ICS 65.120 CCS B 46 团 体 标 准 饲料原料中膳食纤维的测定 Determination of dietary fiber in feed ingredients 2024-12-31发布 2024-12-31实施 中国饲料工业协会 发 布 T/CFIAS 6013—2024 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CFIAS 6013—2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 中国饲料工业协会团体标准技术委员会提出并归口 。 本文件起草单位： 湖北国正质量技术服务有限公司、浙江国正检测技术有限公司、武汉轻工大学、 安徽赛如分析检测科技有限公司、福建倍思达生物有限公司、杭州康德权饲料有限公司、福建省厦门市 环境监测中心站 。 本文件主要起草人： 许丰、杨巧玲、代兵、李雷、蒋宗莉、丁斌鹰、李俊辉、臧爱香、黄灿晖、黄 庆祥、陈仕怡、吴松树、李浙烽、侯嘉、刘丽华、严天成、陈月莹、刘静怡 。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CFIAS 6013—2024 1 饲料原料中膳食纤维的测定 1 范围 本文件规定了饲料原料中膳食纤维的测定方法。 本文件适用于植物源性饲料原料中膳食纤维 （不包括部分或全部溶于乙醇的低聚糖、 抗性麦芽糊精、 抗性淀粉等）的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法 GB/T 6438 饲料中粗灰分的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 膳食纤维 dietary fiber 植物源性饲料中的非淀粉多糖类碳水化合物聚合物，包括纤维素、半纤维素、果胶、木质素等。 4 原理 试样经酶解消化去除蛋白质和淀粉后，乙醇沉淀、抽滤，残渣用乙醇和丙酮洗涤后干燥，扣除残渣 中的粗蛋白质和粗灰分。 5 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 5.1 水：GB/T 6682 ，三级。 5.2 丙酮。 5.3 78%乙醇溶液：取 821 mL 95% 乙醇，用水稀释至 1 L，混匀。 5.4 240 g/L氢氧化钠溶液：称取 24 g氢氧化钠 ,用水溶解至 100 mL，混匀。 5.5 40 g/L氢氧化钠溶液：称取 4 g氢氧化钠 ,用水溶解至 100 mL，混匀。 5.6 重铬酸钾洗液：称取 100 g重铬酸钾，用 200 mL水溶解，加入 1 800 mL 浓硫酸混合。 5.7 MES-TRIS缓冲液（ 0.05 mol/L ）：称取 19.52 g 2 -（N-吗啉代）乙烷磺酸和 12.2 g三羟甲基氨 基甲烷，用 1.7 L水溶解（根据室温用 240 g/L氢氧化钠溶液调 pH，20 ℃时调pH为8.3，24 ℃时调 pH为8.2，28 ℃时调pH为8.1；20 ℃～28 ℃之间其他室温用插入法校正 pH），加水稀释至 2 L。 5.8 乙酸溶液（ 3 mol/L）：取172 mL冰乙酸,加入700 mL水，混匀后用水定容至 1 L。 5.9 盐酸溶液（ 1 mol/L）：取8.33 mL盐酸，用水稀释至 100 mL，混匀。 5.10 盐酸溶液（ 2 mol/L）：取167 mL盐酸，用水稀释至 1 L，混匀。 5.11 热稳定α -淀粉酶： 0 ℃～5 ℃保存，酶的活性要求及判定标准详见附录 A。 5.12 淀粉葡萄糖苷酶： 0 ℃～5 ℃保存，酶的活性要求及判定标准详见附录 A。 全国团体标准信息平台 T/CFIAS 6013—2024 2 5.13 蛋白酶： 0 ℃～5 ℃保存，酶的活性要求及判定标准详见附录 A。 5.14 蛋白酶溶液（ 50 mg/mL ）：称取 2.5 g蛋白酶（ 5.13），用50 mL MES -TRIS缓冲液（ 5.7）配成 每毫含50 mg的蛋白酶溶液，涡旋振荡 5 min。临用现配。使用前于 0 ℃～5 ℃暂存。 酸洗硅藻土：称取硅藻土约 200 g，置于1 L烧杯中，加入 600 mL的2 mol/L盐酸溶液（ 5.10）浸泡 过夜，过滤，用水洗至滤液为中性，置于 550 ℃±20 ℃马弗炉中灼烧后备用。 6 仪器设备 6.1 分析天平：精度 0.1 mg。 6.2 马弗炉：控温范围 550 ℃±20 ℃。 6.3 干燥箱：控温范围 103 ℃±2 ℃。 6.4 pH计：精度± 0.1。 6.5 恒温振荡水浴箱：控温范围 60 ℃～100 ℃。 6.6 坩埚：G2玻璃砂芯坩埚。 注： 清洗后的坩埚在马弗炉中 550 ℃±20 ℃ 灰化6 h，炉温降至 130 ℃以下取出，于重铬酸钾洗液（ 5.6）中室温 浸泡2 h，用水冲洗干净 ，再用15 mL丙酮 （5.2） 冲洗后风干。 用前 ，加入约1.0 g酸洗硅藻土 （ 5.15），103 ℃±2 ℃ 烘干至恒重，取出 ，置于干燥器中 ，冷却至室温迅速称量。记录处理后坩埚质量 （mG），精确到0.1 mg。 7 样品 按GB/T 20195 制备样品。至少 200 g，充分混匀，粉碎使其全部通过 0.425 mm 的分析筛，装入密闭 容器中，备用。 注1：当粗脂肪含量 ≥10%，需进行脱脂处理，处理方式详见附录 B。 注2：一般情况下试样无需脱糖处理，如试样因糖含量较高导致黏度过大，影响后续酶解、抽滤效果，宜采用脱糖处 理，处理方式详见附录 B。 8 试验步骤 8.1 试样溶液制备 平行做两份试验。每份试验准确称取 2份试样（分别为 m1和m2）约1 g±0.02 g（精确至 0.000 1g）， 分别置于 400 mL～600 mL高脚烧杯中，加入 0.05 mol/L 的MES-TRIS缓冲液（ 5.7）40 mL，搅拌均匀至试 样完全分散在缓冲液中。 8.2 酶解 8.2.1 热稳定 α-淀粉酶酶解 向每份试样液中分别加入 50 μL热稳定α-淀粉酶液（ 5.11）缓慢搅拌 ，加盖铝箔，置于 95 ℃～ 100 ℃恒温振荡水浴箱中持续振摇 ，当温度升至 95 ℃开始计时， 反应 35 min。 将烧杯取出 ，冷却至60 ℃， 打开铝箔盖，用刮勺轻轻将附着于烧杯内壁的环状物以及烧杯底部的胶状物刮下，用 10 mL水冲洗烧杯 壁和刮勺。 注： 如试样中抗性淀粉含量较高 （＞40%），可延长热稳定 α-淀粉酶酶解时间 90 min，如必要也可另加入 10 mL二甲 基亚砜帮助淀粉分散。 8.2.2 蛋白酶酶解 将每份试样液（ 8.2.1）置于60 ℃±1 ℃ 恒温振荡水浴箱中，向每个烧杯加入 100 μL蛋白酶溶液 （5.14），盖上铝箔，开始计时，持续振摇，反应 30 min。打开铝箔盖 ，边搅拌边加入 5 mL 3 mol/L 乙 酸溶液（ 5.8），控制试样温度保持在 60 ℃±1 ℃ 。用40 g/L氢氧化钠溶液（ 5.5）或1 mol/L盐酸溶液 （5.9）调节试样液 pH至4.5±0.2 。 注： 应在60 ℃±1 ℃ 时调pH，因为温度降低会使 pH升高。同时注意进行空白样液的 pH测定，保证空白样和试样液 的pH一致。 8.2.3 淀粉葡萄糖苷酶酶解 全国团体标准信息平台 T/CFIAS 6013—2024 3 边搅拌边向每个烧杯中加入 100 μL 淀粉葡萄糖苷酶液（ 5.12），盖上铝箔，继续于 60 ℃±1 ℃ 恒温振荡水浴箱中持续振摇，反应 30 min。 8.3 膳食纤维的测定 8.3.1 沉淀 向每份试样酶解液（ 8.2.3）中，按乙醇与试样液体积比 4:1的比例加入预热至 60 ℃±1 ℃的95%乙 醇（预热后体积约为 225 mL），取出烧杯，盖上铝箔，于室温条件下沉淀 1 h。 8.3.2 抽滤 取已经处理并恒重的坩埚（ 6.6），用15 mL 78%乙醇（5.3）润湿硅藻土并展平 ，接上真空抽滤装 置，抽去乙醇使坩埚中硅藻土平铺于滤板上。将试样乙醇沉淀液（ 8.3.1）缓慢转移入坩埚中抽滤，用 刮勺和78%乙醇（5.3）将高脚烧杯中所有残渣转至坩埚中。用 78%乙醇（5.3）15 mL洗涤残渣 2次。 8.3.3 残渣测定 8.3.3.1 残渣测定： 用 95%乙醇15 mL洗涤残渣 2次， 丙酮 15 mL 洗涤残渣 2次，抽滤去除洗涤液后， 将坩埚连同残渣在 103 ℃±2 ℃烘干至恒重。将坩埚置干燥器中冷却至室温迅速称量，称量包括处理 后坩埚质量及残渣质量 （mGR），精确至 0.1 mg。减去处理后坩埚质量 ，计算试样残渣质量 （mR1和mR2）。 8.3.3.2 粗蛋白质质量的测定：取 1份试样残渣（ R1）按GB/T 643