2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 麦 类 谷 物 及 其 制 品 烷 基 间 苯 二 酚 含 量 的 测 定 分 光 光 度 法 0 4 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 7 . 0 6 0 C C S X 4 8 6 2 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f c o n t e n t o f a l k y l r e s o r c i n o l i n t r i t i c e a e c e r e a l s a n d t h e i r p r o d u c t s — S p e c t r o p h o t o m e t r y Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４８６２—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 本文件由农业农村部乡村产业发展司提出. 本文件由农业农村部农产品加工标准化技术委员会归口. 本文件起草单位:中国农业科学院农产品加工研究所、江南大学、北京工商大学、国家粮食和物资储备 局科学研究院、内蒙古自治区质量和标准化研究院、安徽中青检验检测有限公司、佳木斯冬梅大豆食品有 限公司、深圳市深大检测有限公司. 本文件主要起草人:刘丽娅、王凤忠、周素梅、谭斌、王立、范蓓、王媛媛、董良杰、曹荣、蒋汶婷、刘洁、 宋鑫、佟立涛、王丽丽、李言、郭雅红、童亚男. ⅠNY/T４８６２—２０２５ 麦类谷物及其制品烷基间苯二酚含量的测定　分光光度法 １　范围 本文件描述了分光光度法测定麦类谷物及其制品烷基间苯二酚含量的方法. 本文件适用于分光光度法测定麦类谷物及其制品烷基间苯二酚含量,尤其适用于测定含麸皮的麦类 谷物及其制品烷基间苯二酚含量. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２—２００８　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 烷基间苯二酚与重氮盐FastBlueB在酸性甲醇中发生偶联反应形成紫红色衍生物,在５２０nm波长 下具有吸光值,吸收强度与衍生物含量成正比.采用烷基间苯二酚同系物５Ｇ十五烷间苯二酚(C１５:０)为 标准品,通过紫外分光光度计测量５２０nm下的吸收光强度,制作标准曲线.将试样在５２０nm波长下测 得的吸光值与标准曲线比较,计算得到烷基间苯二酚含量. ５　材料与试剂 ５􀆰１　通用说明 除非另有说明,本标准方法所用试剂均为分析纯,实验用水为蒸馏水或去离子水,应符合GB/T ６６８２—２００８中三级水的规定. ５􀆰２　试剂 ５􀆰２􀆰１　甲醇:色谱纯. ５􀆰２􀆰２　乙醇. ５􀆰２􀆰３　丙醇. ５􀆰２􀆰４　乙酸乙酯. ５􀆰２􀆰５　乙酸水溶液:体积分数为１％. ５􀆰２􀆰６　重氮盐fastblueBZn(４Ｇ苯甲酰氨基Ｇ２,５Ｇ二甲氧基氯化重氮苯氯化锌盐):纯度≥９５％. ５􀆰２􀆰７　烷基间苯二酚同系物５Ｇ十五烷间苯二酚(C１５:０)标准品:纯度≥９８％. ５􀆰３　溶液配制 ５􀆰３􀆰１　烷基间苯二酚标准储备液:称取１０mg(精确至０􀆰０００１g)烷基间苯二酚同系物C１５∶０标准品(纯 度９８％),加入甲醇溶解并定容至１０mL,计算其浓度(μg/mL),在４℃保存,使用时存放时间不超过 １４d. ５􀆰３􀆰２　乙酸水溶液:取１mL无水乙酸,采用去离子水稀释至１００mL. ５􀆰３􀆰３　重氮盐fastblueBZn储备液:称取０􀆰０５g(精确至０􀆰０００１g)的重氮盐溶解于１００mL１％的乙酸 溶液中.在４℃保存,使用时存放时间不超过７d. １NY/T４８６２—２０２５ ５􀆰３􀆰４　重氮盐fastblueBZn工作液:重氮盐储备液∶甲醇＝１∶５(V/V),重氮盐工作液需现配现用. ５􀆰４　仪器 ５􀆰４􀆰１　紫外可见分光光度计:波长精度±２nm. ５􀆰４􀆰２　实验室超声波清洗仪:工作功率≥１００W,频率≥２５Hz,可控温. ５􀆰４􀆰３　离心机:转速不低于４０００g. ５􀆰４􀆰４　谷物粉碎机. ５􀆰４􀆰５　分析天平:感量为０􀆰０００１g和０􀆰０１g. ５􀆰４􀆰６　旋转蒸发器:配有水浴加热装置. ５􀆰４􀆰７　氮吹仪. ５􀆰４􀆰８　试验筛:孔径４０目(０􀆰４２５mm). ５􀆰４􀆰９　微量加样枪. ５􀆰４􀆰１０　塑料离心管. ５􀆰４􀆰１１　旋蒸瓶. ５􀆰４􀆰１２　具塞玻璃孵育瓶:不小于５mL. ６　分析步骤 ６􀆰１　试样制备与保存 对于固体样品直接采用谷物粉碎机粉碎至全部通过４０目试验筛(对于全麦粉等可直接通过４０目试 验筛的粉体原料无需粉碎),混合均匀后储存于洁净密闭容器中,室温下保存备用.对于半固体或液体样 品需要经过干燥预处理再进行粉碎. ６􀆰２　超声提取 取１g(M,精确至０􀆰００１g)粉碎后的样品置于离心管中,加入２０mL乙酸乙酯,在１００W功率、室温 条件下超声提取１５min后,于３５００g下离心１０min,离心结束后将上清液全部转移至旋蒸瓶中,在５０ ℃条件下旋蒸至干燥,残留物经１mL甲醇充分溶解后备用. ６􀆰３　标准曲线的绘制 精确吸取１μL,２μL,３μL,４μL,５μL,６μL,７μL烷基间苯二酚同系物C１５:０标准储备液于玻璃孵 育瓶中,氮气吹干溶剂后,加入２mL新鲜配制重氮盐工作液,混匀后室温放置在黑暗处,孵育６０min,以 未加入标准储备液的重氮盐工作液为空白参比,测定５２０nm波长下的吸光值.根据５􀆰３􀆰１中标准储备 液的浓度,计算不同加样体积下烷基间苯二酚的绝对质量(μg),以吸光值为横坐标,烷基间苯二酚绝对量 为纵坐标绘制标准曲线,计算回归方程. ６􀆰４　样品检测 取６􀆰２中１０μL~２０μL(V)备用提取液于玻璃孵育瓶中,氮气吹干溶剂后,加入２􀆰０mL新鲜配制的 重氮盐工作液,混匀后室温放置在黑暗处,孵育６０min,以未加入提取液的重氮盐工作液为空白参比,测 定５２０nm波长下的吸光值,代入标准曲线得到烷基间苯二酚绝对质量(m). ７　计算结果 试样中烷基间苯二酚的含量按公式(１)计算. C＝m×１０００ M×V(１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: C———试样中烷基间苯二酚含量的数值,单位为微克每克(μg/g); m———６􀆰４中所加备用提取液中烷基间苯二酚绝对质量的数值,单位为微克(μg); M———６􀆰２中试样质量的数值,单位为克(g); ２NY/T４８６２—２０２５ V———６􀆰４中所加备用提取液体积的数值,单位为微升(μL). 试验结果以平行测定结果的平均值计,计算结果保留小数点后１位数字. ８　精密度 在重复性条件下获得２次独立测定结果的绝对值差值不应超过算术平均值的１０％. ３