ICS65.150 CCSB50 中华人民共和国国家标准 GB/T18654.12—2026 代替GB/T18654.12—2008 鱼类种质检验 第12部分:染色体组型分析 Inspectionofgermplasmforfishes— Part12:Testmethodforthekaryotype 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是GB/T18654《鱼类种质检验》的第12部分。GB/T18654已经发布了以下部分: ———第1部分:检验规则; ———第2部分:抽样方法; ———第3部分:性状测定; ———第4部分:年龄与生长的测定; ———第5部分:食性分析; ———第6部分:繁殖性能的测定; ———第7部分:生态特性分析; ———第8部分:耗氧率与临界窒息点的测定; ———第9部分:含肉率测定; ———第10部分:肌肉营养成分的测定; ———第12部分:染色体组型分析; ———第13部分:同工酶电泳分析; ———第14部分:DNA含量的测定。 本文件代替GB/T18654.12—2008《养殖鱼类种质检验 第12部分:染色体组型分析》,与 GB/T18654.12—2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 更改了试剂与材料(见第5章,2008年版的第5章); b) 更改了仪器设备(见第6章,2008年版的第6章); c) 将“抽样”更改为“样品”(见第7章,2008年版的7.1); d) 将“玻片标本的制备”更改为“试验步骤”(见第8章,2008年版的第7章); e) 增加了玻片标本的保存(见8.2); f) 增加了显微镜观察与拍照(见8.3); g) 将“组型分析”更改为“数据处理”(见第9章,2008年版的第8章); h) 删除了用游标卡尺测量染色体臂数的方法(见2008年版的8.3); i)增加了用photoshop或类似软件测量染色体长度的方法(见9.3); j)更改了核型公式的表述(见9.4,2008年版的8.4)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。 本文件起草单位:中国水产科学研究院长江水产研究所、广西壮族自治区水产科学研究院、浙江省 农业科学院水生生物研究所、中国水产科学研究院黑龙江水产研究所。 本文件主要起草人:周剑光、罗永巨、楼宝、张林、周运涛、李池陶、毛涛、刘峰、林勇、喻亚丽、谷伟、 张涛、彭婕、张浪、徐革锋、严欣、黄婷、刘永涛、伍刚、董立学、陆专灵、吴铁军、罗帮、何力、李珍。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2002年首次发布为GB/T18654.12—2002,2008年第一次修订; ———本次为第二次修订。 ⅠGB/T18654.12—2026 引 言 水产种质资源是渔业生产活动重要的物质基础。《养殖鱼类种质检验》分部分标准是鱼类种质检测 的基础性通用标准。标准实施以来,在鱼类资源调查、保护、增殖、利用等活动中发挥了重要作用。为更 好地服务于渔业发展和检测需求,将《养殖鱼类种质检验》名称更改为《鱼类种质检验》,对标准的部分内 容进行了修订。 GB/T18654拟由以下部分构成。 ———第1部分:检验规则。目的在于描述鱼类种质检验分类、检验项目、判定规则和复检规则。 ———第2部分:抽样方法。目的在于描述鱼类种质检验抽样的试剂与器械用品、抽样规则、取样程 序、样本量和样本保存。 ———第3部分:性状测定。目的在于描述鱼类性状测定的试剂与材料、仪器设备、样品制备和试验 步骤、数据处理。 ———第4部分:年龄与生长的测定。目的在于描述鱼类年龄与生长测定的试剂与材料、仪器设备、 样品、试验步骤和数据处理。 ———第5部分:食性分析。目的在于描述鱼类食性分析的试剂与材料、仪器设备、样品、试验步骤和 数据处理。 ———第6部分:繁殖性能的测定。目的在于描述鱼类怀卵量、产卵量测定的试剂与材料、仪器设备、 样品、试验步骤和数据处理。 ———第7部分:生态特性分析。目的在于描述鱼类生态特性(温度、盐度耐受性)分析的试剂、仪器 设备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第8部分:耗氧率与临界窒息点的测定。目的在于描述鱼类耗氧率与临界窒息点测定的试剂 与材料、仪器设备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第9部分:含肉率测定。目的在于描述鱼类含肉率测定的试剂与材料、仪器设备、样品、试验步 骤和数据处理。 ———第10部分:肌肉营养成分的测定。目的在于描述鱼类肌肉营养成分(水分、灰分、蛋白质、氨基 酸、脂肪及脂肪酸)测定的试剂与材料、仪器设备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第12部分:染色体组型分析。目的在于描述鱼类染色体组型分析的原理、试剂与材料、仪器设 备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第13部分:同工酶电泳分析。目的在于描述鱼类同工酶电泳分析的试剂与材料、仪器设备、样 品、试验步骤和数据处理。 ———第14部分:DNA含量的测定。目的在于描述鱼类DNA含量测定的试剂与材料、仪器设备、 样品、试验步骤和数据处理。 ⅡGB/T18654.12—2026 鱼类种质检验 第12部分:染色体组型分析 1 范围 本文件描述了鱼类染色体组型分析的原理、试剂与材料、仪器设备、样品、试验步骤和数据处理。 本文件适用于鱼类种质检验的染色体组型分析。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18654.2 鱼类种质检验 第2部分:抽样方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 体细胞体外培养法 somaticcellcultureinvitro 在无菌条件下,获取鱼的肾脏、脾脏、血液或上皮组织细胞,在体外培养过程中,加入细胞分裂刺激 物,促使淋巴细胞大量进入分裂状态;然后加入秋水仙素,使细胞分裂被阻抑在分裂中期,获得鱼类细胞 染色体中期分裂相。 3.2 体细胞体内培养法 somaticcellcultureinvivo 向鱼体内注射细胞分裂刺激物,促使淋巴细胞大量进入分裂状态,注射秋水仙素(或者取出肾脏组 织或脾脏组织在生理盐水中充分撕碎,加入秋水仙素),使细胞分裂被阻抑在分裂中期,获得鱼类细胞染 色体中期分裂相。 3.3 体细胞直接法 directmethodofsomaticcells 将样品鱼暂养在秋水仙素溶液中,使其分裂旺盛的鳃丝上皮细胞或鳍条上皮细胞被阻抑在分裂中 期,获得鱼类细胞染色体中期分裂相。 3.4 胚胎细胞直接法 directmethodofembryocells 选用发育正常的囊胚期或原肠期早期胚胎或发眼卵胚胎,将其细胞吹打分散,加入秋水仙素,使细 胞分裂被阻抑在分裂中期,获得鱼类细胞染色体中期分裂相。 1GB/T18654.12—2026 4 原理 使用细胞分裂刺激物刺激鱼类淋巴细胞分裂,或收集细胞分裂旺盛的鳃丝上皮细胞、鳍条上皮细 胞、胚胎细胞,用秋水仙素破坏纺锤丝,使细胞分裂被阻抑在分裂中期,经低渗、固定、滴片和染色,显微 镜镜检获得分裂相进行组型分析。 5 试剂与材料 5.1 试剂 除另有规定外,所有试剂均为分析纯。试验用水为符合GB/T6682规定的一级水。 5.1.1 高锰酸钾(KMnO4)。 5.1.2 乙醇(CH3CH2OH),浓度(体积分数)95%。 5.1.3 氯化钠(NaCl)。 5.1.4 碳酸氢钠(NaHCO3)。 5.1.5 小牛血清,单位为毫升(mL)。 5.1.6 胎牛血清,单位为毫升(mL)。 5.1.7 细胞培养基(M-199、RPMI-1640或EaglesMEM等商品培养基或自制培养基)。 5.1.8 青霉素,单位为国际单位(IU)。 5.1.9 链霉素,单位为毫克(mg)。 5.1.10 卡那霉素,单位为国际单位(IU)。 5.1.11 植物血球凝集素(PHA)。 5.1.12 秋水仙素。 5.1.13 无水磷酸氢二钠(Na2HPO4)。 5.1.14 无水磷酸二氢钠(NaH2PO4)。 5.1.15 胰酶消化溶液,0.25%胰酶。 5.1.16 氯化钾(KCl)。 5.1.17 甲醇(CH3OH)。 5.1.18 无水乙醇(CH3CH2OH)。 5.1.19 冰乙酸(CH3COOH),乙酸含量98%以上。 5.1.20 重铬酸钾(K2Cr2O7)。 5.1.21 浓硫酸(H2SO4),浓度(质量分数)98%。 5.1.22 姬姆萨(Giemsa)粉。 5.1.23 甘油[C3H5(OH)3]。 5.1.24 肝素钠,单位为国际单位(IU)。 5.2 溶液配制 5.2.1 KMnO4溶液 根据消毒水体体积,称取KMnO4(5.1.1),配制1mg/L~2mg/LKMnO4溶液。 2GB/T18654.12—2026 5.2.2 75%乙醇溶液 取100mL95%乙醇(5.1.2),加26.67mL去离子水或蒸馏水,混匀。 5.2.3 生理盐水 0.7%~0.9%NaCl溶液,称取7.0g~9.0gNaCl(5.1.3),加入1L无菌水,混匀,121℃、 103.4kPa、