ICS67.050 X10TB 团 体 标 准 T/NXFSA004S—2020 枸杞红素的测定高效液相色谱法 2020-12-12发布 2020-12-12实施 宁夏食品安全协会发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/NXFSA004S—2020 I前  言 本文件是按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由百瑞源枸杞股份有限公司提出。 本文件由宁夏食品安全协会归口。 本文件的主要起草单位：百瑞源枸杞股份有限公司、宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、中国 科学院大连化学物理研究院。 本文件主要起草人：陆文静、马玲玲、张金宏、杨丽丽、张文华、容春娟、张滢中、陈玉娜、胡涛、 马生梅、苟春林、靳艳。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/NXFSA004S—2020 1枸杞红素的测定高效液相色谱法 1范围 本文件描述了枸杞红素的测定方法，高效液相色谱法。 本文件适用于枸杞及其制品中的枸杞红素的测定。 2规范性引用文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语与定义 本文件没有术语和定义。 4原理 枸杞红素为玉米黄素二棕榈酸酯，试样经乙酸乙酯、正己烷、无水乙醇等有机溶剂提取后，定容、 离心、过滤，经反向色谱柱分离，外标法定量。 5试剂与材料 5.1试剂 5.1.1水:GB/T6682规定的一级水。 5.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。 5.1.3二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。 5.1.4乙腈（CH3CN）：色谱纯。 5.1.5乙酸乙酯（CH3COOC2H5）：分析纯。 5.1.6无水乙醇(C2H6O)：分析纯。 5.1.7正己烷(C6H14)：分析纯。 5.1.8石英砂：60-80目。 5.2试剂配制 5.2.1正己烷:乙酸乙酯:甲醇=1:1:1（v/v/v）。 5.2.2正己烷:无水乙醇=3:1（v/v）。 5.3标准品 玉米黄素二棕榈酸酯（别名酸浆素C72H116O4,CAS号:144-67-2):纯度≥95%，或经国家认证并授予 全国团体标准信息平台 T/NXFSA004S—2020 2标准物质证书的标准物质。 5.4流动相 5.4.1流动相A：甲醇:乙腈:水=81:14:5。 5.4.2流动相B：二氯甲烷。 5.5标准溶液配制 5.5.1玉米黄素二棕榈酸酯标准储备液（1mg/mL）：称取玉米黄素二棕榈酸酯标准品约5mg（精准至0.01 mg），溶解于1:1（v/v）=流动相A:流动相B的溶液中并定容至5mL，于-20℃以下避光储存，储存期三 个月。 5.5.2玉米黄素二棕榈酸酯标准工作液：精密吸取标准储备液，用1:1（v/v）流动相A:流动相B的溶 液进行稀释，定容至10mL。分别制成5μg/mL,10μg/mL,25μg/mL,50μg/mL,100μg/mL的标准工作液， 现配现用。 6仪器和设备 6.1.1高效液相色谱仪：紫外检测器。 6.1.2离心机：转速≥3000r/min。 6.1.3分析天平：感量0.0001g和0.01mg。 6.1.4粉碎机：不锈钢万能粉碎机。 7分析步骤 7.1试样的预处理 枸杞干果样品经冷冻后用粉碎机粉碎、混匀，用四分法缩取有代表性的试样，迅速密封避光保存； 枸杞制品样品混合均匀，取有代表性的试样，迅速密封避光保存。 7.2试样处理 7.2.1枸杞干果 称取试样约10g，加5倍水充分浸泡2h，于研钵中充分研磨后，以3000r/min离心5min，保留沉 淀，充分干燥后粉碎。称取粉碎后的样品0.2g（精确到0.0001g），置于研钵中，加入约其质量1/4的 石英砂（5.1.7），用正己烷:乙酸乙酯:甲醇=1：1：1（v/v/v）（5.2.1）分次研磨提取，每次约1-3mL， 直至溶液无色。合并提取液，用无水乙醇（5.1.5）定容至50mL，在1000r/min离心3min，弃去沉淀， 取上清液作为供试品溶液。 7.2.2枸杞制品 7.2.2.1粉末状：称取试样0.2g（精确到0.0001g）置于研钵中，用正己烷:无水乙醇=3:1（v/v）（5.2.2） 分次研磨提取，每次约1-3mL，直至溶液无色。合并提取液，用无水乙醇（5.1.5）定容至50mL，在1000r/min 离心3min，弃去沉淀，取上清液作为供试品溶液。 7.2.2.2油状：称取试样0.2g（精确到0.0001g）样品至烧杯,用正己烷:无水乙醇=3:1（v/v）（5.2.2） 溶解转移至50mL容量瓶内,在1000r/min离心3min，弃去沉淀，取上清液作为供试品溶液。 全国团体标准信息平台 T/NXFSA004S—2020 37.3高效液相色谱仪条件 7.3.1色谱柱：C30柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm。 7.3.2柱温箱：30℃。 7.3.3检测波长：450nm。 7.3.4流量：1mL/min。 7.3.5进样量：10μL。 7.3.6梯度程序见表1。 表1梯度程序 时间/min 流动相A% 流动相B% 0 84 16 3 83 17 23 45 55 38 25 75 43 25 75 45 84 16 7.4标准曲线的制作 将标准工作液（5.5.2），经0.22μm滤膜后注入高效液相色谱仪进行测定，以保留时间定性，测定 峰面积，以标准系列浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程。 7.5试样的测定 将供试品溶液，经0.22μm滤膜后注入高效液相色谱仪进行测定，以保留时间定性，采用外标法， 根据标准曲线回归方程计算待测液中玉米黄素二棕榈酸酯的浓度。供试品溶液的响应值应在标准曲线质 量浓度范围内，超出线性范围的供试样品溶液应经稀释后测定。 8分析结果的表述 试样中玉米黄素二棕榈酸酯（枸杞红素）的含量按以下公式进行计算： 式中： X:试样中的含量，单位为毫克每克（mg/g）； C：由标准曲线计算出试样中玉米黄素二棕榈酸酯（枸杞红素）的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V：试样定容体积，单位为毫升（mL）； n：稀释倍数； m：试样质量，单位为克（g）。 结果保留到小数点后两位。 9精密度 全国团体标准信息平台 T/NXFSA004S—2020 4在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 附录A （资料性） 玉米黄素二棕榈酸标准溶液色谱图 玉米黄素二棕榈酸标准溶液色谱图见图1。 图1玉米黄素二棕榈酸酯标准液相色谱图 全国团体标准信息平台