ICS 65.020 B 39 DB33 浙 江 省 地 方 标 准 DB33/T 748—2016 代替DB33/T 748.1-2009和DB33/T 748.2-2009 代替DB33/748.1-2009 北冬虫夏草生产技术规程 Poduction for Cordyceps militaris (L.) Link cultivation 2016-12-31 发布 浙 江 省 质量技 术 监 督局 2017-01-31 实施 发布 DB33/T 748—2016 前 言 本标准根据GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准代替了DB33/T 748.1-2009《北冬虫夏草栽培技术规程 第1部分：菌种》和DB33/T 748.2-2009 《北冬虫夏草栽培技术规程 第2部分：栽培技术规程》，与DB33/T 748.1-2009和DB33/T 748.2-2009 相比，除编辑性修改外主要技术变化如下： ——删除“栽培容器”和“刺孔”的定义； ——删除“附录A 常用药剂的配制及使用”中“多菌灵”和“蚊香”的内容； ——增加“场地设施”、“产地初加工”等章节；增加病虫害物理防治。 本标准由浙江省农业厅提出。 本标准由浙江省种植业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：浙江博士园生物技术有限公司、浙江省景宁畲族自治县农业局。 本标准主要起草人：刘卿、刘宇、刘宁、陈钢铭、夏建平。 1 DB33/T 748-2016 北冬虫夏草生产技术规程 1 范围 本标准规定了北冬虫夏草[Cordyceps militaris（L.）Link]生产技术规程的栽培基质、菌种制作、 栽培瓶制作、灭菌和接种、菌丝培养、出草管理、采收和栽培管理、档案建立与管理等技术要求。 本标准适用于北冬虫夏草的室内容器生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 12728 食用菌术语 GB 14881 食品安全国家标准 食品生产通用卫生规范 GB 15569 农业植物调运检疫规程 NY 5099 无公害食品 食用菌栽培基质安全技术要求 3 术语和定义 GB/T 12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 栽培容器 装有混合培养料的透光的玻璃容器或聚丙烯塑料容器。 3.2 子座 由菌丝分化而成的垫状结构，由菌丝体单独形成或由菌丝体和寄生组织共同形成。 3.3 促进子座形成 采用控温、调湿、光线刺激及增氧等方法促使北冬虫夏草子座形成的过程。 3.4 出草 子实体（子座）形成并逐渐发育成熟的过程。 3.5 豆天蛾蛹粉 豆天蛾(一种属鳞翅目、天蛾科的天蛾)蛹进行干燥精细粉碎后的粉末。 2 DB33/T 748—2016 3.6 柞蚕蛹粉 柞蚕（一种鳞翅目、大蚕蛾科的蚕）蛹进行干燥精细粉碎后的粉末。 3.7 蚕蛹粉 蚕（一种鳞翅目、蚕蛾科的蚕）蛹进行干燥精细粉碎后的粉末。 4 要求 4.1 栽培基质 4.1.1 技术要求 应符合 NY 5099 的规定。 4.1.2 主料 小麦、大米。要求新鲜、洁净、干燥、无虫、无霉、无异味。 4.1.3 辅料 麦麸、玉米粉、大豆粉、豆天蛾蛹粉、柞蚕蛹粉、蚕蛹粉等。要求新鲜、洁净、干燥、无虫、无霉、 无异味。 4.1.4 营养添加剂 营养添加剂符合附录 A 中的 A.1 规定。 4.1.5 栽培基质处理 基质中不应加入任何农药及抗生素，不得使用植物生长调节剂和含有植物生长调节剂或成分不清的 混合型基质添加剂。 4.2 水 应符合 GB 5749 的规定。 4.3 环境要求 300 m 方圆之内无禽兽舍，无垃圾（粪便）场，无污水和其他污染源（如石灰厂、水泥厂等）。 4.4 场地布局设施 4.4.1 场地设施 宜选择通风良好、水源清洁的区域。生产区布局合理，应与原料仓库、成品仓库、生活区分开，灭 菌室、冷却室、接种室、培养室应各自独立、方便操作。管理制度明示上墙。 4.4.2 初加工场地 北冬虫夏草初加工的厂址、环境卫生和原料采购、加工、包装、贮存及运输等环节的场所、设施、 3 DB33/T 748-2016 人员等应符合 GB 14881 中的相关规定。 4.5 菌种制作 4.5.1 种源选用 选用北冬虫夏草[Cordyceps militaris（L.）Link] 经过品种审定或鉴定确认，种性好、抗逆性强，对 当地自然环境适应的种源。 4.5.2 母种制作 4.5.2.1 培养基 4.5.2.1.1 PDA 培养基配方 马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18 g～20 g、水1000 mL。 4.5.2.1.2 改良 PDA 培养基配方 马铃薯200 g、葡萄糖20 g、磷酸二氢钾2 g、硫酸镁1.5 g、琼脂18 g～20g 、水1000 mL。 4.5.2.1.3 制作方法 将去皮马铃薯切片置容器内加水1000 mL，煮沸15 min，过滤，加入葡萄糖和琼脂，补足水至1000 mL， 加热溶解；琼脂溶解后，用分装器装入试管中，装量为试管长的1/5，塞上棉塞。置灭菌锅中，在0.1 MPa 压力下灭菌0.5 h，自然落磅；将试管趁热排放在斜面板上冷却。 4.5.2.2 转管扩繁 经过出草鉴定合格的母种。以1:20～1:30进行转管，在22 ℃～25 ℃环境中培养，菌丝长满试管斜 面即可使用。 4.5.2.3 贮存 母种一般在冰箱中保藏，保藏温度为4 ℃～5 ℃。 4.5.3 原种、栽培种制作 4.5.3.1 培养基 4.5.3.1.1 加水至100 4.5.3.1.2 加水至100 配方一：玉米粉2 g、葡萄糖2 g、蛋白胨1 g、酵母粉0.5 g、KH2PO4 0.1 g、MgSO4 0.05 g， ml。 配方二：马铃薯20 g、 玉米粉3 g、葡萄糖2 g、蛋白胨0.3 g、KH2PO4 0.15 g、MgSO4 0.05 g， ml。 4.5.3.2 装瓶、装罐 4.5.3.2.1 原种 按比例将培养料均匀装入三角瓶中，500mL三角瓶装液量为100 mL～200 mL，用透气硅胶塞封口。 4.5.3.2.2 栽培种 按比例将培养料均匀装入发酵罐中，60 L发酵罐装料50 L培养液。 4.5.3.3 灭菌 4 DB33/T 748—2016 4.5.3.3.1 原种 在0.11 MPa压力下热力灭菌0.5 h。 4.5.3.3.2 栽培种 在0.11 MPa压力下热力灭菌2 h。 4.5.3.4 接种 4.5.3.4.1 原种 培养料冷却到24 ℃以下，在无菌条件下接种，每支母种接1瓶原种；每300 mL原种接10 L栽培种。 4.5.3.4.2 栽培种 培养料冷却到24 ℃以下，在无菌条件下接种，进行发酵罐接种，每个发酵罐接1000 ml～1500 ml 原种。 4.5.3.5 培养 4.5.3.5.1 原种 22 ℃～25 ℃静置培养48 h后，置于摇床上进行振荡培养，140r/min～160r/min，培养90 h～120 h。 4.5.3.5.2 栽培种 22 ℃～25 ℃ 60 L发酵罐按70L/min通气量进行通气搅拌，培养24 h。 4.5.3.6 贮存 原种、栽培种应在培养结束后及时使用，不能及时使用时应在适温4 ℃～16 ℃、干燥（相对湿度 60%～70%）、通风、清洁、避光的室内整罐保藏，可保藏24 h。 4.6 栽培技术 4.6.1 栽培季节 在自然条件下，一般 2 月中下旬栽培接种，5 月中下旬采收；8 月中下旬栽培接种，11 月采收， 条件允许可周年栽培。 4.6.2 推荐配方 4.6.2.1 小麦 68%，豆天蛾蛹粉 26%，蔗糖 5%，蛋白胨 1%，维生素 B10.001%。 4.6.2.2 大米 68%，柞蚕蛹粉 26%，蔗糖 5%，蛋白胨 1%，维生素 B10.001%。 4.6.2.3 大米 68%，蚕蛹粉 26%，蔗糖 5%，蛋白胨 1%，维生素 B10.001%。 4.6.3 装料 先将小麦或大米等主料和辅料配比混合，按料水比为 1:1 装入栽培容器中，透气盖封口或聚丙烯膜 封口。 4.6.4 灭菌 将装好培养基栽培容器移入灭菌锅内高压灭菌（压力为 0.10 MPa～0.14 MPa，温度为 121 ℃～ 5 DB33/T 748-2016 126 ℃）保持 1.5 h～2.0 h，或常压灭菌(温度为 100 ℃) 保持 10 h～12 h。 4.6.5 冷却 灭菌后移入冷却室内，冷却至 24 ℃以下移入接种室内。 4.6.6 接种 接种环境要求清洁、干燥，用消毒剂对地面、墙壁进行消毒，消毒剂符合附录 A 中的 A.2 规定；栽 培瓶在接种室内用消毒剂密闭熏蒸 1.5 h～2 h 后接种，消毒剂符合附录 A 中的 A.2 规定；每瓶栽培瓶 约接 5 mL 液体菌种或固体菌种 10 g。 4.6.7 菌丝培养 4.6.7.1 培养室环境要求 培养室应经消毒，要求清洁、干燥、通风、遮光。 4.6.7.2 培养方法 采用容器栽培，立体架式，层架 6 层～7 层，层距为 40 cm～50 cm。 4.6.7.3 培养管理 发菌室温度宜为 18 ℃～23 ℃，空气相对湿度 65%～70%; 遮光，使发菌室基本黑暗。适时开门窗 进行通风换气，保持发菌室空气新鲜；接种后每个星期至少检查一次，及时剔除感染杂菌的栽培容器。 4.6.7.4 培养时间 室内培养 20 d～25 d，至菌丝长满。 4.7 增氧 用聚丙烯薄膜封口的容器，菌丝长满菌瓶后，刺孔增氧， 刺孔数为每瓶 8 个～10 个。 4.8 出草管理 4.8.1 栽培室要求 培养室应消毒处理，达到清洁、通风、有散射光（100 lx～200 lx）。 4.8.2 促进子座形成（促草） 促座时期为菌丝体长满料面时，保持培养室温度为 16 ℃～18 ℃，空气相对湿度 90%，应有散射光 （100 lx～200 lx）诱导原基形成。 4.8.3 育草 温度保持 18 ℃～22 ℃；保持培养室空气相对湿度 85%，应有散射光（100 lx～200 lx）；保持培 养室空气新鲜；子座生长阶段，保持空气相对湿度 85%。 4.9 采收与场地初加工 4.9.1 采收 6 DB33/T 748—2016 当北冬虫夏草形成子座后，未弹射孢子前采收。采收时，操作人员应戴帽子、口罩，洗净双手，戴 上手套，用镊子取出子座，除去杂质后，按规格分类。 4.9.2 干制 即采即烘，可采用热风循环烘干机、专用烘干机等烘干。烘干温度控制在 40 ℃～60 ℃。 4.9.3 品质特征 按北冬虫夏