ICS 65.100 LY B 65 中华人民共和国林业行业标准 LY/T2906—2017 美国白蛾核型多角体病毒杀虫剂 Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus insecticide 2017-10-27发布 2018-01-01实施 国家林业和草原局 发布 LY/T2906—2017 目 次 前言 范围 1 2 规范性引用文件 术语和定义 3 3.1 美国白蛾核型多角体病毒杀虫剂 3.2 毒力 3.3 菌落 4产品指标 4.1 母药 4.2 制剂 5 检测方法 5.1 采样 5.2 仪器设备、耗材 5.3 定性检测 5.4 定量检测 5.5 外观 5.6 水分 5.7 细度 5.8 pH值. 5.9 湿润时间 5.10 悬浮率， 5.11 分散性 5.12 持久起泡性量 5.13 菌落总数… 5.14 热贮稳定性· 6 验收、标志、标签、贮运、保质期 6.1 验收 6.2 标志、标签、包装 6.3 贮运 6.4 保质期 附录A（规范性附录） 美国白蛾核型多角体病毒生物学特征 附录B（资料性附录） 仪器设备及耗材目录 附录C（资料性附录） 美国白蛾核型多角体病毒杀虫剂产品定性检测方法 附录D（资料性附录） 美国白蛾核型多角体病毒杀虫剂产品定量检测方法· 10 LY/T 2906—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所提出。 本标准由全国林业有害生物防治标准化技术委员会（SAC/TC522)归口。 本标准起草单位：中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所、北京市林业保护站。 本标准主要起草人：张永安、曲良建、王玉珠、段彦丽、王青华、颜容、王金利。 LY/T2906—2017 美国白蛾核型多角体病毒杀虫剂 1范围 本标准规定了美国白蛾核型多角体病毒杀虫剂产品指标、检测方法和其他要求等内容 本标准适用于生产美国白蛾核型多角体病毒母药、可湿性粉剂和悬浮剂，不适用于加有化学农药和 其他类型杀虫活性物质的复合制剂。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T1600—2001农药水分测定方法 GB/T1601一1993农药pH值的测定方法 GB/T1604 商品农药验收规则 GB/T1605—2001商品农药采样方法 GB3796农药包装通则 GB4789.2—2016食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 GB/T5451 农药可湿性粉剂湿润性测定方法 GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T14825 农药悬浮率测定方法 GB/T16150—1995 农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法 GB/T28137—20112 农药持久性测定方法 HG/T2467.13一2013农药水分散粒剂产品标准编写规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 美国白蛾核型多角体病毒杀虫剂hyphantriacuneanucleopolyhedrovirusinsecticide 美国白蛾核型多角体病毒（Hyphantriacuneanucleopolyhedrovirus，HcNPV）是以美国白蛾为宿 主的一类双链环状DNA病毒，隶属于杆状病毒科α杆状病毒属，其生物学特征描述及电镜照片见附录A。 美国白蛾核型多角体病毒通过活体或细胞培养扩增后经加工而成的一种微生物农药称为美国白蛾核型 多角体病毒杀虫剂。 3.2 毒力 virulence 美国白蛾核型多角体病毒引起宿主发病的能力，或衡量该病毒引起宿主致病的程度。 3.3 客colony 菌落 细菌和真菌划线接种于固体培养基表面生长繁殖一段时间后形成的肉眼可见的聚集形态。 1 LY/T2906—2017 产品指标 4 4.1 母药 4.1.1 有效成分 美国白蛾核型多角体病毒杀虫剂的有效成分以病毒多角体为单位计数，含量不低于101°PIB/mL 或101°PIB/g。 4.1.2 外观 灰白色。 4.1.3 生测效价 生测效价（标准品LCso/试样LCso）不低于80%。 4.1.4 pH值 5.0~7.0。 4.1.5 细度 母药细度≥90%通过75μm（即200目筛）。 4.1.6 菌落总数（CFU/mL) 菌落总数不高于5X106CFU/mL。 4.2 制剂 制剂项目指标见表1。 表1 美国白蛾核型多角体病毒可湿性粉剂和悬浮剂控制指标 项目 可湿性粉剂指标 悬浮剂指标 外观 灰白色均匀粉状物 浅褐色液体 美国白蛾核型多角体病毒含量/[PIB/g(mL)] 3.0X109 3.0×109 > 生测效价（标准品LCso/试样LCso）/% 80.0 80.0 水分/% ≤ 4.0 70.0 > 细度（通过75μm标准筛）/% 90.0 90.0 pH值 5.0~8.0 5.0~8.0 湿润时间/min ≤ 3 悬浮率/% 80.0 80.0 分散性/% > 75.0 一 持久起泡性(1min后）/mL ≤ 25.0 15.0 ≤ 菌落数/[CFU/g(mL)] 5.0X105 5.0X106 热贮稳定性(初始死亡率-热贮死亡率)/% 20.0 20.0 2 LY/T2906—2017 5 检测方法 除另有说明，本检测方法中所用试剂均为分析纯，所述溶液均为水溶液。 5.1采样 按照GB/T1605一2001中“商品原药采样”方法进行。用随机数表法确定抽样的包装件，母药最终 抽样量应不少于20mL或20g，可湿性粉剂最终抽样量不少于50g，悬浮剂最终抽样量不少于 200 mL。 5.2 仪器设备、耗材 检测方法中所使用的仪器设备及耗材清单见附录B。 5.3定性检测 美国白蛾核型多角体病毒的定性检测，可根据实际情况在PCR扩增和限制性内切酶图谱两种方 法中选择其中之一即可。 5.3.1限制性内切酶法 5.3.1.1方法概述 提取待测样品DNA，利用限制性核酸内切酶切割病毒DNA，以琼脂糖凝胶电泳分离比较标准样 品的病毒DNA与待测样品中的病毒DNA酶切图谱，其酶切图谱应完全一致。 5.3.1.2 检测方法 具体检测方法见附录C中的限制性内切酶法。 5.3.2 2PCR扩增法 5.3.2.1方法概述 提取待测样品DNA，设计针对美国白蛾核型多角体病毒的特异性引物进行PCR扩增，以琼脂糖凝 胶电泳分离PCR产物，通过与标准品比较达到定性检测的目的。 5.3.2.2检测方法 具体检测方法见附录C中的PCR扩增法。 5.4定量检测 5.4.1美国白蛾核型多角体病毒含量的测定 具体检测方法见附录D中的血球计数板法。 5.4.2美国白蛾核型多角体病毒生测效价的测定 具体检测方法见附录D中生物活性检测。 5.5外观 3 LY/T2906—2017 见机械杂质，悬浮剂为浅褐色液体。 5.6水分 按GB/T1600一2001的“共沸蒸馏法”进行测定。 5.7 7细度 按GB/T16150一1995中“湿筛法”进行测定。 5.8 BpH值 按GB/T1601一1993中的pH计法进行测定。 5.9 湿润时间 按GB/T5451中规定进行测定。 5.10 悬浮率 按GB/T14825中规定进行测定。 5.11分散性 按HG/T2467.13—2013中规定进行。 5.12 持久起泡性量 按QB/T28137—2011中规定进行。 5.13菌落总数 按GB/T4789.2一2016中“菌落总数测定方法”进行测定。 5.14热贮稳定性 5.14.1方法概述 通过加热贮存试验，使产品加速老化，预测常温贮存产品性能的变化， 5.14.2 2测定方法 用蒸馏水将美国白蛾核型多角体病毒待测样品配制成1.0X10°PIB/mL的病毒悬浮液后均匀涂布 在人工饲料表面上，晾干后饲喂4龄的美国白蛾幼虫，并设置清水对照。每个处理用虫60头，重复 3次。具体过程参照5.4.2中的方法。试验后第2d开始观察美国白蛾幼虫的死亡情况，10d后计算其 校正死亡率，得到试样的初始校正死亡率。 同时，将同一批次的美国白蛾核型多角体病毒可湿性粉剂待测样品分装入不透明的铝塑封袋中， 每袋1g，用塑封机封口密闭，放入40℃士2℃的恒温箱中，热贮30d。热贮试验结束后，从恒温箱中取 出试样，采用上述同样的方法进行生物测定，得到热贮试样的校正死亡率。对于美国白蛾核型多角体病 毒悬浮剂待测样品，采用注射器取同一批次试样约30mL，注入洁净的安瓶中（避免试样接触瓶颈）。 置此安部于冰盐浴中制冷，用高温火焰封口（避免溶剂挥发），至少封3瓶，分别称量。将封好的安置 于金属容器内，再将金属容器放人40℃土2℃恒温箱（或水浴）。放置30d后取出，冷至室温，将安外 部擦净后分别称量，质量未发生变化的试样于24h内采用同样的方法对试样进行生物测定，得到其热 4