ICS65.150 CCSB50 中华人民共和国国家标准 GB/T18654.14—2026 代替GB/T18654.14—2008 鱼类种质检验 第14部分:DNA含量的测定 Inspectionofgermplasmforfishes— Part14:DeterminationofDNAcontent 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是GB/T18654《鱼类种质检验》的第14部分。GB/T18654已经发布了以下部分: ———第1部分:检验规则; ———第2部分:抽样方法; ———第3部分:性状测定; ———第4部分:年龄与生长的测定; ———第5部分:食性分析; ———第6部分:繁殖性能的测定; ———第7部分:生态特性分析; ———第8部分:耗氧率与临界窒息点的测定; ———第9部分:含肉率测定; ———第10部分:肌肉营养成分的测定; ———第12部分:染色体组型分析; ———第13部分:同工酶电泳分析; ———第14部分:DNA含量的测定。 本文件代替GB/T18654.14—2008《养殖鱼类种质检验 第14部分:DNA含量的测定》,与 GB/T18654.14—2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 增加了原理(见第4章); b) 更改了试剂与材料(见第5章,2008年版的第3章); c) 更改了仪器设备(见第6章,2008年版的第4章); d) 更改了抽样(见第7章,2008年版的第5章); e) 更改了试验步骤和数据处理(见第8章和第9章,2008年版的第6章); f) 删除了结果判定(见2008年版的第7章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。 本文件起草单位:上海海洋大学、中国水产科学研究院长江水产研究所、中国水产科学研究院东海 水产研究所、四川省农业科学院水产研究所、中国水产科学研究院黑龙江水产研究所。 本文件主要起草人:赵金良、唐首杰、赵岩、周剑光、张林、张涛、周瑞琼、周凯、么宗利、来琦芳、周剑、 徐革锋、王高超、黄天晴、葛凯博。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2008年首次发布为GB/T18654.14—2008; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T18654.14—2026 引 言 水产种质资源是渔业生产活动重要的物质基础。《养殖鱼类种质检验》分部分标准是鱼类种质检测 的基础性通用标准。标准实施以来,在鱼类资源调查、保护、增殖、利用等活动中发挥了重要作用。为更 好地服务于渔业发展和检测需求,将《养殖鱼类种质检验》名称更改为《鱼类种质检验》,对标准的部分内 容进行了修订。 GB/T18654拟由以下部分构成。 ———第1部分:检验规则。目的在于描述鱼类种质检验分类、检验项目、判定规则和复检规则。 ———第2部分:抽样方法。目的在于描述鱼类种质检验抽样的试剂与器械用品、抽样规则、取样程 序、样本量和样本保存。 ———第3部分:性状测定。目的在于描述鱼类性状测定的试剂与材料、仪器设备、样品制备和试验 步骤、数据处理。 ———第4部分:年龄与生长的测定。目的在于描述鱼类年龄与生长测定的试剂与材料、仪器设备、 样品、试验步骤和数据处理。 ———第5部分:食性分析。目的在于描述鱼类食性分析的试剂与材料、仪器设备、样品、试验步骤和 数据处理。 ———第6部分:繁殖性能的测定。目的在于描述鱼类怀卵量、产卵量测定的试剂与材料、仪器设备、 样品、试验步骤和数据处理。 ———第7部分:生态特性分析。目的在于描述鱼类生态特性(温度、盐度耐受性)分析的试剂、仪器 设备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第8部分:耗氧率与临界窒息点的测定。目的在于描述鱼类耗氧率与临界窒息点测定的试剂 与材料、仪器设备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第9部分:含肉率测定。目的在于描述鱼类含肉率测定的试剂与材料、仪器设备、样品、试验步 骤和数据处理。 ———第10部分:肌肉营养成分的测定。目的在于描述鱼类肌肉营养成分(水分、灰分、蛋白质、氨基 酸、脂肪及脂肪酸)测定的试剂与材料、仪器设备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第12部分:染色体组型分析。目的在于描述鱼类染色体组型分析的原理、试剂与材料、仪器设 备、样品、试验步骤和数据处理。 ———第13部分:同工酶电泳分析。目的在于描述鱼类同工酶电泳分析的试剂与材料、仪器设备、样 品、试验步骤和数据处理。 ———第14部分:DNA含量的测定。目的在于描述鱼类DNA含量测定的试剂与材料、仪器设备、 样品、试验步骤和数据处理。 ⅡGB/T18654.14—2026 鱼类种质检验 第14部分:DNA含量的测定 1 范围 本文件描述了鱼类DNA含量测定的原理、试剂与材料、仪器设备、样品、试验步骤和数据处理。 本文件适用于鱼类DNA含量测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18654.2 鱼类种质检验 第2部分:抽样方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleicacid,简称DNA),是鱼类的遗传物质。每种鱼类单细胞中DNA 的含量是相对稳定的。因此,DNA含量可作为鱼类种质特征参数。DNA含量测定原理是:对细胞进 行固定、透化处理后,核酸染料染色,利用流式细胞仪测定单细胞中被染色DNA的消光值;再与已知 DNA含量大小的标准细胞的消光值比较,计算出单细胞的DNA含量。 5 试剂与材料 除另有规定外,所有试剂均为分析纯。试验用水为符合GB/T6682规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 磷酸氢二钠(Na2HPO4)。 5.1.2 二水合磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)。 5.1.3 氯化钠(NaCl)。 5.1.4 冰乙酸(CH3COOH)。 5.1.5 甲醇(CH3OH)。 5.1.6 肝素钠[(C14H25NO20S3)n.xNa]:125IU/mg。 5.1.7 胰酶(C20H28O2):-20℃保存。 5.1.8 核糖核酸酶(RNase):-20℃保存。 1GB/T18654.14—2026 5.1.9 碘化丙啶(C27H34I2N4)。 5.2 溶液配制 5.2.1 0.75%氯化钠:称取0.75g氯化钠(5.1.3),用水定容至100mL。 5.2.2 甲醇-冰乙酸固定液:量取3份体积甲醇(5.1.5),加入1份体积冰乙酸(5.1.4),现配现用。 5.2.3 500IU/mL肝素钠溶液:称取100mg肝素钠(12500IU)(5.1.6),用水定容至25mL。 5.2.4 5mg/mL胰酶液:称取250mg胰酶(5.1.7),用水定容至50mL。 5.2.5 1mg/mL核糖核酸酶溶液:称取50mg核糖核酸酶(5.1.8),用水定容至50mL。 5.2.6 0.05mg/mL碘化丙啶溶液:称取5mg碘化丙啶(5.1.9),用水定容至100mL。 5.2.7 0.1mol/L磷酸缓冲液:称取12.35g磷酸氢二钠(5.1.1)、20.3g二水合磷酸二氢钠(5.1.2),用 水定容至1L。 5.3 材料 5.3.1 锦纶筛网:规格为80孔/cm。 5.3.2 注射器:规格为5mL。 5.3.3 离心管:规格为5mL。 5.3.4 吸管:规格为5mL。 5.3.5 封口膜。 6 仪器设备 6.1 离心机:转速不低于800r/min,常温。 6.2 流式细胞仪。 7 样品 7.1 抽样 按GB/T18654.2的规定执行。 7.2 样品制备 7.2.1 用少量肝素钠溶液(5.2.3)润洗注射器(5.3.2),在鱼体尾动(静)脉处抽取0.2mL~1.0mL血液 为样品。在鸡翅静脉处取2mL血液备用。 7.2.2 采好的血样立即注入装有5mL0.75%氯化钠(5.2.1)或0.1mol/L磷酸缓冲液(5.2.7)的离心管 (5.3.3)中,用吸管(5.3.4)反复吹吸洗涤,500r/min离心5min。用吸管(5.3.4)吸除上清液及上层的白 细胞。重复上述步骤2次,慢慢滴入5mL甲醇-冰乙酸固定液(5.2.2)中,用封口膜(5.3.5)封好待用。 8 试验步骤 8.1 固定后的血样(7.2.2),800r/min离心2min,吸除上清液,用0.75%氯化钠(5.2.1)或0.1mol/L 磷酸缓冲液制成细胞悬浮液,静置1h以上。800r/min离心2min,吸除上清液。每份血样先加入 1.8mL5mg/mL胰酶液(5.2.4)作用10min,再加入1.5mL1mg/mL核糖核酸酶溶液(5.2.5)作用 10min,最后加入1.5mL0.05mg/mL碘化丙啶溶液(5.2.6)染色15min。 2GB/T18654.14—2026 8.2 用锦纶筛网(5.3.1)过滤,将血细胞浓度调到1×108个细胞/mL。 8.3 用流式细胞仪(6.2)进行测定,每份血样测量3000个以上红细胞,读出鱼红细胞的消光值(E2)与 鸡红细胞的消光值