ICS 65.020.40 CCS B 61 DB51 四川省 地方标准 DB51/T 2253—2022 代替 DB51/T 2253 -2016 五小叶槭育苗技术规程 2022 - 12 - 27发布 2023 - 02 - 01实施 四川省市场监督管理局 发布 DB51/T 2 253—2022 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 组织培养育苗 ................................ ................................ ....... 1 5 播种育苗 ................................ ................................ ........... 7 6 病虫害防治 ................................ ................................ ......... 9 7 苗木出圃质量 ................................ ................................ ....... 9 8 档案标签要求 ................................ ................................ ....... 9 附录A（资料性） 五小叶槭组织培养初代培养基配方和生根培养基配方 ...................... 11 附录B（资料性） 五小叶槭组织培养继代培养基配方 ................................ ...... 12 附录C（资料性） 五小叶槭育苗主要病虫害防治方法 ................................ ...... 13 附录D（资料性） 五小叶槭苗木质量分级 ................................ ................ 14 DB51/T 2253 —2022 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替 DB51/T 2253 —2016《五小叶槭播种育苗技术规程》 。 本文件与 DB51/T 2253 —2016相比， 主要修改如下： --增加了术语和定义：组织培养、外植体、母树。 --增加了五小叶槭组织培养育苗技术部分：规定了五小叶槭组培育苗过程中组培环境控制、培养基 配制与保存、无菌外植体获得、增殖培养、生根培养、 炼苗移栽、苗木出圃技术。 --单位面积底肥用量的单位由 kg/hm2修改为g/m2，单位面积播种量的单位由 kg/hm2修改为g/m2。 --新增容器苗移栽技术。 --完善了附录 A病虫害防治，删除敌敌畏药品。 --修正了苗木质量等级。 本文件由四川省林业和草原局提出、归口并解释。 本文件起草单位：四川省林业科学研究院。 本文件主要起草人： 李佳蔓、姬慧娟、黄振、陈炙、张杰、马文宝、曹昆彬、赵桃娟、刘良梦、刘 欣。 本文件所代替标准的历史版本发布情况为： --DB51 /T 2253 --2016。 --本次为第一次修订。 DB51/T 2253 —2022 1 五小叶槭育苗技术规程 1 范围 本文件规定了五小叶槭（ Acer pentaphyllum ）的组织培养育苗技术、播种育苗技术及技术归档等要 求。 本文件适用于五小叶槭在四川省内的组织培养育苗和播种育苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 8321.10 农药合理使用准则 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 LY/T 2289 林木种苗生产经营档案 LY/T 2290 林木种苗标签 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 组织培养 tissue culture 植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞、原生质体培养在人工配制的培 养基上，给予适宜的条件进行培养，诱导产生愈伤组织或不定芽等，或者长成完整植株的过程。 外植体 explant 植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。 母树 parent -tree 用于供采种或供取外植体的树。 4 组织培养育苗 组培环境控制 4.1.1 准备室消毒灭菌 DB51/T 2253 —2022 2 每天用二氧化氯泡腾片或有效氯含量 250 mg/L～350 mg/L的84消毒液拖地或擦洗操作台面，操作过 程中产生的垃圾及时带出室外并环保处理，保持室内干燥、整洁。 4.1.2 贮藏室灭菌 每周用二氧化氯泡腾片或有效氯含量 250 mg/L～350 mg/L的84消毒液拖地一次，每周用臭氧发生器 消毒一次，每次 30 min。 4.1.3 接种室灭菌 接种前 30 min，开启房间紫外灯 15 min。 4.1.4 超净工作台 使用前先开启操作台内紫 外灯15 min，然后关紫外灯打开通风橱通 风15 min，台面及内壁四周喷 75%酒精。 4.1.5 培养室灭菌 在完成4.1.2基础上，每 2周用75%酒精擦洗培养架一次。 4.1.6 接种器具灭菌 接种器具在使用前用纯棉布袋或报纸包裹严实， 置于高压灭菌锅灭菌， 灭菌条件： 121 kPa，121℃， 15 min～20 min。灭菌完成后迅速转移至洁净恒温烘箱烘干备用，烘箱温度通常设置成 40℃～ 50℃。剪 刀、镊子等使用前需用酒精灯灼烧或接种工具灭菌器进行高温灭菌。 4.1.7 培养基灭菌 按照LY/T 1882 操作执行。 4.1.8 菌瓶处理 贮藏室、培养室等环境应长期保持干燥、整洁，发现菌瓶应立即清除，高温消毒后再行清理。 培养基配制与保存 4.2.1 培养基选择 五小叶槭组织培养使用到两种基本培养基， MS基本培养基和 DKW基本培养基，在不同阶段使用的 培养基见附录 A和附录 B。 4.2.2 母液配制与保存 4.2.2.1 水质要求 母液配制用蒸馏水、去离子水或超纯水。 4.2.2.2 大量元素配制 每个组分应单独溶解充分后，再按 N、P、K、Mg、Ca顺序依次混入，每加一个组分与前溶液充分 混合后再加入下一组分。 4.2.2.3 母液浓度 DB51/T 2253 —2022 3 大量元素母液各组分浓度是培 养基中相应大量元素组分浓度的 40倍，微量元素母液是培养基中相 应微量元素组分浓度的 200倍，有机营养母液是培养基中相应有机组分浓度的 200倍，铁盐母液是培养基 中相应铁盐组分浓度的 200倍，植物生长调节剂用 1 mol/L NaOH 助溶后配成 0.2 mg/mL的母液。 4.2.2.4 母液保存 母液容器上贴标签，备注名称、浓度倍数、配置日期、配置人员等信息。微量元素和有机营养成分 母液应用棕色瓶分装。所有母液至于 4 ℃冰箱保存，贮藏时间不超过 90 d，如发生沉淀或有微生物、藻 类生长，立即弃用。 4.2.3 培养基配制与保存（以 1 L增殖培养基的配置方法为例） 4.2.3.1 糖和琼脂称取 用分析天平称取蔗糖 30 g，卡拉胶 7 g，置于不锈钢锅内。 4.2.3.2 母液量取与定容 量筒量取大量元素母液 25 mL，微量元素 5 mL，有机营养成分 5 mL，铁盐5 mL，移液枪量取 6-BA 1.25 mL，NAA 0.25 mL，量筒量取去离子水 958.5 mL。 4.2.3.3 溶解 定容好的培养基用玻璃棒轻轻搅拌均匀，置于电磁炉上加热，加热期间用玻璃棒朝同一方向持续轻 轻搅拌，避免糊底，直至蔗糖、卡拉胶完全溶解。 4.2.3.4 pH测定和调节 用pH计测量培养基酸碱度，用 1 mol/L HCl 和1 mol/L NaOH 调节pH值至5.8～6.0。 4.2.3.5 分装 用培养瓶定量分装，培养基厚度 1.5 cm～2.0 cm。操作时切勿将培养