(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210574113.7 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 东南大学 地址 210096 江苏省南京市玄武区新 街口 街道四牌楼 2号 (72)发明人 许茜　张铧尹　 (74)专利代理 机构 北京同辉知识产权代理事务 所(普通合伙) 11357 专利代理师 陈天林 (51)Int.Cl. G01N 21/01(2006.01) G01N 21/64(2006.01) G01N 21/78(2006.01) (54)发明名称 一种动物源性食品中四环素残留的检测方 法 (57)摘要 本发明公开一种动物源性食品中四环素残 留的检测方法， 属于食品安全分析领域； 利用制 备螺吡喃修饰的共价有机框架作为参比荧光， 通 过静电纺丝的方法制备了聚苯乙烯掺杂螺吡喃 修饰的共价有机框架和十二烷基苯磺酸钠的复 合纳米纤维膜， 进而构建动态吸附 ‑固相传感器， 用于动物源性食品中四环素的动态比率荧光传 感和可视化比色传感检测； 较已有的通过滴涂或 浸渍构建固相传感的方法， 本发 明的动态吸附模 式将四环素选择性地吸附在复合纳米纤维膜上， 通过形成聚苯乙烯 ‑四环素‑十二烷基苯磺酸钠 超分子复合物进行固相传感， 减少了复杂样品中 杂质的干扰， 提高了四环素比率荧光传感的灵敏 度和比色传感的精细化 程度。 权利要求书2页 说明书7页 CN 114965276 A 2022.08.30 CN 114965276 A 1.一种动物源性食品中四环素残留的检测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1： 通过溶剂热法合成共价有机骨架； S2： 制备螺吡喃修饰的共价有机骨架； S3： 制备复合纳米纤维膜； S4： 制备动态吸附 ‑固相传感器； S5： 动物源性食品通过初步处 理获得样品提取 液； S6： 将S5获得样品提取 液在重力作用下通过动态吸附 ‑固相传感器； S7： 取出动态吸附 ‑固相传感器中的复合纳米纤维膜， 并干燥； S8： 使用荧 光显微镜 ‑光纤光谱仪进行荧 光比率传感的定量分析； S9： 四环素的定性可视化比色检测； S10： 四环素的半定量比色检测。 2.根据权利要求1所述的一种动物源性食 品中四环素残留的检测方法， 其特征在于， 制 备所述共价有机骨架的步骤 包括： 1)以乙酸乙酯为溶剂， 配制质量浓度为2 ‑5％(w/v)的均苯三甲酰氯溶 液； 2)以乙酸乙酯为溶剂， 配制质量浓度为1 ‑3％(w/v)的对苯二胺溶 液； 3)在冰水浴(0℃)和磁力搅拌的条件下， 对苯二胺溶液在1 ‑2h内缓慢滴加到均苯三甲 酰氯溶液中， 室温磁力搅拌反应12 ‑24h后， 将反应液在5 ‑10min内滴加到体积比为1:15 ‑1: 25(v/v)的蒸馏水中， 超声3 0‑60min后离心， 弃去上层溶 液， 收集共价有机骨架； 4)依次用质量体积比为1:50 ‑1:100(w/v)的乙醇和蒸馏水连续涡旋洗涤共价有机骨架 3‑5次后， 离心， 弃去上层溶剂， 收集洗涤后的共价有机骨架， 置于40 ‑60℃的真空干燥箱 中 干燥8‑12h， 得到 干燥洁净的共价有机骨架。 3.根据权利要求1所述的一种动物源性食 品中四环素残留的检测方法， 其特征在于， 所 述螺吡喃修饰的共价有机骨架的制备步骤 包括： 1)以二氯甲烷 为分散溶剂， 配制质量浓度为1 ‑3％(w/v)的共价有机骨架分散溶 液； 2)依次加入2 ‑5％(w/v)螺吡喃、 4 ‑10％(w/v)1 ‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳化二亚胺 盐酸盐和1 ‑3％(w/v)4 ‑二甲氨基吡啶， 室温磁力搅拌24 ‑36h后， 将反应液离心， 弃去上层溶 液， 收集螺吡喃修饰的共价有机骨架； 3)依次用质量体积比为1:50 ‑1:100(w/v)的乙醇和蒸馏水连续涡旋洗涤螺吡喃修饰的 共价有机骨架3 ‑5次， 离心， 弃去上层溶剂， 收集洗涤后的螺吡喃修饰的共价有机骨架， 置于 40‑60℃的真空干燥箱中干燥8 ‑12h， 得到 干燥洁净的螺吡喃修饰的共价有机骨架。 4.根据权利要求1所述的一种动物源性食 品中四环素残留的检测方法， 其特征在于， 所 述复合纳米纤维膜的制备步骤 包括： 1)以N‑N二甲基甲酰胺为溶剂， 配制聚苯乙烯质量浓度 为25‑35％(w/v)， 十二烷基苯磺 酸钠质量浓度为0.6 ‑3％(w/v)的混合溶 液， 室温连续磁搅拌5 ‑8h获得均相溶 液； 2)以N‑N二甲基甲酰胺为分散溶剂， 配制质量浓度为0.05 ‑0.25％(w/v)的螺吡喃修饰 的共价有机骨架分散溶液， 超声30 ‑60min后， 将分散溶液添加到上述均相溶液中， 磁力搅拌 过夜， 获得静电纺丝前驱体溶 液； 3)将纺丝溶液置于喷射容器中， 高压静电场的高压电源电压设定为16 ‑20kV， 调整喷口 至铝箔接收屏的距离为10 ‑20cm， 溶液推进速度为1 ‑3mL/h， 收集1 ‑3h后， 得到复合纳米纤维权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114965276 A 2膜。 5.根据权利要求1所述的一种动物源性食 品中四环素残留的检测方法， 其特征在于， 所 述S5中的动物源 食品包括鸡蛋、 牛奶、 鱼肉、 虾肉以及内脏 。 6.根据权利要求5所述的一种动物源性食 品中四环素残留的检测方法， 其特征在于， 所 述牛奶初步处理成样 品提取液的步骤为： 在牛奶样品中加入5％三氯乙酸(V/V)溶液， 旋涡 振荡0.5mi n， 离心后， 取 上清液。 7.根据权利要求5所述的一种动物源性食 品中四环素残留的检测方法， 其特征在于， 所 述鱼肉或虾肉初步处理成样品提取液的步骤为： 在鱼肉或虾肉中加入5％三氯乙酸(V/V)溶 液， 匀浆， 超声提取10mi n， 离心分离， 取 出上清液。 8.根据权利要求1所述的一种动物源性食 品中四环素残留的检测方法， 其特征在于， 在 所述S8中， 通过荧光显微镜 ‑光纤光谱仪 分析复合纳米纤维膜的荧光光谱， 根据螺吡喃修饰 的共价有机骨架和四环素的荧 光强度比值的变化， 进行四环素的定量比率 荧光传感检测。 9.根据权利要求1所述的一种动物源性食 品中四环素残留的检测方法， 其特征在于， 所 述四环素的定性可视化比色检测， 是在365nm的紫外灯照射下， 观 察复合纳米纤维膜吸附四 环素前后的颜色变化。 10.根据权利要求1所述的一种动物源性食品中四环素残留的检测方法， 其特征在于， 在所述S10中， 使用智能手机对S 5中的复合纳米纤维膜进 行拍照后， 再使用颜色分析软件得 到图像的红、 绿、 蓝(RGB)色度值， 利用图像的绿/红色度比(G/R)进行四环素的半定量比色 检测。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114965276 A 3