ICS 67.080.10 QB 分类号：X50 备案号：51146-2015 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T 4854-2015 橙汁中总糖和果肉的稳定碳同位素比值 （13℃/12C）测定方法 稳定同位素比值质谱法 Determination of the carbon isotope ratio (13c/l?c) of total sugar and pulp 2015-07-14发布 2016-01-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T48542015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国食品发酵标准化中心归口。 本标准起草单位：中国食品发酵工业研究院、农夫山泉股份有限公司、康师傅中央研究所。 本标准主要起草人：钟其顶、徐胜、章鹏、王道兵。 本标准为首次制定。 一 QB/T48542015 橙汁中总糖和果肉的稳定碳同位素比值（13℃/12c）测定方法 稳定同位素比值质谱法 1范围 本标准规定了应用稳定同位素比值质谱法测定橙汁中总糖和果肉的稳定碳同位素比值（13C/12C）的 方法。 本标准适用于橙汁和橙汁饮料中总糖和果肉的稳定碳同位素比值（13C/12c）的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性 与再现性的基本方法 GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 3符号和缩略语 下列符号和缩略语适用于本文件。 13c/2C：稳定碳同位素比值，是稳定碳同位素13c与12c的原子丰度之比。 l3C：样品的稳定碳同位素比值相对于参考物质的稳定碳同位素比值的千分差。 PDB：美国南卡罗来纳州白垩纪皮狄组层位中的拟箭石化石（Pee-DeeBelemnite），是稳定碳同位 素比值的国际基准物质。 IRMS：稳定同位素比值质谱仪（IsotopeRatioMassSpectrometry）。 4原理 橙汁中的总糖或果肉在元素分析仪中燃烧转化为二氧化碳气体，用IRMS测定燃烧产生的二氧化碳 中的稳定碳同位素比值，再通过公式计算得出总糖或果肉的s3C。 5试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682一2008规定的一级水。 5.1氢氧化钙。 5.20.1mol/L硫酸溶液：量取5.56mL浓硫酸（密度1.84g/cm²），缓缓注入约700mL水中，冷却后 稀释至1000mL。 5.3氧气（02）：纯度不应小于99.99%。 5.4氢气（He）：纯度不应小于99.999%。 5.5丙酮。 5.6参考物质：可选择国际原子能机构或全国标准物质管理委员会认可的，或其他获得认可的同类参 考物质，参见附录A。 6仪器 6.1 元素分析仪。 6.2IRMS：分析内精度优于0.05%o，配套连续流进样接口。 1 QB/T4854—2015 6.3离心机：配套50mL离心管 6.4磁力搅拌器。 6.5恒温水浴锅。 6.6pH计。 6. 7 分析天平：感量0.01g 6.8 电子天平：感量0.01mg。 6.9冷冻干燥机。 6.10 锡舟。 7 分析步骤 7. 1 橙汁中总糖和果肉初分离 量取30mL样品于离心管d6.3）中，室温条件以3500r/min离心10min，上清液和沉淀物分别保 存，待用。 7.2纯化总糖 将7.1中得到的上清液转移至烧杯中，加入1.4g氢氧化钙，用磁力搅拌器（6.4）搅拌均匀后，置 于90℃水浴（6.5）中加热3min：将烧杯中的混合物转移至离心管（6.3）史，室温下以3500r/min 离心3min席弃去沉淀，用-0.1mol/L硫酸溶液（5.2）调整上清液至pH为5.0左右：将酸化后的上清液 于4℃下静置15h～24h，保存上清液，待用。 7.3纯化果肉 7.3.1除去果肉中的残糖 量取30mL水复溶7.1中的沉淀物，用磁力搅拌器搅拌均匀后以3500r/min离心10min，弃去上 清液并保留沉淀物。该过程共进行3次 7.3.2除去果肉中的脂质 量取30mL丙酮复溶7.3.1中的沉淀物，用磁力搅拌器搅拌均匀后以3500r/min离心10min，弃去 上清液并保留沉淀物。该过程共进行3次。将沉淀物中残留的丙酮挥发干净后保存，待用。 7.4冷冻干燥 将总糖上清液（7.2）和果肉沉淀物（7.3.2）置于冷冻干燥机（6.9）中进行冷冻干燥处理，分别保 存总糖和果肉的粉末，待测。 7.5测定 7.5.1样品及参考物质准备 分别称取0.1mg ~0.2mg（或根据元素分析仪的性能进行选择）总糖粉末（7.4）、果肉粉末（7.4） 和参考物质（5.6） 开相互独立的锡舟中，密封待用。 7.5.2分析序列 采用两点标准漂移校正模式安排分析序列，每个分析序列应同时测定橙汁样品的总糖和果肉粉末 （7.4）以及参考物质，参考物质的比例一般为样品个数的10%～20% 7.5.3样品测定 调整元素分析仪和IRMS至工作状态，根据已设定的分析序列（7.5.2）进行测定 8计算 8.1分析结果的表述 总糖或果肉样品的稳定碳同位素组成以其对参考物质中相应同位素比值的千分差（记为%）表示， 按公式（1）计算： 2 QB/T4854—2015 (1) ("C/2C)RM 式中： 样品的C/12c测定值相对于参考物质的13C/C测定值的千分差 ("C/C)sA 样品的！ 13c/12c测定值； (3C/C)RM 参考物质的13c/12C测定值。 结果保留两位小数 8.2结果计算 所测的稳定碳同位素组成结果应校准至国际基准PDB值，按公式（2）计算： $"CpDBSCRM+0"CRM-PD+SCRM×SCRM-PDB×1000 .(2) 式中： s13C 样品的C/2C测定值相对于PDB的c/12C-测定值的干分差： 样品的c/℃测定值相对于参考物质的c/℃测定值的千分差； SI3CRM-PDB 参考物质的C/2C测定值相对PDB的C/C测定值的于分差 结果留两位小数。 精密度 9 数据的精密度按照GB/T6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以95%的可信度计算。 9.1重复性 在重复性条件下，两次独立测试所得结果的绝对差值不应超过重复性限（r）：橙汁中总糖r=0.26%o， 橙汁中果肉1=0.32%。如果差值超过重复性限（r），应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。 9.2再现性 在再现性条件不，两次独立测试所得结果的绝对差值不应超过再现性限（R）：橙汁中总糖R=0.66%o， 橙汁中果肉R=1.08% QB/T4854-2015 附录A （资料性附录） 参考物质示例 表 A. 1 参考物质 名称 13CpDB/%0 机构 美国南卡罗来纳州白垩 PDB 纪皮狄组层位中的拟箭 0 国际原子能机构 石化石 蔗糖 IAEA-CH-6 10.49±0.03 USGS40 谷氨酸 26.39±0.04 美国国家标准与技术研究院 GBW04407 炭黑 22.43±0.07 全国标准物质管理委员会 GBW04408 炭黑 36.91±0.10 4