ICS 07.00.01 CCS C 62 22 吉林省 地方 标准 DB 22/T 3440—2023 人粪便中华支睾吸虫虫卵检测 PCR和实 时荧光PCR法 Detection of Clonorchis sinensis eggs in human feces -PCR and real time PCR methods 2023 - 01 - 13发布 2023 - 03 - 01实施 吉林省市场监督 管理厅 发布 DB 22/T 3440 —2023 I 目次 前 言 ................................ ................................ ........... II 1 范围 ................................ ................................ ................ 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ...... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ .......... 1 4 缩略语 ................................ ................................ .............. 1 5 试剂、材 料和引物 ................................ ................................ .... 1 试剂 ................................ ................................ ............ 1 材料 ................................ ................................ ............ 2 引物 ................................ ................................ ............ 2 6 仪器和设 备 ................................ ................................ .......... 2 7 样品采集 ................................ ................................ ............ 3 8 核酸提取 ................................ ................................ ............ 3 9 DNA 的浓度和纯度测定 ................................ ................................ 3 10 PCR 检测 ................................ ................................ ........... 4 普通 PCR 检测 ................................ ................................ .. 4 实时荧光 PCR 检测 ................................ .............................. 5 附录 A （资料性） 试剂配制................................ ........................ 6 附录 B （规范性） 华支睾吸虫虫卵特定的 DNA序列 ................................ .... 7 DB 22/T 3440 —2023 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由长春海关提出并归口。 本文件起草单位：吉林国际旅行卫生保健中心（长春海关口岸门诊部）、长春海关技术中心。 本文件主要起草人：马文晨、孟庆峰、赵大力、王玮琳、刘金华、孟日增、王伟利。 DB 22/T 3440 —2023 1 人粪便中华支睾吸虫虫卵检测 PCR和实时荧光 PCR法 1 范围 本文件规定了人粪便中华支睾吸虫虫卵 PCR和实时荧光 PCR法的试剂、材料和引物，仪器和设备，样 品采集，核酸提取， DNA 的浓度和纯度测定，检测方法和结果判定。 本文件适用于人粪便中华支睾吸虫虫卵核酸检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 bp：碱基对（ base pair ） CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（ cetyltrithylammonium bromide ） DNA：脱氧核糖核酸（ deoxyribonucleic acid ） dNTP：脱氧核苷酸三磷酸（ deoxyribonucleoside triphosphate ） EDTA：乙二胺四乙酸（ ethylene diaminetetraacetic acid ） FAM：6-羧基荧光素 (6-carboxyfluorescein) OD：光密度值（ optical density ） PCR：聚合酶链式反应（ polymerase chain reaction ） Taq 酶：DNA 聚合酶（ thermus aquaticu ） TE 缓冲液： Tris-HCl、EDTA 缓冲液（ Tris-EDTA buffer solution ） Tris：三(羟甲基) 氨基甲烷 [tris (hydroxymethyl) aminomethane] MGB：小沟结合物（ minor groove binder ） 5 试剂、材料和 引物 试剂 5.1.1 除另有规定外 ，试剂为分析纯 或生化试剂 。试验用水应符合 GB/T 6682 中一级水的规定。