2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 长 牡 蛎 三 倍 体 苗 种 繁 育 技 术 规 范 5 1 中 华 人 民 共 和 国 水 产 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 5 0 C C S B 2 1 2 8 — 2 0 2 5 T e c h n i c a l s p e c i f i c a t i o n o f a r t i f i c i a l b r e e d i n g f o r t r i p l o i d s e e d o f t h e P a c i f i c o y s t e r S C ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布SC/T２１２８—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出. 本文件由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会(SAC/TC１５６/SC２)归口. 本文件起草单位:中国海洋大学、中国科学院海洋研究所、辽宁省海洋水产科学研究院、乳山市海洋经 济发展中心. 本文件主要起草人:李琪、徐成勋、李海昆、孔令锋、李莉、于瑞海、于红、刘士凯、王庆志、谭林涛. ⅠSC/T２１２８—２０２５ 长牡蛎三倍体苗种繁育技术规范 １　范围 本文件规定了长牡蛎(Crassostreagigas)三倍体苗种繁育的环境与设施、亲贝培育、人工授精、孵化 与选优、幼虫培育、中间培育和出苗的技术要求,描述了记录和档案管理等相应的证实方法. 本文件适用于长牡蛎三倍体苗种繁育生产与管理. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T２２２１３　水产养殖术语 NY５３６２　无公害食品　海水养殖产地环境条件 SC/T２１０６　牡蛎人工繁育技术规范 SC/T２１２９　三倍体长牡蛎　亲贝和苗种 ３　术语和定义 GB/T２２２１３界定的以及下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 长牡蛎三倍体　triploidPacificoyster 体细胞中含有３个染色体组的长牡蛎(３n＝３０). ３􀆰２ 长牡蛎四倍体　tetraploidPacificoyster 体细胞中含有４个染色体组的长牡蛎(４n＝４０),可产生有２个染色体组的配子. ４　环境与设施 ４􀆰１　场址与环境 交通便利,供电充足,海水供给充足,有淡水水源,有中间培育池塘或海区,环境条件应符合NY５３６２ 的规定. ４􀆰２　设施 ４􀆰２􀆰１　育苗设施 应符合SC/T２１０６的规定. ４􀆰２􀆰２　倍性检测设备 宜配备流式细胞仪及配套的检测器具. ５　亲贝培育 ５􀆰１　来源 应符合SC/T２１２９的规定. ５􀆰２　质量要求 ５􀆰２􀆰１　长牡蛎二倍体雌性亲贝 体细胞染色体数２n＝２０;壳面洁净,无损伤;宜使用２龄亲贝. １SC/T２１２８—２０２５ ５􀆰２􀆰２　长牡蛎四倍体雄性亲贝 体细胞染色体数４n＝４０;壳面洁净,无损伤;宜使用１龄~２龄亲贝. ５􀆰３　培育条件 ５􀆰３􀆰１　温度 自然水温暂养７d~１０d,此后以每日０􀆰５℃~１􀆰０℃的速度升温,１５℃时恒温稳定７d~１０d,升至 １８℃~２２℃后恒温２０d以上待产. ５􀆰３􀆰２　溶解氧 连续微量充气,溶解氧应保持在５mg/L以上. ５􀆰３􀆰３　光照强度 ５００lx~１０００lx. ５􀆰３􀆰４　盐度 ２５~３２. ５􀆰３􀆰５　密度 二倍体亲贝３０ind/m３~５０ind/m３,四倍体亲贝２０ind/m３~４０ind/m３. ５􀆰４　日常管理 四倍体亲贝和二倍体亲贝分开单独培育.日常管理按照SC/T２１０６的规定执行. ６　人工授精 ６􀆰１　采卵 ６􀆰１􀆰１　二倍体亲贝选择 宜遵循以下步骤: a)　开壳用具每次使用前在淡水中洗净; b)用开壳用具在靠近亲贝闭壳肌一侧开一小口,将开壳用具沿小口伸入,紧贴右壳切断闭壳肌后撬 开,保证生殖腺不被划破; c)取少量生殖腺在显微镜下观察,细胞为圆形、梨形或椭圆形,直径４０μm~５０μm,且视野中无 精子; d)确定为雌性后单独放置待授精时使用,温度宜为１０℃~１５℃,时间不宜超过８h. ６􀆰１􀆰２　卵子收集 取雌性亲贝的生殖腺放于盛有过滤海水的容器中揉碎,４０个~５０个亲贝为一组.卵液先经２００目筛 绢过滤,后经５００目筛绢收集清洗,置于海水中浸泡３０min~４０min. ６􀆰２　采精 ６􀆰２􀆰１　四倍体亲贝选择 宜遵循以下步骤: a)　开壳用具每次使用前在淡水中洗净; b)用开壳用具在靠近亲贝闭壳肌一侧开一小口,将开壳用具沿小口伸入,紧贴右壳切断闭壳肌后撬 开,保证生殖腺不被划破; c)用镊子取少量鳃丝,进行流式细胞仪检测; d)确定为四倍体后,取少量生殖腺在显微镜下观察,有游动精子,不存在卵细胞; e)雄性四倍体单独放置,温度宜为１０℃~１５℃,时间不宜超过４h. ６􀆰２􀆰２　精子收集 取每个雄性亲贝的生殖腺放于盛有过滤海水的容器中揉碎,精液经２００目~３５０目筛绢过滤后备用. ６􀆰３　人工授精 将精液逐渐加入卵液中,其间不断搅拌,及时取样置于显微镜下观察,视野中每个卵子周围有２个~４ ２SC/T２１２８—２０２５ 个精子为宜.搅拌２０min~３０min后转移至孵化池中孵化,其间保持水温２２℃~２５℃. ７　孵化与选优 ７􀆰１　孵化 微量充气,３０min~６０min搅动１次,直至幼虫上浮.孵化密度２０ind/mL~３０ind/mL为宜.水温 ２２℃~２６℃,盐度２５~３２. ７􀆰２　选优 发育至D形幼虫后选优.选优前３０min停止充气,用３００目筛绢收集上层幼虫,转入培育池中培育. ８　幼虫培育 ８􀆰１　培育条件 密度宜为５ind/mL~１０ind/mL,温度２２℃~２５℃,盐度２５~３２,光照强度≤５００lx. ８􀆰２　日常管理 ８􀆰２􀆰１　投饵 D形幼虫期投喂金藻,日投饵量１×１０４cell/mL~２×１０４cell/mL,分４次~６次投喂.幼虫壳高超过 １２０μm后可少量增投角毛藻或扁藻等,逐渐加大日投饵量至３×１０４cell/mL~５×１０４cell/mL,分６次~ ８次投喂,依据摄食情况调整投饵量. ８􀆰２􀆰２　换水 早晚各换水１次,壳顶幼虫之前每次换水１/３,之后逐渐增加到１/２.每隔５d~７d全量换水１次. ８􀆰３　采苗 ８􀆰３􀆰１　采苗密度 ２ind/mL~３ind/mL. ８􀆰３􀆰２　采苗器 通常为扇贝壳,以串为单位投放,每串４５０片~５００片. ８􀆰３􀆰３　采苗器处理 用高压水枪反复冲洗干净,放在过滤海水中浸泡２４h. ８􀆰３􀆰４　采苗时机 当幼虫壳高达３００μm~３５０μm时,眼点幼虫比例达１/２以上时投放采苗器. ８􀆰３􀆰５　采苗器投放 均匀悬挂于水中,每立方水体投放５０００片~６０００片. ８􀆰４　采苗期间管理 日换水量宜达到１００％以上.日投饵量５×１０４cell/mL~１×１０５cell/mL,分８次~１２次投喂.当苗 种壳高达０􀆰５mm以上时,可转移至室外进行中间培育.室外水温低于苗种培育水温时,应先以１℃/d~ ２℃/d的速度降低至温差不超过４℃. ９　中间培育 ９􀆰１　场地和环境条件 选择靠近育苗场,透明度３０cm~６０cm,水深２m以上的池塘.或选择风浪小、水流通畅、无污水排 入的内湾海区. ９􀆰２　池塘日常管理 用浮球将附有苗种的贝壳吊养在梗绳上,每日换水２０％,依据摄食情况及时补充单胞藻饵料. １０　出苗 当壳高５mm以上的苗种超过５０％时,移至海区进行养成,三倍体率应达９５％以上. ３SC/T２１２８—２０２５ １１　记录和档案管理 １１􀆰１　记录 应做好生产和销售等各项记录,记录内容和频次应能证明各项要求得到实施.记录包括但不限于: a)　水质日常监测记录; b)投饵和换水等日常管理记录; c)出苗和销售记录等. １１􀆰２　档案管理 应制定记录归档和保存管理制度.记录应保存至该批苗种全部销售后２年以上. ４