2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 油 料 中 谷 维 素 含 量 的 测 定 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 0 4 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 7 . 2 0 0 C C S B 4 7 8 1 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f o r y z a n o l i n o i l s e e d s — L i q u i d c h r o m a t o g r a p h y - t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４７８１—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:中国农业科学院油料作物研究所、农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室 (武汉)、农业农村部油料及制品质量检验测试中心. 本文件主要起草人:李培武、马飞、张良晓、王督、胡小风、汪雪芳、喻理. ⅠNY/T４７８１—２０２５ 油料中谷维素含量的测定　液相色谱串联质谱法 １　范围 本文件规定了油料中谷维素含量的液相色谱串联质谱测定方法. 本文件适用于米糠、玉米胚、小麦胚等油料中谷维素主要成分环木菠萝烯醇阿魏酸酯(cycloartenylferuＧ late,CF)和２４Ｇ亚甲基环木菠萝烯醇阿魏酸酯(２４Ｇmethylenecycloartanylferulate,２４ＧCF)含量的测定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅 该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件. GB/T　５４９１　粮食、油料检验　扦样、分样法 GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样经正己烷提取,固相萃取柱净化,用液相色谱串联质谱仪测定,外标法定量. ５　试剂与材料 除非另有说明,所使用试剂均为分析纯,水为GB/T６６８２规定的一级水. ５􀆰１　试剂 ５􀆰１􀆰１　丙酮(C３H６O,CAS号:６７Ｇ６４Ｇ１). ５􀆰１􀆰２　正己烷(C６H１４,CAS号:１１０Ｇ５４Ｇ３). ５􀆰１􀆰３　乙酸乙酯(C４H８O２,CAS号:１４１Ｇ７８Ｇ６). ５􀆰１􀆰４　甲醇(CH３OH,CAS号:６７Ｇ５６Ｇ１):色谱纯. ５􀆰１􀆰５　异丙醇(C３H８O,CAS号:６７Ｇ６３Ｇ０):色谱纯. ５􀆰１􀆰６　乙酸铵(CH３CO２NH４,CAS号:６３１Ｇ６１Ｇ８):色谱纯. ５􀆰２　标准品 ５􀆰２􀆰１　CF标准品(C４０H５８O４,CAS号:２１２３８Ｇ３３Ｇ５):纯度≥９５％,或经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质. ５􀆰２􀆰２　２４ＧCF标准品(C４１H６０O４,CAS号:４６９Ｇ３６Ｇ３):纯度≥９５％,或经国家认证并授予标准物质证书的 标准物质. ５􀆰３　试剂配制 ５􀆰３􀆰１　４％丙酮正己烷溶液(４∶９６,v/v):分别量取４mL丙酮(５􀆰１􀆰１)和９６mL正己烷(５􀆰１􀆰２),混合均匀. ５􀆰３􀆰２　流动相B(２mmol/L乙酸铵水溶液):称取０􀆰１５４g乙酸铵(５􀆰１􀆰６),用水溶解并稀释至１０００mL, 混匀. ５􀆰４　标准溶液配制 ５􀆰４􀆰１　标准储备溶液:分别称取CF和２４ＧCF标准品１０mg(精确至０􀆰０１mg),用异丙醇(５􀆰１􀆰５)溶解, 并转移至１０mL棕色容量瓶中,用甲醇(５􀆰１􀆰４)定容,配制成浓度为１g/L的标准储备溶液,－１８℃以下 １NY/T４７８１—２０２５ 避光保存,有效期６０d. ５􀆰４􀆰２　混合标准中间溶液:准确移取CF和２４ＧCF标准储备液各１mL置于１００mL棕色容量瓶中,用甲 醇(５􀆰１􀆰４)定容,配制成浓度为１０mg/L的混合标准中间溶液,４℃以下避光保存,有效期３０d. ５􀆰４􀆰３　混合标准工作溶液:准确移取混合标准中间溶液(５􀆰４􀆰２),用甲醇(５􀆰１􀆰４)配置浓度分别为１μg/L、 ２μg/L、５μg/L、１０μg/L、２０μg/L、５０μg/L、１００μg/L、２００μg/L的混合标准工作溶液,现配现用. ５􀆰５　材料 ５􀆰５􀆰１　固相萃取柱:硅胶基质,５００mg/６mL,或性能相当者. ５􀆰５􀆰２　微孔滤膜:有机系,０􀆰２２μm,或性能相当者. ６　仪器和设备 ６􀆰１　液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI). ６􀆰２　天平:感量０􀆰０１mg和０􀆰００１g. ６􀆰３　离心机:转速≥５０００r/min. ６􀆰４　涡旋振荡器. ６􀆰５　氮吹仪. ６􀆰６　超声波清洗器:总功率≥６００W. ６􀆰７　固相萃取仪. ６􀆰８　组织捣碎机. ６􀆰９　分样筛:２０目. ７　分析步骤 ７􀆰１　试样制备 按GB５４９１的规定进行扦取和分样,用组织捣碎机捣碎成粉末状,粉碎至全部通过分样筛(６􀆰９),充 分混合. ７􀆰２　提取 称取０􀆰５g(精确至０􀆰００１g)试样至１５mL离心管中,加入６mL正己烷(５􀆰１􀆰２),室温超声提取 ２５min,５０００r/min离心１０min,取２mL上清液,待净化. ７􀆰３　净化浓缩 将固相萃取柱(５􀆰５􀆰１)放置在固相萃取仪(６􀆰７)上,用４mL正己烷(５􀆰１􀆰２)活化,流速约为１mL/min,将上 述待净化液(７􀆰２)全部加入固相萃取柱中,用２mL４％丙酮正己烷溶液(５􀆰３􀆰１)淋洗,弃去流出液,用 ４mL乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)洗脱柱子,收集全部洗脱液.洗脱液室温氮吹至近干后,用１mL甲醇(５􀆰１􀆰４)复 溶,过微孔滤膜(５􀆰５􀆰２),待液相色谱串联质谱仪测定. ７􀆰４　测定 ７􀆰４􀆰１　液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下: a)　色谱柱:C１８色谱柱(１００mm×２􀆰１mm,３μm),或性能相当者; b)柱温:４０℃; c)流动相:A为甲醇(５􀆰１􀆰４),B为２mmol/L乙酸铵水溶液(５􀆰３􀆰２),梯度洗脱条件见表１; d)流速:０􀆰３０mL/min; e)进样量:５μL. ２NY/T４７８１—２０２５ 表１　梯度洗脱条件 时间,min A,％ B,％ ０􀆰０ ７０ ３０ １􀆰１ ９５ ５ ６􀆰０ ９５ ５ ６􀆰１ ７０ ３０ ９􀆰０ ７０ ３０ ７􀆰４􀆰２　质谱参考条件 质谱参考条件如下: a)　离子源类型:电喷雾离子源. b)电离电压:４０００V. c)毛细管温度:３００℃. d)喷雾气流量:２􀆰５L/min;干燥气流量:１０L/min;加热气流量:１０L/min. e)扫描方式:负离子扫描. f)检测方式:多反应监测模式(MRM). g)保留时间、定性离子对、定量离子对和碰撞能量见表２. 表２　保留时间、定性离子对、定量离子对和碰撞能量 化合物 保留时间,min 定量离子对,m/z 定性离子对,m/z 碰撞能量,eV CF ５􀆰３４ ６０１􀆰４＞１３３􀆰１ ６０１􀆰４＞５８６􀆰０ ５５/４０ ２４ＧCF ５􀆰６５ ６１５􀆰４＞１３３􀆰１ ６１５􀆰４＞６００􀆰３ ５５/４２ ７􀆰４􀆰３　定性测定 通过试样中各组分的保留时间和特征离子与相应标准物质的保留时间和特征离子对照进行定性.在 相同测试条件下,目标化合物在试样中的保留时间与标准物质的保留时间偏差不超过±２􀆰５％,且相对离 子丰度与标准物质的离子丰度偏差不超过表３的规定范围,可判定试样中存在目标物. 表３　定性测定时相对离子丰度的最大允许误差 相对离子丰度,％ ＞５０ ＞２０~５０ ＞１０~２０ ≤１０ 允许的相对偏差,％ ±２０ ±２５ ±３０ ±５０ ７􀆰４􀆰４　定量测定 将试样溶液(７􀆰３)和混合标准工作溶液(５􀆰４􀆰３)在相同的液相色谱串联质谱条件下进行测定,以色谱 峰面积按外标法定量,根据标准曲线得到化合物浓度.如超出范围,用甲醇适当稀释,重新测定.CF和 ２４ＧCF的MRM色谱图见附录A中的图A􀆰１. ８　结果计算 试样中CF(或２４ＧCF)含量按公式(１)计算. ω＝c×V１×V３××F m×V２(１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: ω———试样中CF(或２４ＧCF)含量的数值,单位为微克每千克(μg/kg); c———从标准工作曲线中得到的试样中CF(或２４ＧCF)质量浓度的数值,单位为微克每升(μg/L); V１———样液最终定容体积的数值,单位为毫升(mL); V２———用于净化的提取液体积的数值,单位为毫升(mL); V３———提取溶剂体积的数值,单位为毫升(mL); m———试样称样质量的数值,单位为克(g). ３NY/T４７８１—２０２５ F———稀释倍数. 计算结果以重复性条件下获得的２次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留３位有效数字. 试样中谷维素总量的测定结果以CF和２４ＧCF的含量之和计算. ９　精密度 ９􀆰１　重现性 在重复性条件下获得的２次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的１５％. ９􀆰２　再现性 在再现性条件下获得的２次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的２０％. １０　检出限和定量限 CF和２４ＧCF的检出限均为０􀆰６μg/k