ICS 67.050 X 04 T/SDJKR 团 体 标 准 T/SDJKR 003—2022 阿胶中驴骨源性成分鉴定方法 气相色谱 法 Identification of donkey bone derived components in Ejiao Gas chromatography method 2022-03-18发布 2022-04-18实施 山东健康肉产业联合会 发布 全国团体标准信息平台 T/SDJKR 003—2022 前 言 本文件按照新版 GB/T1.1- 2020《标准化工作导则第 1部分：标准化文件的结构和起草规则》的 规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东健康肉产业联合会提出并归口。 本文件起草单位：聊城大学、山东省农业科学院畜牧兽医研究所、东阿阿胶股份有限公司、聊 城市食品药品检验检测中心、山东省临清市康庄镇畜牧兽医站 、平阴县农业农村局 。 本文件主要起草人：李兰杰、 刘桂芹、张伟、 王会、冯秀颜、于杰、杜兴兰、王长法、嵇传良、 刘文强、周苗苗、李艳、邢敬亚、朱明霞、马青山、李孟孟、赵敏。 全国团体标准信息平台 T/SDJKR 003—2022 阿胶中驴骨源性成分鉴定方法 气相色谱检测法 1 范围 本文件规定了试验原理、试剂和材料、仪器设备、分析步骤和结果的分析与判定。 本文件适用于阿胶中驴骨源性成分的检测方法 ，其它含有驴骨源性的相关食品。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件无专用术语和定义。 4 试验原理 样品经乙酸乙酯提取其中的脂肪后，在碱性条件下皂化和甲酯化，生成脂肪酸甲酯，经气相色 谱分析，测定脂肪酸 —十五烷酸、月桂酸含量。 5 试剂和材料 除非另有说明， 本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 乙酸乙酯（C 4H8O2）：色谱纯。 5.1.2 正己烷（C 6H14）：色谱纯 。 5.1.3 甲醇（CH 3OH）：色谱纯。 5.1.4 无水硫酸钠（Na 2SO 4）：使用前于 120℃烘烤4 h。 5.1.5 氯化钠（NaCl ）。 5.1.6 氢氧化钾 （KOH）。 5.2 试剂配置 全国团体标准信息平台 T/SDJKR 003—2022 5.2.1 饱和氯化钠溶液： 称取 360 g 氯化钠溶解于1.0 L 水中，搅拌溶解， 澄清备用 。 5.2.2 氢氧化钾甲醇溶液（2 mol/L）：将13.1 g 氢氧化钾溶于 100 mL 无水甲醇中 ，可轻微加热， 加入无水硫酸钠干燥 ，过滤，即得澄清溶液 。 5.3 标准品 脂肪酸甲酯混合标准品：见资料性附录 A。 5.4 标准溶液配置 混合脂肪酸甲酯标准溶液 ：取出适量脂肪酸甲酯混合标准移至 10 mL容量瓶中 ，用正己烷稀释 定容，贮存于 —10 ℃以下，保存备用 。 6 仪器设备 6.1 高速粉碎机。 6.2 气相色谱仪：具有氢火焰离子检测器 （FID）。 6.3 毛细管色谱柱 ：70% 氰丙基聚硅氧烷， 柱长100 m，内径0.25 mm ，膜厚0.2 μm 。 6.4 恒温水浴 ：控温范围 40 ℃~100 ℃，精度 ±1 ℃。 6.5 分析天平 ：感量为 0.01 g 和 0.00001 g。 6.6 旋转蒸发仪。 7 分析步骤 7.1 试样的制备 试样使用高速 粉碎机粉碎。制备过程中 ，应避免试样污染。 7.2 试样前处理 7.2.1 油脂的提取 检测样品经高速 粉碎机粉碎后所得粉末。称取粉末 10.0 g置于250 mL圆底烧瓶中，加入 100 mL 乙酸乙酯常温并搅拌 24 h，经过抽滤得滤液，再将滤液用旋转蒸发仪进行旋蒸，回收溶剂后得到油 脂，—20 ℃保存备用。 7.2.2 油脂的水解、甲酯化 取10.0 mg油脂，加入 2.0 mL 14% 三氟化硼- 甲醇（质量比）溶液，再加入 3滴2,2-二甲基丙烷 进行除水， 60 ℃水浴 30 min，使脂肪酸完全甲酯化。冷却后加入正己烷 1.0 mL、水 1.0 mL充分震 荡，静置分层后吸取上层有机层，加入 0.1 mL浓度 400 ug/mL 的十七烷酸甲酯正己烷溶液 0.1 mL 做内标，使用氮吹仪完全吹干溶剂后，加入 400 μL正己烷溶解定容，准备气相色谱测定。 全国团体标准信息平台 T/SDJKR 003—2022 7.3 测定 7.3.1 色谱参考条件 气相色谱仪， 毛细管色谱柱 ，自动进样器；进样口温度： 280 ℃，火焰离子检测器（ FID）温度： 260℃；柱升温程序： 140 ℃保持 5 min，140℃～240℃，4 ℃/min；载气（高纯氮气）1.0 mL/min ； 进样量：1 μL ，分流比： 1:40。 7.3.2 试样测定 通过与 37种脂肪酸甲酯色谱图对比，定性、定量分析阿胶油脂中各脂肪酸的种类、相对含量。 8 结果的分析与判定 8.1 分析结果的表述 试样中某个 脂肪酸占总脂肪酸的百分比 Yi按下式计算， 通过测定相应峰面积对所有成分峰面积 总和的百分数来计算给定组分 i的含量： Yi=Asi×Fi ∑Asi×Fi×% 式中： Yi-----试样中某个脂肪酸占总脂肪酸的百分比（ %）； Asi----试样测定液中各脂肪酸甲酯的峰面积； Fi-----脂肪酸甲酯 i转化成脂肪酸的系数，分子量之比； ∑Asi --试样测定液中各脂肪酸甲酯的峰面积之和。 结果保留 3位有效数字，分析十五烷酸（ C15:0）和月桂酸（ C12:0）相对含量。 8.2 分析结果的判定 若十五烷酸（C15:0 ）检出，且月桂酸（C12:0 ）相对含量≥0.06% ，判为阳性，即样品中检测出 驴骨源成分；若十五烷酸（C15:0）未检出，且月桂酸（C12:0）相对含量≤0.06% ，判为阴性，即样 品中未检测出驴骨源成分。 全国团体标准信息平台 T/SDJKR 003—2022 附录A （资料性附录） 脂肪酸甲酯混合标准品色谱图 脂肪酸甲酯混合标准品的气相色谱图见图 A.1。 Component 1. Butyric acid methyl ester(C4:0) 2. Caproic acid methyl ester(C6:0) 3. Caprylic acid methyl ester(C8:0) 4. Capric acid methyl ester(C10:0) 5. Undecanoic acid methyl ester(C11:0) 6. Lauric acid methyl ester(C12:0) 7. Tridecanoic acid methyl ester(C13:0) 8. Myristic acid methyl ester(C14:0) 9. Myristoleic acid methyl ester(C14:1) 10. Pentadecanoic acid methyl ester(C15:0) 11. Cis-10-Pentadecenoic acid methyl ester(C15:1) 12. Palmitic acid methyl ester(C16:0) 13. Palmitoleic acid methyl ester(C16:1) 14. Heptadecanoic acid methyl ester(C17:0) 15. Cis-10-Heptadecenoic acid methyl ester(C17:1) 16. Stearic acid