SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 0800.4—2015 代替SN/T0800.4—1999 出口粮食、饲料检验 第4部分：尿素酶活性测定方法 Inspection of cereals and feedstuffs for export- Part 4:Determination of urease activity 2015-12-04发布 2016-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T0800.4—2015 前 創言 SN/T0800系列标准分为以下若干部分： SN/T0800.1 进出口粮油、饲料检验 抽样和制样方法 SN/T0800.2 进出口粮食、饲料 粗脂肪检验方法 SN/T0800.3 进出口粮食、饲料 粗蛋白质检验方法 SN/T0800.4 出口粮食、饲料检验 尿素酶活性测定方法 SN/T0800.5 进出口粮食、饲料 淀粉含量检验方法 SN/T0800.6 进出口粮食、饲料 灰分含量检验方法 SN/T0800.7 出口粮食、油料及饲料不完善粒检验方法 SN/T0800.8 进出口粮食、饲料 粗纤维含量检验方法 SN/T0800.9 进出口粮食、饲料 单宁含量检验方法 SN/T0800.10 进出口粮食、饲料 吸水率检验方法 SN/T0800.11 进出口粮食、饲料 含盐量检验方法 SN/T 0800.12 进出口粮食、饲料 整碎组成检验方法 SN/T0800.13 进出口粮食、饲料 加工精度检验方法 SN/T0800.14 进出口粮食、饲料 发芽势、发芽率检验方法 SN/T0800.15 进出口粮食、饲料 粒型、粒度及粗细度检验方法 SN/T0800.16 进出口粮食、饲料 粘度检验方法 SN/T0800.17 进出口粮食、饲料 类型纯度及互混检验方法 SN/T0800.18 进出口粮食、饲料 杂质检验方法 SN/T0800.19 进出口粮食、饲料 水分及挥发物检验方法 本部分是SN/T0800的第4部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分代替SN/T0800.4—1999《进出口粮食、饲料 尿素酶活性测定方法》。本部分与SN/T0800.4- 1999相比，主要技术变化如下： 定义尿素酶活性； 增加水的要求标准； 盐酸中和法中添加选用指示剂滴定； 一增加结果重复性要求。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局。 本部分主要起草人：刘鹏、孙瑶、曾繁华、邓立育、胡坤、刘新亮。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T0800.4—1999。 SN/T0800.4—2015 出口粮食、饲料检验 第4部分：尿素酶活性测定方法 1范围 SN/T0800的本部分规定了尿素酶活性的测定方法， 本部分适用于出口粮食、饲料用大豆粘、饼、粉等大豆制品中尿素酶活性的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T0800.1进出口粮油、饲料检验抽样和制样方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 尿素酶活性 ureaseactivity 尿素酶的生化指标，表示其分解尿素的能，通常有两种表示方法，是以在30℃士0.5℃和 pH值为7的情况下，每分钟每克样品分解尿素所释放的氨基氮的毫克数表示（U/g），二是以在30℃士 0.5℃和pH值为7的情况下，经B0min分解尿素产生的氨使溶液pH值增加的量表示（△pH)。 4抽样与制样 按照SN/T0800.1执行。 第一法盐酸中和法 5方法原理 将粉碎的试样与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃土0.5℃下精确保温30min，尿素酶催化尿素水 解产生氨。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。 6试剂 除非另有说明，所使用试剂均为分析纯的试剂。 1 SN/T0800.4—2015 6.1水：应符合GB/T6682中三级水的要求。 6.2磷酸氢二钠（Na2HPO：·12HzO）。 6.3 磷酸二氢钾（KH2PO,）。 6.4 尿素[CO(NH2]。 6.5盐酸（HCI)。 6.6氢氧化钠（NaOH）。 6.7 甲基红（CHNsO2）。 6.8溴甲酚绿(CHBr,O,S)。 6.9乙醇（95%）。 6.10尿素缓冲溶液：称取8.95g磷酸氢二钠，3.40g磷酸二氢钾溶于水并稀释至1000mL，再将30g 尿素溶在此缓冲溶液中，临用前，调节pH值至7.0，有效期30d。 6.110.1mol/L.盐酸溶液：移取8.3mL浓盐酸，用水稀释至1000mL。 6.120.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠溶于水并稀释至1000ml.，按GB/T601规定的方 法配制和标定。 0.5g溴甲酚绿，溶于95%乙醇并稀释至100mL，两种溶液等体积混合，储存于棕色瓶中。 7仪器设备 7.1粉碎机：粉碎时应不产生强热。 7.2 2样品筛：孔径200μm。 7.3 分析天平：感量0.1mg。 7.4恒温水浴：可控温30℃士0.5℃。 7.5计时器。 7.6 酸度计：精度0.02，附有磁力搅拌器和滴定装置。 8检验方法 8.1 试样制备 用粉碎机（7.1)将具有代表性的样品粉碎，使之全部通过样品筛（7.2）。对特殊样品（水分或挥发物 含量较高而无法粉碎的样品)应先在25℃士5℃下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失 重计算在内。 8.2测定 称取0.2g制备好的试样，精确至0.1mg，于50mL玻璃试管中（如活性高于1U/g，需称0.05g试 样），加入10mL尿素缓冲溶液（6.10），立即盖好试管盖剧烈摇动后，将试管马上置于30℃士0.5℃恒 温水浴（7.4）中，保持30min士10s，停止反应时加入10mL盐酸溶液（6.11），确保每个试样加入尿素缓 冲溶液后反应时间一致。震摇后迅速冷却至20℃。将试管内容物全部转入100mL小烧杯中，用 20mL水分数次冲洗试管，洗液并人小烧杯中。用酸度计（7.6)以氢氧化钠标准溶液（6.12)滴定至pH 4.70。如果选用指示剂，则将试管内容物全部转人250mL锥形瓶中，用20mL水分数次冲洗试管，洗 2 SN/T0800.4—2015 液并入锥形瓶中加入8～10滴混合指示剂（6.13），以氢氧化钠标准溶液（6.12）滴定至溶液皇蓝绿色。 另取50mL玻璃试管做空白试验。称取0.2g制备好的试样，精确至0.1mg，于玻璃试管中（如活 性高于1U/g，需称0.05g试样），加人10mL盐酸溶液（6.11），振摇后在加人10mL尿素缓冲溶液 10s。停止反应时将试管迅速冷却至20℃。将试管内容物全部转入100mL小烧杯中，用20mL水分 数次冲洗试管，洗液并入小烧杯中。用酸度计（7.6)以氢氧化钠标准溶液（6.12)滴定至pH4.70。如果 选用指示剂，则将试管内容物全部转入250mL锥形瓶中，用20mL水分数次冲洗试管，洗液并入锥形 瓶中加人8～10滴混合指示剂（6.13），以氢氧化钠标准溶液（6.12)滴定至溶液呈蓝绿色。 9结果计算 9.1尿素酶活性X以尿素酶活性单位每克（U/g)表示，按式(1)计算。若试样经粉碎前预干燥处理后， 则按式（2)计算： ..(1) 30Xm X (1 - S) ...(2) 30Xm 式中： X-i 试样尿素酶活性，单位为活性单位每克（U/g)； 氢氧化钠标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L）； V。- 空白消耗氢氧化钠标准滴定溶液体积，单位为毫升（mL）； 试样消耗氢氧化钠标准滴定溶液体积，单位为毫升（mL）； 14--氮的摩尔质量，M（Nz）=14g/mol； 30反应时间，单位为分（min)； m- 试样质量，单位为（g）； S 预干燥时试样失重的质量分数，%。 计算结果表示到小数点后两位。 9.2 重复性：同一分析人员同时或连续两次测定活性≤0.2U/g时结果之差不超过平均值的20%，活 性>0.2U/g时结果之差不超过平均值的10%，结果以算术平均值表示。 第二法 法pH增值法 10 方法原理 将粉碎的试样与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃土0.5℃下精确保温30min，尿素酶催化尿素水 解产生氨。测定溶液的pH值，以pH值的增量表示。 11试剂 除非另有说明，所使用试剂均为分析纯的试剂。 11.1水：应符合GB/T6682中三级水的要求。 SN/T0800.4-2015 11.2 磷酸二氢钾（KH2PO）。 11.3 磷酸氢二钾（KzHPO）。 11.4尿素[CO(NH2)2]。 11.5甲苯(CH）。 11.6磷酸缓冲溶液：称取3.403g磷酸二氢钾（KH2PO4）和4.355g磷酸氢二钾（K2HPO.）溶解并稀 释至1000mL。临用前，调节pH值至7.0，有效期90d。 11.7尿素缓冲溶液：称取15g尿素溶解于500mL磷酸缓冲溶液（11.6）中，加入5mL甲苯，用于防腐 和防止霉菌生长。调节pH值至7.0。 12 仪器设备 12.1 分析天平：感量1mg。 12.2 粉碎机：粉碎时应不产生强热。 12.3 恒温水浴：可控温30℃土0.5℃。 12.4 酸度计：精度为0.02。 12.5计时器。 12.6 样品筛：孔径200μm。 13 检验方法 13.1试样制备 用粉碎机（12.2)将10g样品粉碎，须无明显发热，使