2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 三 倍 体 长 牡 蛎 亲 贝 和 苗 种 5 1 中 华 人 民 共 和 国 水 产 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 5 0 C C S B 2 1 2 9 — 2 0 2 5 T r i p l o i d P a c i f i c o y s t e r — B r o o d s t o c k a n d s e e d i n g S C ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布SC/T２１２９—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出. 本文件由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会(SAC/TC１５６/SC２)归口. 本文件起草单位:中国科学院海洋研究所、青岛前沿海洋种业有限公司、中国海洋大学、山东省海洋科 学研究院、乳山市海洋经济发展中心. 本文件主要起草人:李莉、郭希瑞、李琪、丛日浩、王威、李雅林、纪右康、刘明坤、吴富村、张守都、谭林 涛、张国范. ⅠSC/T２１２９—２０２５ 三倍体长牡蛎　亲贝和苗种 １　范围 本文件界定了三倍体长牡蛎(Crassostreagigas)亲贝和苗种的术语和定义,规定了来源和质量要求, 给出了对应的检验方法和检验规则,规定了包装与运输要求. 本文件适用于三倍体长牡蛎亲贝和苗种的质量评定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T２０５５２　长牡蛎 GB/T２２２１３　水产养殖术语 ３　术语和定义 GB/T２２２１３界定的以及下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 三倍体长牡蛎　triploidPacificoyster 体细胞中含有３个染色体组的长牡蛎(３n＝３０). ３􀆰２ 三倍体率　triploidrate 检测样品中三倍体个体数与总检测个体数的比值. ３􀆰３ 附片苗　attachedspat 附着在片状采苗器上的苗种. ３􀆰４ 单体苗　cultchlessspat 无固着基且个体间完全分离的苗种. ４　亲贝 ４􀆰１　来源 二倍体雌性亲贝源于养殖海区或原(良)种场,四倍体雄性亲贝源于四倍体制种单位. ４􀆰２　质量要求 ４􀆰２􀆰１　二倍体雌性亲贝 应符合GB/T２０５５２的规定,二倍体雌性亲贝体细胞染色体数２n＝２０. ４􀆰２􀆰２　四倍体雄性亲贝 四倍体雄性亲贝体细胞染色体数４n＝４０. ４􀆰２􀆰３　年龄 １龄~２龄. ４􀆰２􀆰４　外观 外壳无破损,无畸形. １SC/T２１２９—２０２５ ４􀆰２􀆰５　规格 壳高≥５cm. ４􀆰２􀆰６　繁殖期特征 生殖腺饱满,呈乳白色或微黄色,覆盖整个消化腺;精子流出后呈白色奶状,遇水后快速分离呈雾状; 卵子流出后呈颗粒状,遇水后均匀分散. ４􀆰２􀆰７　生殖细胞 卵子大小均匀,椭圆形或圆形,熟化后直径４０μm~５０μm;精子在海水中运动活跃. ５　苗种 ５􀆰１　来源 由四倍体雄性亲贝和二倍体雌性亲贝繁育的苗种. ５􀆰２　质量要求 ５􀆰２􀆰１　倍性 三倍体长牡蛎苗种体细胞染色体数:３n＝３０. ５􀆰２􀆰２　附片苗 ５􀆰２􀆰２􀆰１　外观 外壳完整,规格均匀,左壳附着在附苗器上. ５􀆰２􀆰２􀆰２　密度 常规扇贝壳采苗器苗种密度宜１０粒/壳~３０粒/壳,其他采苗器附苗密度以０􀆰２粒/cm２~１􀆰５粒/cm２ 为宜. ５􀆰２􀆰２􀆰３　三倍体率 ≥９５％. ５􀆰２􀆰３　单体苗 ５􀆰２􀆰３􀆰１　外观 外壳完整,规格均匀,单体,无附着粘连. ５􀆰２􀆰３􀆰２　三倍体率 ≥９５％. ６　检验方法 ６􀆰１　亲贝 ６􀆰１􀆰１　倍性 按GB/T２０５５２的方法检测,或参照附录A的方法检测. ６􀆰１􀆰２　年龄 查阅亲贝生产记录. ６􀆰１􀆰３　外观 将亲贝放置于白色瓷盘中,去除表面水渍,在充足自然光或白光灯下肉眼观察. ６􀆰１􀆰４　规格 壳高使用游标卡尺测量. ６􀆰１􀆰５　繁殖期特征 去除牡蛎右壳,肉眼观察生殖腺肥满度和颜色,取少许生殖腺放置于盛放海水的器皿中,观察精子或 卵子在水中的扩散现象. ６􀆰１􀆰６　生殖细胞 在显微镜下观察卵子形状和精子活力,用显微镜测量卵径. ２SC/T２１２９—２０２５ ６􀆰２　苗种 ６􀆰２􀆰１　来源 查阅苗种生产记录. ６􀆰２􀆰２　三倍体率 用流式细胞仪检测苗种的三倍体率,必要时按GB/T２０５５２的规定进行校正. ７　检验规则 ７􀆰１　亲贝 ７􀆰１􀆰１　检验 检验二倍体雌性亲贝和四倍体雄性亲贝的倍性、年龄、外观、规格、繁殖期特征和生殖细胞等记录 或证明. ７􀆰１􀆰２　组批 同一批次养殖的亲贝作为一个检验批次. ７􀆰１􀆰３　抽样方法 随机抽取二倍体雌性亲贝和四倍体雄性亲贝均不少于１０个亲贝进行繁殖期特征、生殖细胞及倍性检 测;其中所有四倍体雄性亲贝均需逐一进行倍性检测;随机抽取不少于３０个亲贝进行年龄、外观、规格等 指标检测. ７􀆰２　苗种 ７􀆰２􀆰１　检验 检验苗种的外观、三倍体率和密度. ７􀆰２􀆰２　组批 同一次繁殖的苗种作为一个检验批次. ７􀆰２􀆰３　抽样方法 随机抽取３０片采苗器进行附片苗的苗种密度检测;随机抽取不少于５０粒苗种进行外观和三倍体率 检测. ８　判定规则 ８􀆰１　亲贝 检验结果符合第４章的要求,倍性检验合格率为１００％,判定本批次亲贝合格. 对判定结果有异议,可复检１次,以复检结果为准. ８􀆰２　苗种 检验结果符合第５章的要求,判定本批次苗种合格. 对判定结果有异议,可复检１次,以复检结果为准. ９　包装与运输 ９􀆰１　亲贝 使用泡沫箱加冰瓶或冰袋运输,运输温度４℃~１５℃,运输时间不宜超过４８h. ９􀆰２　苗种 附片苗使用塑料筐、网兜等分装,单体苗使用尼龙筛绢袋分装,运输温度宜为１５℃~２０℃,运输时间 不宜超过４８h,运输过程中避免日晒风吹和淋雨. ３SC/T２１２９—２０２５ 附　录　A (资料性) 流式细胞仪检测倍性配方和操作方法 A􀆰１　试剂材料 DAPI/DMSO混合溶液、５００目筛绢. A􀆰２　仪器 流式细胞仪. A􀆰３　方法 取待检组织制成细胞悬浮液,然后置入１mL１０μg/mLDAPI/DMSO混合溶液[１４６mmolNaCl, １０mmolTris(pH７􀆰４),２mmolMgCl２,０􀆰０５gBAS,０􀆰１％TritonXＧ１００]进行染色;使用５００目筛绢(网 目直径小于３５μm)过滤得到流式细胞仪上样样品;流式细胞仪进行倍性检测,激发光波长为３５５nm,用 ４４０/４０BP收集;以经染色体计数检测２n＝２０的野生二倍体长牡蛎为对照,检验待测个体的峰值.峰值 是野生二倍体长牡蛎２倍(±５％)的个体判定为四倍体,峰值是野生二倍体长牡蛎１􀆰５倍(±５％)的个体判 定为三倍体,峰值是野生二倍体长牡蛎１倍(±５％)的个体判定为二倍体. ４