2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 饲 料 添 加 剂 枯 草 芽 孢 杆 菌 4 6 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 2 0 C C S B 2 1 3 1 — 2 0 2 5 F e e d a d d i t i v e s — B a c i l l u s s u b t i l i s Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布 ´úÌæ N Y / T 2 1 3 1 — 2 0 1 2NY/T２１３１—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 本文件代替NY/T２１３１—２０１２«饲料添加剂枯草芽孢杆菌»,与NY/T２１３１—２０１２相比,除结构调整 和编辑性改动外,主要技术变化如下: a)　更改了对菌种的要求(见４􀆰１,２０１２年版的４􀆰１); b)增加了对载体的要求(见４􀆰２); c)更改了对粒度试验筛的孔径要求(见表１,２０１２年版的４􀆰４); d)更改了水分指标要求(见表１,２０１２年版的４􀆰３); e)删除卫生指标“志贺氏菌及金黄色葡萄球菌”(见表２,２０１２年版的表２); f)更改了卫生指标“黄曲霉毒素”的适用产品(见表２,２０１２年版的表２); g)增加微生物取样标准(见第５章,２０１２年版的５􀆰１); h)增加了枯草芽孢杆菌菌种鉴定方法(见６􀆰３); i)更改了黄曲霉毒素B１检测方法(见６􀆰１０,２０１２年版的５􀆰６􀆰１); j)增加了组批要求(见７􀆰１); k)删除了出厂检验中的粒度(见７􀆰２,２０１２年版的６􀆰１) l)更改了需要型式检验时的情况(见７􀆰３,２０１２年版的６􀆰２); m)增加了除微生物之外各指标的极限数值判定执行标准(见７􀆰４􀆰３); n)更改了保质期要求(见８􀆰５,２０１２年版的８􀆰５). 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出. 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC７６)归口. 本文件起草单位:广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心). 本文件主要起草人:羊宋贞、刘阳、冯广达、郑湘玲、章俊、陆雪影、李燕旋、陈艳、段锦梅、陈清莹、武明 明、王永红、朱红惠. 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———２０１２年首次发布为NY/T２１３１—２０１２; ———本次为第一次修订. ⅠNY/T２１３１—２０２５ 饲料添加剂枯草芽孢杆菌 １　范围 本文件规定了饲料添加剂枯草芽孢杆菌的技术要求、取样、检验规则、标签、包装、运输、储存和保质 期,描述了相应的试验方法. 本文件适用于以枯草芽孢杆菌为菌种,经液态或固态发酵、添加或不添加载体、干燥等工艺制得的饲 料添加剂产品. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T５９１７􀆰１　饲料粉碎粒度测定　两层筛筛分法 GB/T６４３５　饲料中水分的测定 GB/T８１７０　数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB１０６４８　饲料标签 GB１３０７８　饲料卫生标准 GB/T１３０７９　饲料中总砷的测定 GB/T１３０８０　饲料中铅的测定　原子吸收光谱法 GB/T１３０８１　饲料中汞的测定 GB/T１３０８２　饲料中镉的测定 GB/T１３０９１　饲料中沙门氏菌的测定 GB/T１３０９２　饲料中霉菌总数测定方法 GB/T１４６９９　饲料　采样 GB/T１８８６９　饲料中大肠菌群的测定 GB/T２６４２８　饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测 GB/T４２９５９　饲料微生物检验　采样 NY/T２０７１　饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和TＧ２毒素的测定　液相色谱串联质谱法 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 枯草芽孢杆菌　Bacillussubtilis 属于芽孢杆菌科芽孢杆菌属,为革兰氏阳性杆菌.单个细胞大小为(０􀆰７~０􀆰８)μm×(２~３)μm;有 芽孢,芽孢呈椭圆形至柱形,中生或近中生. ４　技术要求 ４􀆰１　菌种 应符合附录A中枯草芽孢杆菌的形态、生理生化特性,必要时进行分子生物学鉴定(A􀆰３􀆰４). ４􀆰２　载体 来源于«饲料原料目录»和(或)«饲料添加剂品种目录»所列品种,并符合GB１３０７８及相关标准要求. １NY/T２１３１—２０２５ ４􀆰３　外观与性状 粉末或颗粒,色泽均匀、形态一致,无异物,无异臭味. ４􀆰４　质量指标 应符合表１的要求. 表１　质量指标 项目 指标 枯草芽孢杆菌活菌数,CFU/g ≥１􀆰０×１０９ 粒度(０􀆰８５mm试验筛通过率,％ １００ 水分,％ ≤１０ 注:粒度指标仅适用于粉状产品. ４􀆰５　卫生指标 应符合表２的要求. 表２　卫生指标 项目 指标 总砷(以As计),mg/kg ≤２ 铅(以Pb计),mg/kg ≤５ 汞(以Hg计),mg/kg ≤０􀆰１ 镉(以Cd计),mg/kg ≤０􀆰５ 黄曲霉毒素Ba １,μg/kg ≤１０ 霉菌总数,CFU/g ≤２􀆰０×１０４ 大肠菌群,MPN/１００g ≤１􀆰０×１０４ 沙门氏菌,２５g 不得检出 注１:除微生物指标外,表中所列允许量均以干物质含量为８８％计算;. 注２:a　指标仅适用于植物性载体生产的产品. ５　取样 以微生物检验为目的的取样按照GB/T４２９５９的规定执行,以其他指标检验为目的的取样按照GB/ T１４６９９的规定执行. ６　试验方法 ６􀆰１　外观与性状 取适量样品于白色背景中,在自然光线下观察其色泽、状态,嗅其气味. ６􀆰２　枯草芽孢杆菌活菌数计数 按GB/T２６４２８的规定执行. ６􀆰３　枯草芽孢杆菌菌种鉴定 按附录A的规定执行. ６􀆰４　粒度 按GB/T５９１７􀆰１的规定执行. ６􀆰５　水分 按GB/T６４３５的规定执行. ６􀆰６　总砷 按GB/T１３０７９的规定执行. ６􀆰７　铅 按GB/T１３０８０的规定执行. ６􀆰８　汞 ２NY/T２１３１—２０２５ 按GB/T１３０８１的规定执行. ６􀆰９　镉 按GB/T１３０８２的规定执行. ６􀆰１０　黄曲霉毒素B１ 按NY/T２０７１的规定执行. ６􀆰１１　霉菌总数 按GB/T１３０９２的规定执行. ６􀆰１２　大肠菌群 按GB/T１８８６９的规定执行. ６􀆰１３　沙门氏菌 按GB/T１３０９１的规定执行. ７　检验规则 ７􀆰１　组批 以相同菌株、相同发酵工艺、相同生产条件、连续生产或同一班次生产的产品为一批,但每批产品应不 超过５０t. ７􀆰２　出厂检验 出厂检验项目为外观与性状、水分及枯草芽孢杆菌活菌数. ７􀆰３　型式检验 型式检验项目为４􀆰３~４􀆰５规定的所有项目.在正常生产情况下,每半年至少进行１次型式检验.在 有下列情况之一时,亦应进行型式检验: a)　产品定型投产时; b)生产工艺、主要设备、配方或主要原料来源有较大改变,可能影响产品质量时; c)停产３个月以上,重新恢复生产时; d)出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时; e)饲料行政管理部门提出检验要求时. ７􀆰４　判定规则 ７􀆰４􀆰１　所验项目全部合格,判定为该批次产品合格. ７􀆰４􀆰２　检验结果中有任何指标不符合本文件规定时,可自同批产品中重新加倍取样进行复检.复检结果 即使有一项指标不符合本文件规定,则判定该批产品不合格.卫生指标中的微生物指标不得复检. ７􀆰４􀆰３　除微生物指标外,各项目指标的极限数值判定按GB/T８１７０中全数值比较法的规定执行. ８　标签、包装、运输、储存和保质期 ８􀆰１　标签 按GB１０６４８的规定执行. ８􀆰２　包装 包装材料应无毒、无害、防潮. ８􀆰３　储输 运输中防止包装破损、日晒、高温、雨淋,不得与有毒有害物质混运. ８􀆰４　储存 通风、干燥处存放,防晒、防雨淋,不得与有毒有害的物质混储. ８􀆰５　保质期 未开启包装的产品,在规定的运输、储存条件下,产品保质期应与标签中标明的保质期一致. ３NY/T２１３１—２０２５ 附　录　A (规范性) 枯草芽孢杆菌菌种鉴定 　 A􀆰１　试剂或材料 A􀆰１􀆰１　营养琼脂培养基. A􀆰１􀆰２　革兰氏染色液. A􀆰１􀆰３　７％NaCl. A􀆰１􀆰４　VＧP试验培养基. A􀆰１􀆰５　硝酸盐还原培养基. A􀆰１􀆰６　DＧ甘露醇发酵培养基. A􀆰１􀆰７　丙酸盐利用培养基. A􀆰１􀆰８　阳性对照菌株(枯草芽孢杆菌模式菌株:GDMCC１􀆰２４９８＝ATCC６０５１). A􀆰１􀆰９　阴性对照菌株(解淀粉芽孢杆菌模式菌株:GDMCC１􀆰３１５５＝ATCC２３３５０). A􀆰１􀆰１０　１０×PCR缓冲液. A􀆰１􀆰１１　１０􀆰０mmol/LdNTP. A􀆰１􀆰１２　２􀆰５U/μLTaqDNA聚合酶. A􀆰１􀆰１３　琼脂糖. A􀆰１􀆰１４　PCR反应管. A􀆰１􀆰１５　DNAmarker. A􀆰２　仪器设备 A􀆰２􀆰１　PCR仪. A􀆰２􀆰２　电泳仪. A􀆰２􀆰３　凝胶分析成像系统. A􀆰２􀆰４　超净工作台. A􀆰２􀆰５　小型离心机. A􀆰２􀆰６　微量可调移液器(量程分别为２􀆰５μL、１０μL、１００μL、１０００μL). A􀆰３　试验步骤 A􀆰３􀆰１　菌种纯化 自平板上挑取单菌落,划线转接培养于