利化服务中心 ） 。 本文件主要起草人 ：刘汉伟、陈有为、邹小红、陈丹超、乐琪君、章跃龙、陈俊彬。 ⅠSN/T 5913—2025 进出口危险化学品　海洋鱼类胚胎 急性毒性试验 1 范围 本文件界定了进出口危险化学品海洋鱼类胚胎急性毒性试验的术语 和定义，规定了进出口危险化学 品海洋鱼类胚胎急性毒性试验的受试物信息 、方法原理 、试验准备 、质量控制 、数据分析和试验报告 ，描述 了相应的 试验方法。 本文件适用于测试和评价能在水中形成均一溶液的化学品对海洋鱼类胚胎的急性毒性 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 21845　化学品　水溶解度试验 GB/T 21852　化学品　分配系数 （正辛醇 -水）高效液相色谱法试验 GB/T 21853　化学品　分配系数 （正辛醇 -水）摇瓶法试验 GB/T 21855　化学品　与 pH有关的水解作用试验 GB/T 22052　用液体蒸气压力计测定液体的蒸气压力　温度关系及初始分解温度的方法 GB/T 22228　工业用化学品　固体及液体的蒸气压在 10-1 Pa至105 Pa范围内的测定 　静态法 GB/T 22229　工业用化学品　固体及液体的蒸气压在 10-3 Pa至1 Pa范围内的测定 　蒸气压平 衡法 OECD化学品测试导则 No.104　蒸气压 （Vapour Pressure ） OECD化学品测试导则 No.112　水中解离常数 （Dissociation Constants in Water ） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 静态试验 static test 以整个试验过程中试验介质不更换不流动的方式进行的试验 。 3.2 半静态试验 semi‑static test 以定期（如24 h）更换试验介质的方式进行的试验 。 3.3 半数效应浓度 concentration for 50% of maximal effect EC50 引起 50%的鱼类胚胎死亡的受试物浓度 ，以EC 50表示。 1SN/T 5913—2025 3.4 酸度系数值 acidity coefficient 酸离解常数 pKa 一个特定的平衡常数 ，代表一种酸离解氢离子的能力 。 4 受试物信息 受试物的以下信息有助于试验设计 ： a）按照 GB/T 21845方法测定的水中溶解度 ； b）有机溶剂中的溶解性 ； c）按照 GB/T 22052、GB/T 22228、GB/T 22229或OECD化学品测试导则 No.104方法测定的蒸 气压和亨利常数 ； d）受试物结构式 ； e）受试物纯度 ； f）按照 OECD化学品测试导则 No.112方法测定的解离常数 pKa值； g）按照 GB/T 21855方法测定的水解作用 ； h）光解； i）按照 GB/T 21852或GB/T 21853方法测定的正辛醇 -水分配系数 ； j）受试物的物理性质及来源 （批次、批号） 。 5 方法原理 在规定的试验条件下 ，将海洋鱼类胚胎在不同浓度的受试物水溶液中暴露 96 h，每天记录胚胎的孵 化和毒性反应症状 ，根据胚胎存活与死亡数据计算受试物的 EC 50值。 6 试验准备 6.1 仪器设备 6.1.1 pH计：测量范围 0~14，最小分度 0.1 pH单位。 6.1.2 盐度计：测量范围 0‰ g/ 1 000 g~100‰ g/ 1 000 g，测量精度 ±2‰，温度补偿范围 10 ℃~ 40 ℃。 6.1.3 溶解氧测定仪 ：测量范围 0.05 mg/L~ 20.0 mg/L或1%~ 200%饱和度，0 mg/L~ 8 mg/L范围内 测量精度 ±0.1 mg/L或±10%。 6.1.4 电子天平 ：量程不低于 1 000 g，最小分度值 0.01 g。 6.1.5 电子天平 ：量程不低于 50 g，最小分度值 0.1 mg。 6.1.6 相关化学分析仪器 ：如高效液相色谱仪 、高效液相色谱质谱联用仪 、电感耦合等离子质谱仪 、气相 色谱仪、气相色谱质谱联用等 。 6.1.7 恒温培养箱 ：20 ℃下控制精度为 ±1 ℃。 6.1.8 体视显微镜 ：至少可放大 30倍。 6.2 材料 6.2.1 化学惰性材料制成的鱼缸 ，容量应满足试验种鱼的推荐承载量 。 2SN/T 5913—2025 6.2.2 产卵网箱 ：化学惰性材料制成 。 6.2.3 试验容器 ：胚胎培养板 （如：标准 6孔板） 。 6.2.4 用于覆盖胚胎培养板的盖子或封口膜 。 6.2.5 用于收集鱼卵的宽口吸液管 。 6.2.6 玻璃器皿 ：烧杯、容量瓶、结晶皿等玻璃器皿 。 6.3 试验容器 使用玻璃或聚苯乙烯制成的试验容器 （例如，每孔容积为 2.5 mL~ 5 mL的6孔板） 。若样品对聚苯 乙烯有吸附作用 ，应采用惰性材料 （玻璃）制成的容器 。试验容器在培养箱中的位置应随机摆放 。 6.4 试验生物 6.4.1 亲鱼选择 挑选来源明确 ，有良好受精率记录的亲鱼用作产卵 。产卵前，亲鱼无肉眼可观察的感染或疾病 ，且 2个月以上未经过任何药物处理 （急性或预防 ） 。推荐使用表 1所列的鱼种 ，若使用其他鱼种 ，应列明试 验条件。 表1　推荐使用的鱼类种鱼 鱼种 黑鲷（Acanthopagrus schlegelii ）驯养温度 /℃ 18~22光暗比（h∶h） 12∶12饵料 白对虾配合饲料 /丰年虾活体 /冷冻红虫 6.4.2 亲鱼驯养条件 亲鱼驯养条件如下 。 ——水：人工海水 ，盐度 20‰~ 30‰。 ——光照周期 ：明暗比为 12 h∶12 h。 ——温度：20 ℃± 2 ℃。 ——溶解氧：≥80%饱和值。 ——推荐承载量 ：1尾/100 L水。 6.4.3 产卵 试验前一天将数对亲鱼按照雌雄比为 1∶1（或1∶2）在产卵箱配对 ，受精完成后 ，收集水体表面鱼类受 精卵备用 。 6.4.4 鱼卵的分化与选择 在20 ℃± 2 ℃温度条件下 ，受精卵在约 15 min后开始第一次分裂 ，并且连续分裂至 4、8、16和32细 胞期。采用至少可放大 30倍的体视显微镜观察 ，选择受精且无明显不规则分裂 （例如，不对称、囊泡形 成）或破损的鱼卵进行试验 。选择试验数目 2倍的鱼卵进行镜检 ，挑选出合格受精卵备用 ，并计算其百分 率。使用受精率 ≥70%时亲鱼所产的鱼卵 。鱼卵在受精后 3 h内暴露于试验溶液中 。 6.5 样品处理和保存 6.5.1 储备液 电子天平称取所需质量的受试物溶于一定体积的海水中 ，混匀配制储备液 。低水溶性物质的储备液 3SN/T 5913—2025 或试验溶液可通过搅拌 、超声分散或其他合适的物理方法配制 。避免使用助溶剂 ，如有必要 ，应在制备母 液时使用 ，溶剂在试验溶液中的终浓度不超过 0.1 mL/L，且每个试验容器中的溶剂浓度应一致 。当使用 助溶剂时 ，应设助溶剂对照组 。溶剂对照组应对胚胎的孵化时间和存活率无明显效应 ，且无其他不利 影响。 6.5.2 试验溶液 如果加入样品后 ，试验溶液的 pH有明显变化 ，则调节样品储备液的 pH，使其接近空白对照组海水 的pH，但不能使样品浓度明显改变 ，或发生化学反应或样品沉淀 。推荐使用盐酸 （HCl）和氢氧化钠 （NaOH）调节 pH。 7 试验 7.1 暴露条件 暴露条件包括以下内容 。 ——持续时间 ：96 h。 ——光照：光暗比 12 h∶12 h。 ——温度：18 ℃~ 22 ℃。 ——盐度：28‰~ 33‰。 ——pH：7.6~8.2。 ——溶解氧：不小于 80%饱和值。 7.2 胚胎数量 每个试验浓度组不少于 20只受精胚胎 。 7.3 预试验 选取 4组~5组等比或等间距浓度 ，如1 mg/L、10 mg/L、100 mg/L及空白对照组 ，每个组放置 10颗受精卵进行试验 ，每块 6孔板均需设置板内空白对照 ，以确定全部死亡和存活的浓度范围 。至少每 24 h观察 1次胚胎死亡数和其他可观察效应 ；从48 h开始，每24 h记录 1次对照组和样品组胚胎孵 化数。 7.4 正式试验 根据预试验结果 ，在全部死亡的最低浓度与 96 h无可观察毒性效应的最高浓度之间至少设置 5个 浓度组（尽可能包括这两个浓度 ） ，并以几何级数分布 。浓度间隔系数应 ≤2.2。