SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2552.3---2010 乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第3部分：酵母、霉菌菌落计数 Microbiological examination for milk and milk products hygiene- Part 3: Colony-count method of yeast and noulds (ISO6611:2004,Milkand milkproducts Enumeration of colony-forming units of yeasts and/or moulds- Colony-count technique at 25 ℃ ,MOD) 2010-12-01实施 2010-05-27发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 、数码防伪 SN/T2552.3—2010 前言 SN/T2552《乳及乳制品卫生微生物学检验方法》分为十三个部分： 第1部分：取样指南； 第2部分：检验样品的制备与稀释； 第3部分：酵母、菌菌落计数； 第4部分：嗜冷菌微生物菌落计数； 第5部分：沙门氏菌检验； 第6部分：柠檬酸杆菌检验； 第7部分：阴沟肠杆菌检验； 第8部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌检验， 第9部分：克雷伯氏菌检验； 第10部分：阪崎肠杆菌检验 免疫荧光法： 第11部分：蜡样芽孢杆菌的分离与计数； 第12部分：单核细胞增生李斯特氏菌检测与计数； --第13部分：假单孢菌属的分离与计数。 本部分是SN/T2552的第3部分。 本部分按照GB/T1.1---2009给出的规则起草。 本部分与ISO6611：2004《乳及乳制品中酵母、霉菌25℃菌落形成单位计数方法》（ISO6611：2004 Milk and milk products---Enumeration of colony-forming units of yeasts and/or moulds--Colony counttechniqueat25℃）的一致程度为修改采用，主要差异如下： 按照GB/T1.1标准要求和汉语习惯对--些编排格式进行了修改； 将一些适用于国际标准的表述改为适用于我国标准的表述； 对“规范性引用文件”的内容按照国家标准的要求进行了修订； 删除ISO6611：2004“定义”。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归。 本部分由中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏 出人境检验检疫局负责起草。 本部分主要起草人：房保海、雷质文、赵贵明、姜英辉、贾俊涛、赵丽青、刘云国、颜显辉、李明哲、 王静、韩青、祝长青、赵可军、林修光、张秀梅。 SN/T2552.3-2010 乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第3部分：酵母、霉菌菌落计数 范围 SN/T2552的本部分规定了在25℃条件下检测和计数乳及乳制品中酵母、霉菌菌落形成单位 的方法。 本部分适用于牛奶、液体奶制品、奶粉、干甜乳清粉、干燥干酪乳、乳糖、奶酪、酸性酪蛋白、乳酸干酪 素，酶凝干酪素、酸乳清粉、黄油、冷冻乳制品（包括冷冻食品）、奶油布丁，甜点，发酵牛奶和奶油种的酵 母、霉菌计数。 本部分不适用于新鲜乳酪中酵母的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 SN/T2552.1乳及乳制品卫生微生物学检验方法第1部分：取样指南 SN/T2552.2乳及乳制品卫生微生物学检验方法第2部分：检验样品的制备与稀释 3原理 3.1如果初始产品是液体或为在其他制品中的悬浮物，需要用规定的选择性培养基和规定的检测样品 量来制备倾注平板。 对其他测试样品或悬浮样品进行十倍梯度稀释，在相同的条件下，制备倾注平板。 3.2平板在有氧条件下，25℃±1℃培养5d。 3.3为获得满意的结果，选择合适的稀释水平，以从琼脂平板上获得的菌落数和稀释水平来计算每克 或每毫升产品中酵母、霉菌菌落形成单位（CFU）。 稀释液和培养基 4 4.1 稀释液 按照SN/T2552.2的规定执行。 4.2稀释液的分装、灭菌和储存 按照SN/T2552.2的规定执行。 4.3酵母漫膏、葡萄糖、土霉素、琼脂培养基 见附录Λ第A.1章。 SN/T2552.3-—2010 4.4酵母浸膏、葡萄糖、氯霉素、琼脂培养基 见附录A第A.2章。 5设备和材料 5.1 总则 5.1.1 按照SN/T2552.2的要求，对所有接触检测样品、稀释剂、稀释样品匀液或培养基的器具进行 灭菌。 5.1.2 如果有合适的规范，可用一次性器具替代可重复利用的玻璃器具。可重复利用的玻璃器具需能 够经受得住重复灭菌，并且为化学惰性。 5.1.3 常规微生物实验室用于制备检测样品和稀释样品匀液的设备和器具见SN/T2552.2的规定。 5.2特殊要求 5.2.1 干热灭菌设备（烘箱）和湿热灭菌设备（高压灭菌锅）。 5.2.2 培养箱：25℃±1℃。 5.2.3 无菌培养皿：直径90mm。 5.2.4 刻度吸管：1mL±0.01mL、10mL±0.01mL。 5.2.5 水浴锅：45℃±1℃。 5.2.6 菌落计数设备（可选用)：由-个带黑暗背景的发光基座、装有放大倍数至少×2的放大镜和一 个机械或电子数字计数器组成。 5.2.7 pH计：精确到±0.1pH单位。 5.2.8 培养瓶/烧瓶：500mL，使用合适的塞子或盖子。 5.2.9 均质器(旋刀式或拍击式)或等效的设备。 5.2.10 天平：感量0.1g。 5.2.11 冰箱：2℃~5℃。 6取样 实验室所接收到的样品应具有代表性，并且在运输和储藏过程中不得破坏或改变。 有关采样方法见SN/T2552.1。 检验程序 7.1概述 7.1.1为了提高方法的精密度，稀释样品匀液的制备应严格按照标准进行。操作时防止污染，7.2和 7.3中所描述的操作应避免在阳光下进行。 7.1.2影响精密度的因素有： ·混合设备的类型； -混合时间； - 一稀释剂； 大微粒沉淀所需的时间； 2 SN/T 2552.3--2010 --制备十倍样品稀释液的混合时间。 7.2样品和初始稀释液制备 按照SN/T2552.2的规定执行。 7.3 进一步十倍梯度稀释 按照SN/T2552.2的规定执行。 7.4 操作的持续时间 从开始制备初始匀液到样品匀液与培养基混勾所用时间不应超过15min。 7.5接种和培养 7.5.1取两个无菌培养皿，用无菌的刻度吸量管转移1ml.测试样品（液体产品）或1mL101初始悬 浮液至每个培养Ⅲ中。 7.5.2再取两个无菌培养Ⅲ，用另-个无菌刻度吸量管转移1mL10-1稀释物（液体产品）或1mlL 10-2稀释液（其他产品）至每个培养Ⅲ中。 7.5.3必要时，用更大的十倍梯度稀释液重复操作。 7.5.4向每个培养皿倾注15mL含有盐酸土霉素或含有氯霉紫的培养基，倾注之前培养基应事先熔 化并在水浴锅中保持45℃。 7.5.5小心旋转平板，使接种物和培养基充分混勾。将平板放在凉的水平面上使混合物凝固。 7.5.6从开始制备初始匀液到样品匀液与培养基混匀所用时间不应超过15min。 7.5.7 每个稀释梯度至少制备2个空白对照平板，以检测灭菌状况。 7.5.8倒置制备的平板后，将平板放在培养箱中，25℃土1℃培养5d。为避免菌落蔓延，应在凝固后 的培养基上再覆盖一层培养基。 7.5.9平血叠放不能超过6个，平皿与培养箱的壁及顶部不能接触。 7.6解释 7.6.1计数每个培养皿的菌落数，排除可能生长的异常细菌菌落。必要时，根据形态学特征区分酵母 和霉菌菌落。 计数的情况，应在2d后开始观察结果；如果部分培养Ⅲ的霉菌长满，或难以计数分离完好的菌落，则计 数下-个更高稀释度培养Ⅲ中的菌落数，即使这些培养Ⅲ中的菌落数可能小于10。遇到后者这种情况 时，按照8.2继续操作。 7.7确认 对于任何极微小的或可疑菌落，都应该进行显微检查。 必要时，至少要显微检查/n个菌落（n为计数菌落数）。 8结果表述 8.1选取菌落数在10CFU～150CFU之间的琼脂平板。 用式（1)计算每克或每毫升产品中酵母或霉菌的CFU数量（N)： 3 SN/T2552.3--2010 Z'C (m:0. 1n)d 式中： ZC- 保留的计数培养Ⅲ中菌落总数： n1 在第1个稀释度中含有10CFU～150CFU菌落的培养皿数； n2 在第2个稀释度中含有10CFU150CFU菌落的培养Ⅲ数； d 与第1个稀释度相应的稀释系数。 如果有超过2个可计数的稀释度（菌落数在10CFU～150CFU之间），应考虑进行下一个稀释度进 行修改公式，如果是3个稀释度，变为式（2）： EC **(2) (n+0.1n--0.01n)d 式中： 保留的菌落数在10CFU～150CFU之间第3个稀释度培养Ⅲ数目。 结果按数值修约规则修约至两位有效数值，如果要取舍的数字是5，其右边的数字全为零，则5左 边的数字若为奇数则进一，若为偶数则不进。如：28500的结果是28000，11500结果为12000。 每毫升牛奶中酵母或霉菌的菌落形成单位（CFU)以数字（1.0～9.9)X10*来表示。其中是合适 的幂次。 例如：一次酵母或霉菌的（FU计数结果如下（每个稀释度2个培养Ⅲ）。 第1个稀释度保留（10""）的培养皿有83CFU和97CFU。 第2个稀释度保留（10-3）的培养皿，有33CFU和28CFU。 ZC 83+97+33+28 N= 将