ICS 13.060 Z 16 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3738—2019 水质 磺胺类、喹诺酮类和大环内酯类抗生 素的测定 固相萃取/液相色谱-三重四极 杆质谱法 Water quality-Determination of antibiotics of Sulfonamides, Quinolones and Macrolides by solid phase extraction -Liquid chromatography triple quadrupole mass spectrometry 2019 - 12 - 05 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 01 - 05 实施 发 布 DB37/T 3738—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 方法原理 .......................................................................... 1 4 干扰与消除 ........................................................................ 1 5 试剂和材料 ........................................................................ 1 6 仪器和设备 ........................................................................ 2 7 样品 .............................................................................. 3 8 分析步骤 .......................................................................... 3 9 结果计算与表示 .................................................................... 5 10 精密度和准确度 ................................................................... 7 11 质量保证和质量控制 ............................................................... 7 12 废物处理 ......................................................................... 8 附录 A（规范性附录） 方法的检出限和测定下限 .......................................... 9 附录 B（资料性附录） 质谱参考条件 ................................................... 10 附录 C（资料性附录） 方法的精密度和准确度 ........................................... 11 I DB37/T 3738—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省生态环境厅提出并组织实施。 本标准由山东省环保标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省环境监测中心。 本标准主要起草人：郭文建、张慧、朱晨、王桂勋、岳太星、李红莉、丁波涛。 II DB37/T 3738—2019 水质 磺胺类、喹诺酮类和大环内酯类抗生素的测定 液相色谱-三重四极杆质谱法 固相萃取/ 警告：实验中使用的溶剂和试剂均具有一定的毒性，对健康具有潜在的危害，应尽量避免与这些化 学品的直接接触。样品制备过程应在通风橱中进行，操作时应按规定要求佩戴防护器具,避免接触皮肤 和衣物。 1 范围 本标准规定了测定水中磺胺类、喹诺酮类和大环内酯类抗生素的固相萃取/液相色谱-三重四极杆质 谱法。 本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中磺胺间甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲氧嘧 啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲嘧啶、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、氟罗沙星、脱水红霉素、罗红霉素、 螺旋霉素12种抗生素的测定。 当取样500 ml，定容体积为1.0 ml，进样体积为20 μl时，方法检出限为0.001 μg/L～0.007 μ g/L，测定下限为0.004 μg/L～0.028 μg/L，详见附录A。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 HJ/T 164 地下水环境监测技术规范 3 方法原理 水样中的抗生素类化合物经固相萃取法富集、净化后，用液相色谱-三重四极杆质谱法分离检测。 根据化合物的保留时间和特征离子峰定性，内标法定量。 4 干扰与消除 金属离子与抗生素能形成络合物，使固相萃取效率降低，可向水样中加入乙二胺四乙酸二钠抑制络 合物的形成。水中余氯等其他具有氧化性的有机物会干扰磺胺类抗生素的测定，可向水中加入抗坏血酸 消除干扰。 5 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为不含目标化合物的纯水。 5.1 盐酸：ρ（HCl）=1.19 g/ml。 1 DB37/T 3738—2019 5.2 硫酸：ρ（H2SO4）=1.84 g/ml。 5.3 乙腈（CH3CN）：色谱纯。 5.4 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 5.5 甲酸（HCOOH）：色谱纯。 5.6 乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2Na2O8•2H2O）。 5.7 抗坏血酸（C6H8O6）。 5.8 盐酸溶液：1+1。 5.9 硫酸溶液：c(H2SO4)=4.0 mol/L。量取 22 ml 硫酸（5.2），缓慢加入到水中，待温度降至室温后， 用水定容至 100 ml。 5.10 pH 2.0 去离子水：用盐酸（5.8）溶液调节去离子水至 pH 为 2.0。 5.11 0.1 %甲酸溶液：量取 0.5 ml 甲酸（5.5），缓慢加入水中，用水定容到 500 ml。 5.12 甲醇/乙腈混合溶液：1+1。 5.13 0.1 %甲酸甲醇/乙腈混合溶液：量取 0.5 ml 甲酸（5.5），缓慢加入到甲醇/乙腈混合溶液（5.12） 中，用甲醇/乙腈混合溶液（5.12）定容至 500 ml。 5.14 稀释溶剂：3+1。取 75 ml 0.1 %的甲酸溶液（5.11）和 25 ml 0.1 %甲酸甲醇/乙腈混合溶液（5.13） 于玻璃容器中，混合均匀。 5.15 标准贮备液：ρ=100 mg/L。准确称取 10.0 mg 抗生素类化合物标准物质，用甲醇溶解后，转移 到 100 ml 棕色容量瓶中，定容至标线。此溶液在-10 ℃以下避光可保存 1 年。也可以直接购买有证标 准溶液，参照制造商的产品说明保存。 5.16 脱水红霉素标准贮备液：ρ=2.00 mg/L。脱水红霉素可直接购买标准物质（纯度≥95 %）或者由 红霉素制备。量取 400 μl 100 mg/L 红霉素贮备液于 20 ml 棕色瓶中，加入 19.6 ml 甲醇（5.4），然 后加入约 10 μl 硫酸溶液（5.9）调 pH 至 3.0，室温下震荡 4 h，于-10 ℃以下避光可保存 2 个月。 5.17 标准使用液：ρ=1.00 μg/ml。将 12 种抗生素类化合物标准贮备液（5.15）用适量的甲醇（5.4） 稀释，临用现配。 13 5.18 内标贮备液：ρ=200 μg/ml。内标物为阿特拉津- C3。可用标准物质配制，标准物质纯度大于 99.0 %，用适量的甲醇（5.4）溶解。也可直接购买有证标准溶液。贮备液应在-10 ℃以下避光保存或 参照制造商的产品说明。 5.19 替代物贮备液：ρ=200 μg/ml。喹诺酮类替代物为环丙沙星-D8，磺胺类替代物为磺胺二甲氧嘧 啶-D6、大环内酯类替代物为脱水红霉素-D6。可用标准物质配制，标准物质纯度大于 99.0 %，用适量的 甲醇（5.4）溶解。也可直接购买有证标准溶液。贮备液应在-10 ℃以下避光保存或参照制造商的产品 说明。 5.20 内标使用液：2.00 μg/ml。将内标贮备液（5.18）用适量的甲醇（5.4）稀释。内标使用液于-10 ℃ 以下避光保存，保质期 1 个月。 5.21 替代物使用液：2.00 μg/ml。将替代物贮备液（5.19）用适量的甲醇（5.4）稀释。替代物使用 液于-10 ℃以下避光保存，保质期 1 个月。 5.22 固相萃取柱：填料为二乙烯苯和 N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）或同等柱效的萃取柱，规格为 6 ml/500 mg。 5.23 滤膜：0.7 μm 玻璃纤维或其他材质等效滤膜。 5.24 滤膜：0.22 μm 聚四氟乙烯或其它等效滤膜。 5.25 氮气：纯度≥99.99 %。 6 仪器和设备 2 DB37/T 3738—2019 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 液相色谱-三重四极杆质谱仪：配有电喷雾离子化源（ESI）。 固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。 浓缩装置：自动氮吹浓缩仪或 K-D 浓缩器等性能相当的设备。 色谱柱：填料粒径为 1.8 μm，柱长 50 mm，内径 4.6 mm 的 C18 反相色谱柱，或其他等效色谱柱。 样品瓶：1 000 ml 带聚四氟乙烯内衬垫瓶盖的棕色玻璃瓶。 微量注射器：10 μl、20 μl、50 μl、100 μl、250 μl。 一般实验室常用仪器和设备。 7 样品 7.1 样品采集与保存 按照HJ/T 91和HJ/T 164的相关规定采集样品。样品采集前，应向样品瓶（6.5）中加入150 mg抗坏 血酸（5.7）及0.25 g乙二胺四乙酸二钠（