2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 姜 及 其 制 品 中 姜 黄 素 类 化 合 物 的 测 定 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 0 4 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 4 8 8 8 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f c u r c u m i n c o m p o u n d s i n g i n g e r a n d i t s p r o d u c t s — L i q u i d c h r o m a t o g r a p h y - t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４８８８—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出. 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口. 本文件起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院蔬菜花卉研究 所、福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、上海市农业科学院、厦门市华测检测技术有限公 司、河北工程大学. 本文件主要起草人:翁瑞、吕君、傅建炜、徐东辉、刘贵巧、鄂恒超、许晓敏、陈燕婷、邱静、韦航、赵晓燕、 郑鹭飞、蒋宜轩、钱永忠. ⅠNY/T４８８８—２０２５ 姜及其制品中姜黄素类化合物的测定 液相色谱串联质谱法 １　范围 本文件描述了姜及其制品中姜黄素类化合物含量的液相色谱串联质谱测定方法. 本文件适用于生姜、干姜、姜片及姜粉中姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素含量的测定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB５００９􀆰３　食品安全国家标准　食品中水分的测定 GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 姜黄素类化合物　curcuminoids 姜科、天南星科植物根茎中的酸性多酚类物质,主链为不饱和脂族及芳香族基团,为二酮类化合物. ４　原理 姜及其制品中的姜黄素类化合物经甲醇提取,液相色谱串联质谱仪测定,外标法定量. ５　试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T６６８２规定的一级水. ５􀆰１　试剂 ５􀆰１􀆰１　乙腈(C２H３N):色谱纯. ５􀆰１􀆰２　甲醇(CH４O):色谱纯. ５􀆰１􀆰３　甲酸(CH２O２):色谱纯. ５􀆰２　溶液配制 ５􀆰２􀆰１　０􀆰０５％甲酸溶液:准确移取０􀆰５mL甲酸(５􀆰１􀆰３)至１０００mL容量瓶中,用水定容至刻度. ５􀆰２􀆰２　０􀆰０５％甲酸乙腈溶液:准确移取０􀆰５mL甲酸(５􀆰１􀆰３)至１０００mL容量瓶中,用乙腈(５􀆰１􀆰１)定容 至刻度. ５􀆰３　标准物质 ５􀆰３􀆰１　姜黄素(Curcumin,C２１H２０O６,CAS号:４５８Ｇ３７Ｇ７),纯度≥９８％. ５􀆰３􀆰２　去甲氧基姜黄素(Demethoxycurcumin,C２０H１８O５,CAS号:３３１７１Ｇ１６Ｇ３),纯度≥９８％. ５􀆰３􀆰３　双去甲氧基姜黄素(Bisdemethoxycurcumin,C１９H１６O４,CAS号:３３１７１Ｇ０５Ｇ０),纯度≥９８％. ５􀆰４　标准溶液配制 ５􀆰４􀆰１　标准储备溶液:分别称取姜黄素(５􀆰３􀆰１)、去甲氧基姜黄素(５􀆰３􀆰２)和双去甲氧基姜黄素(５􀆰３􀆰３) １􀆰０mg(精确到０􀆰００００１g)于１０mL棕色容量瓶,用甲醇(５􀆰１􀆰２)溶解并定容至刻度,配制成浓度为 １００mg/L的标准储备溶液,于４℃密封保存,有效期为１周. １NY/T４８８８—２０２５ ５􀆰４􀆰２　标准工作溶液:移取适量标准储备液(５􀆰４􀆰１),用甲醇(５􀆰１􀆰２)稀释成浓度为２０μg/L、５０μg/L、 １００μg/L、２００μg/L、５００μg/L、１０００μg/L的混合标准工作溶液,现配现用. ５􀆰５　材料 微孔滤膜:０􀆰２２μm有机相滤膜. ６　仪器设备 ６􀆰１　液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI). ６􀆰２　分析天平:感量０􀆰０１g、０􀆰００１g和０􀆰００００１g. ６􀆰３　真空冷冻干燥机. ６􀆰４　研磨仪. ６􀆰５　试验筛:孔径１８０μm. ６􀆰６　超声波仪:频率不低于２０kHz. ６􀆰７　振荡器:振荡速度不低于２５０r/min. ６􀆰８　离心机:转速不低于１００００r/min. ７　分析步骤 整个实验过程应在避光条件下进行. ７􀆰１　试样的制备 ７􀆰１􀆰１　生姜:取代表性样品约１kg,清洗擦干后取可食部分切片,混匀,四分法缩分至约１５０g,在－７０℃ 条件下真空冷冻干燥至水分含量≤５％.用研磨仪将其粉碎,全部过１８０μm试验筛,－２０℃下避光保 存.水分含量测定按GB５００９􀆰３的规定执行. ７􀆰１􀆰２　干姜、姜片和姜粉:取代表性样品约１００g,用研磨仪粉碎,全部过１８０μm试验筛,测定水分含量 后,－２０℃下避光保存.水分含量测定按GB５００９􀆰３的规定执行. ７􀆰２　试样的提取 干姜、姜片和姜粉:称取试样约１g(精确至０􀆰００１g)于５０mL塑料离心管中,加入３０mL甲醇 (５􀆰１􀆰２),涡旋１min后,在室温超声提取１０min,随后２５０r/min振荡４h,于１００００r/min离心５min,取 上清液经０􀆰２２μm有机相滤膜(５􀆰５)过滤至棕色样品瓶,待测. ７􀆰３　测定 ７􀆰３􀆰１　液相色谱参考条件 具体参考条件如下: a)　色谱柱:C１８色谱柱,２􀆰１mm×１００mm,粒径２􀆰５μm,或性能相当的色谱柱; b)流动相:A相为０􀆰０５％甲酸溶液(５􀆰２􀆰１),B相为０􀆰０５％甲酸乙腈溶液(５􀆰２􀆰２); c)流速:０􀆰４５mL/min; d)进样量:５μL; e)柱温:３５℃; f)流动相梯度洗脱程序见表１. 表１　流动相梯度洗脱程序 时间 minA相 ％B相 ％ ０ ５０ ５０ １􀆰６ ５０ ５０ ２􀆰０ ０ １００ ５􀆰０ ０ １００ ２NY/T４８８８—２０２５ 表１(续) 时间 minA相 ％B相 ％ ５􀆰１ ５０ ５０ ８􀆰０ ５０ ５０ ７􀆰３􀆰２　质谱参考条件 具体参考条件如下: a)电离源:电喷雾离子源; b)　电离源极性:正离子模式; c)质谱扫描方式:多离子反应监测(MRM); d)电喷雾电压:３􀆰６kV; e)雾化温度:３２０℃; f)离子传输管温度:３２５℃; g)姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的质谱分析参考参数见表２. 表２　姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的质谱分析参考参数 化合物保留时间 min定量离子对 m/z定性离子对 m/z聚焦透镜电压 V碰撞能量 eV 双去甲氧基姜黄素 ２􀆰２４ ３０９􀆰１→２２５􀆰１ ３０９􀆰１→１４７􀆰１ １２８ １３/２１ 去甲氧基姜黄素 ２􀆰５０ ３３９􀆰２→２５５􀆰１ ３３９􀆰２→１４７􀆰１ １４８ １５/２１ 姜黄素 ２􀆰８０ ３６９􀆰２→２８５􀆰１ ３６９􀆰２→１７７􀆰１ １３９ １６/１８ ７􀆰３􀆰３　定性测定 通过试样中各组分的保留时间和特征离子与相应标准物质的保留时间和特征离子对照进行定性.在 相同测试条件下,目标化合物在试样中的保留时间与标准物质的保留时间偏差不超过±２􀆰５％,且相对离 子丰度与浓度相当的标准物质的离子丰度偏差不超过表３的规定范围,可判定试样中存在目标化合物. 表３　定性测定中相对离子丰度的最大允许偏差 单位为百分号 相对离子丰度 ＞５０ ＞２０~５０ ＞１０~２０ ≤１０ 允许相对偏差 ±２０ ±２５ ±３０ ±５０ ７􀆰３􀆰４　定量测定 将试样溶液和标准工作溶液在相同的液相色谱串联质谱条件下进行测定,以标准工作溶液浓度为横 坐标,姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素定量离子的峰面积为纵坐标作多点校准.姜黄素、去 甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素标准溶液的MRM色谱图见附录A中的图A􀆰１. ８　结果计算 试样中姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素含量按公式(１)计算. ωi＝ρi×V １０×m×(１００－X)(１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: ωi———试样中姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素含量的数值,单位为毫克每千克(mg/kg), 以干重计; ρi———从标准工作曲线得到的试样溶液中目标物质量浓度的数值,单位为微克每升(μg/L); V———试样溶液定容体积的数值,单位为毫升(mL); m———试样称样质量的数值,单位为克(g); X———试样中水分含量的数值,单位为克每百克(g/１００g). ３NY/T４８８８—２０２５ 计算结果以重复性条件下获得的平行测定结果的算术平均值表示,结果保留３位有效数字. ９　精密度和灵敏度 ９􀆰１　灵敏度 本方法测定姜黄素和去甲氧基姜黄素的检出限为０􀆰００６mg/kg,定量限为０􀆰０１５mg/kg;双去甲氧基 姜黄素的检出限为０􀆰００３mg/kg,定量限为０􀆰０１５m