2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 动 物 源 细 菌 耐 药 性 监 测 实 验 室 菌 株 管 理 与 使 用 技 术 规 范 2 2 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 7 . 1 2 0 . 1 0 C C S X 4 8 4 6 — 2 0 2 5 T e c h n i c a l s p e c i f i c a t i o n s f o r s t r a i n m a n a g e m e n t a n d u s e i n l a b o r a t o r y o f a n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e s u r v e i l l a n c e o f a n i m a l - d e r i v e d b a c t e r i a Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４９４６—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出. 本文件由全国兽药残留与耐药性控制专家委员会归口. 本文件起草单位:中国兽医药品监察所、上海市动物疫病预防控制中心. 本文件主要起草人:张纯萍、孙冰清、程敏、商军、王鹤佳、姜芹、赵琪、张妤、崔明全、曹莹、李霆、 张亦菲、方雅红、吴雨珊、蔡昱婷. ⅠNY/T４９４６—２０２５ 动物源细菌耐药性监测实验室菌株管理与使用技术规范 １　范围 本文件规定了动物源细菌耐药性监测实验室(以下简称“实验室”)菌株管理与使用的总体要求,质控 菌株的采购验收,质控储备菌株和质控工作菌株的制备,质控储备菌株、质控工作菌株及分离菌株的命名、 保存、使用、菌株台账以及实验室生物安全要求. 本文件适用于动物源细菌耐药性监测实验室菌株的管理与使用. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 GB１９４８９　实验室　生物安全通用要求 NY/T４１４２　动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程　微量肉汤稀释法 NY/T４１４３　动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程　琼脂稀释法 NY/T４１４４　动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程　纸片扩散法 NY/T４１４５　动物源金黄色葡萄球菌分离与鉴定技术规程 NY/T４１４６　动物源沙门氏菌分离与鉴定技术规程 NY/T４１４７　动物源肠球菌分离与鉴定技术规程 NY/T４１４８　动物源弯曲杆菌分离与鉴定技术规程 NY/T４１４９　动物源大肠埃希菌分离与鉴定技术规程 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 质控菌株qualitycontrolstrain 源自被认可的保藏机构,生物性状明确,其传代培养物用于分离菌株的鉴定及药物敏感性测试等试验 的对照菌株. 注:代次为０代. ３􀆰２ 质控储备菌株　qualitycontrolledreservestrain 由质控菌株(３􀆰１)经过１代~２代转接培养后获得的子代菌株. ３􀆰３ 质控工作菌株　qualitycontrolworkingstrain 由质控储备菌株(３􀆰２)转接培养后获得的不超过５代的子代菌株. ３􀆰４ 分离菌株　isolatedstrain 来自动物源样品,经分离、纯化、鉴定,属种明确的菌株. 注:动物源样品见NY/T４１４１—２０２２. ４　总体要求 ４􀆰１　实验室菌株管理与使用必须遵守«动物病原微生物菌(毒)种保藏管理办法»«动物病原微生物分类 １NY/T４９４６—２０２５ 名录»«人间传染的病原微生物目录»的规定. ４􀆰２　实验室应配备２名及以上具有微生物相关专业背景或培训经历的实验人员. ４􀆰３　实验室菌株的管理与使用应有文件化的管理程序,涵盖菌株采购、验收、保管、领用、使用、保存、销毁 等方面,确保菌株背景清楚和安全使用. ４􀆰４　实验室应保存开展动物源细菌耐药性监测所需数量及种类的质控菌株. ４􀆰５　菌株应按“双人双锁”等措施进行管理. ５　菌株管理 ５􀆰１　质控菌株采购验收 采购质控菌株时,应确定其名称和代次.实验室在接收质控菌株时,应检查其外观的完整性,获取质 控菌株的质量证明材料或检验报告单,并进行验收和记录.验收记录包括菌株来源信息(购置单位、购入 时间、有效期)、菌株基础信息(名称、保藏编号、代次、数量、批号)、菌株检查信息(培养特性、纯度、革兰染 色等鉴定结果)等内容.验收记录的内容应符合质控菌株的质量证明材料或检验报告单要求.常用质控 菌株见附录A. ５􀆰２　质控储备菌株和质控工作菌株的制备 ５􀆰２􀆰１　质控储备菌株 在无菌环境下,开启安瓿瓶或西林瓶.按使用说明书要求,加适宜溶剂适量,轻轻振荡溶解.取溶解 物划线接种适宜培养基,在适宜条件下培养.验证菌株的纯度及特性,按６􀆰２、６􀆰３执行.菌株传代常用 培养基及培养条件见附录B.实验室也可使用其他经验证的培养基或培养条件进行传代培养. ５􀆰２􀆰２　质控工作菌株 将质控储备菌株(５􀆰２􀆰１)接种适宜培养基,在适宜条件下培养.验证菌株的纯度及特性,按６􀆰２、６􀆰３ 执行.菌株传代常用培养基及培养条件见附录B.实验室也可使用其他经验证的培养基或培养条件进行 传代培养. ５􀆰３　菌株命名 ５􀆰３􀆰１　质控储备菌株和质控工作菌株 质控储备菌株和质控工作菌株应按照“细菌缩写－菌株保藏编号－代次－保存年月－菌株序列 号”的顺序命名.细菌缩写一般以拉丁文首字母组合表示,首字母大写,其余小写.缩写出现重复,以属 名前两位和种名首字母组合表示.常见细菌缩写见附录A. 示例:EcＧATCC２５９２２ＧF２Ｇ２３０１Ｇ０００１,其中:Ec(大肠埃希菌)ＧATCC２５９２２(菌株保藏编号)ＧF２(代次)Ｇ２３(年)０１(月)Ｇ ０００１(菌株序列号). ５􀆰３􀆰２　分离菌株 分离菌株应按照“细菌属种缩写－采样地－养殖场(或屠宰场)－动物种类缩写－采样年月－菌株序 列号”的顺序命名.动物种类一般以动物英文名称首字母作为缩写,若出现重复,则以英文名称前两个字 母作为缩写,首字母大写,后一位小写. 常用动物种类缩写如下: ———“P”为猪(pig); ———“B”为牛(bovine); ———“S”为羊(sheep); ———“C”为鸡(chickens); ———“D”为鸭(duck); ———“G”为鹅(goose); ———“Do”为犬(dog); ———“Ca”为猫(cat). 示例:EcＧGDGZＧLFＧBＧ２３０１Ｇ０００１,其中:Ec(大肠埃希菌)ＧGD(广东)GZ(广州)ＧLF(绿丰养殖场)ＧB(牛)Ｇ２３(年)０１(月)Ｇ ２NY/T４９４６—２０２５ ０００１(菌株序列号). ５􀆰４　菌株保存 ５􀆰４􀆰１　通则 根据菌株性质选择适宜保存方法和有效保存时间,定期进行传代活化.质控菌株、质控储备菌株和质 控工作菌株与分离菌株宜分别保存.具有长期保存价值的分离菌株应送至具有资质的保藏机构保存. 示例:具有长期保存价值的分离菌株,如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)、 耐万古霉素肠球菌(VRE)、耐美罗培南肠杆菌科/属细菌(CRE)等. ５􀆰４􀆰２　保存方法 ５􀆰４􀆰２􀆰１　质控菌株 新购买的质控菌株应按保藏机构的保存要求进行保存,备用. ５􀆰４􀆰２􀆰２　质控储备菌株 质控储备菌株宜采用甘油、瓷珠或冻干保存法,同时保存多管.操作步骤及要求按附录C的规定 执行. ５􀆰４􀆰２􀆰３　质控工作菌株 质控工作菌株宜采用斜面保存法,同时保存多管.操作步骤及要求按附录C的规定执行. ５􀆰４􀆰２􀆰４　分离菌株 分离菌株宜采用斜面、甘油、瓷珠或冻干保存法,根据需要可保存多管.操作步骤及要求按附录C执行. ５􀆰５　菌株台账 应建立菌株台账,条件允许的实验室宜设置电子台账.台账内容包括但不限于菌株来源、菌株编号、 菌株代次、保存条件、保存位置、取出、使用及处理销毁情况.菌株台账的保存时间宜与菌株的实际保存期 限一致. ６　菌株使用 ６􀆰１　菌株复苏 在无菌环境下,取斜面菌、甘油菌、瓷珠菌或冻干菌溶解物接种于适宜培养基,在适宜的条件下培养, 常用培养基配制见附录D. 注:冻干菌溶解物是指在无菌环境下,将适宜溶剂加入冻干菌株后得到的溶解物. ６􀆰２　菌株纯度检查 取新鲜培养物观察,同一平板上菌落的大小、形状、颜色、质地、光泽等应相似;出现两种及以上的菌落 形态,应再次纯化、鉴定. ６􀆰３　细菌鉴定 选择对数生长期的菌株用于细菌鉴定,鉴定结果应符合NY/T４１４５、NY/T４１４６、NY/T４１４７、NY/T ４１４８、NY/T４１４９等的要求或Bergey＇sManualofSystematicBacteriology(«伯杰氏系统细菌学手册»)的 相关要求. ６􀆰４　抗菌药物敏感性测试 选择对数生长期的菌株按NY/T４１４２、NY/T４１４３、NY/T４１４４的规定开展药物敏感性测试,或采用 其他标准或方法开展试验. ６􀆰５　其他 菌株可用于兽用抗菌药物