ICS 11.020 CCS C 61 Ws 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 7922021 日本血吸虫抗体检测标准酶联免疫吸附 试验法 Detection standard of antibody against Schistosoma japonicumEnzyme-linked immunosorbent assay 行业标准信息服务平台 2021—11—23发布 2022—05—01实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会发布 WS/T792—2021 前 言 本标准由国家卫生健康标准委员会寄生虫病标准专业委员会负责技术审查和技术咨询,由中国疾病 预防控制中心负责协调性和格式审查,由国家卫生健康委疾病预防控制局负责业务管理、法规司负责统 筹管理。 本标准起草单位:杭州医学院(浙江省医学科学院)、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、 安徽省血吸虫病防治研究所、宁波市疾病预防控制中心、江西省寄生虫病防治研究所。 本标准主要起草人:闻礼永、严晓岚、熊彦红、郑彬、张剑锋、汪天平、俞丽玲、许国章、林丹丹、 周晓农。 行业标准信息服务平台 1 WS/T792—2021 日本血吸虫抗体检测标准酶联免疫吸附试验法 1范围 本标准规定了检测日本血吸虫抗体的酶联免疫吸附试验方法。 本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对人体血清中日本血吸虫抗体的检测。 2 2规范性引用文件 本标准没有规范性引用文件。 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 酶联免疫吸附试验enzyme-linkedimmunosorbentassay;ELISA 利用抗原抗体之间专一性键结之特性,对检体进行检测;由于结合于固体承载物上之抗原或抗体仍 可具有免疫活性,因此设计其键结机制后,配合酵素呈色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并 可利用呈色之深浅进行定量分析的试验。 3.2 可溶性虫卵抗原solubleeggantigen 血吸虫虫卵经匀浆和超声破碎等处理后离心收集的上清液,含蛋白质、糖蛋白、多糖等多种成分复 合物。 3.3 金黄色葡萄球菌蛋白AstaphylococalproteinA 从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质,能与人及多种哺乳动物血清中IgG分子的Fc片段结合,作 慧服务平台 为第二抗体。 4仪器设备 4.1 台式低速离心机 最高转速大于或等于2500r/min,或最大相对离心力大于或等于800g。 4.2酶标专用比色计 带有450nm、492nm和630nm滤光片,分辨率0.001光密度(opticaldensity,OD)值。 4.3恒温水浴箱 2 WS/T792—2021 控温范围5℃99.9℃,温度分辨率/波动度0.1℃/±0.5℃。 4.4微量移液器 量程范围1μL~10μL,增量0.1μL;量程范围10μL~100μL,增量1μL;量程范围100μL~1000μL, 增量5 μL。 5 5试剂或材料 5.1 酶标反应板 96孔或40孔微量聚苯乙烯或聚氯乙烯塑料凹孔反应板。 5.2包被抗原 可溶性虫卵抗原,制备方法见附录A中A.1。 5.3包被缓冲液 0.05mol/LpH9.6碳酸盐缓冲液,制备方法见附录A.2。 5.4样品洗涤液 含0.05%吐温-20的0.01mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液(PBS-T),制备方法见附录A.3。 5.5封闭液 2%牛血清白蛋白(BSA),制备方法见附录A.4。 5.6阳性对照血清 感染日本血吸虫的免混合血清,制备方法见附录A.5。 5.7阴性对照血清 健康兔混合血清,制备方法见附录A.6。 5.8样品稀释液 含0.1%BSA的PBS-T,制备方法见附录A.7。 5.9酶标记物 惠服务平台 金黄色葡萄球菌蛋白A标记辣根过氧化物酶,制备方法见附录A.8 5.10底物缓冲液 pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液,制备方法见附录A.9。 5.11底物使用液 3,3’,5,5-四甲基联苯胺(TMB)或邻苯二胺(OPD),制备方法见附录A.10。 5.12终止液 2mol/L硫酸,制备方法见附录A.11。 3

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