ICS 65.020 CCS B 16 DB36 江 西 省 地 方 标 准 DB36/T 1745—2023 柑橘木虱抗药性监测技术规程 Technical specification for monitoring insecticide resistance of Diaphorina citri Kuwayama 2023 - 02 - 10发布 2023 - 08 - 01实施 江西省市场监督管理局 发 布 DB36/T 1745 —2023 I 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 试剂和材料 ........................................................................ 2 5 主要仪器设备 ...................................................................... 2 6 试验步骤 .......................................................................... 2 7 数据统计与分析 .................................................................... 3 8 抗药性水平的计算与评估 ............................................................ 3 9 检测报告编写 ...................................................................... 4 附录 A（资料性）柑橘木虱对部分杀虫剂敏感性基线 ........................................ 5 DB36/T 1745 —2023 II 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 给出的规则编写。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由赣州市市场监督管理局提出并归口。 本文件起草单位： 赣南师范大学、 国家脐橙工程技术研究中心、 赣州农业技术推广中心植保植检站、 西南大学、江西省农业农村产业发展服务中心。 本文件主要起草人：胡威、张宁、易龙、赵崇飞、姚锋先、卢占军、钟八莲、袁芳、郑荣坤、王进 军、豆威、黄爱军、周俊、饶喜 DB36/T 1745 —2023 1 柑橘木虱抗药性监测技术规程 1 范围 本文件规定了点滴法检测柑橘木虱抗药性的术语和定义、试剂和材料、主要仪器设备、试验步骤、 数据统计与分析、抗药性水平的计算与评估、检测报告编写。 本文件适用于室内条件下杀虫剂对柑橘木虱的毒力测定和抗药性评估。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 2360-2013 十字花科小菜蛾抗药性监测技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 柑橘木虱 Diaphorina citri Kuwayama 柑橘木虱 Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae) ，属于半翅目木虱科，危害柑橘、黄皮、 九里香等芸香科植物，是传播柑橘黄龙病的主要自然虫媒。 3.2 抗药性 Insecticide resistance 由于杀虫剂的使用， 在昆虫种群中发展并可以遗传给后代的对杀死正常种群中大多数个体药剂剂量 的忍受能力。 3.3 F1代 F 1 generation 从果园采集柑橘木虱的若虫或成虫，室内饲养，繁殖后获得的下一代的种群。 3.4 敏感性基线 sensitivity base-line 通过生物测定法，得到的昆虫敏感品系（或种群）对杀虫剂的剂量反应曲线。 3.5 DB36/T 1745 —2023 2 点滴法 Topical application 采用微量点滴器将药剂点滴到靶标昆虫的体表， 若干小时后观察和记录其死亡率， 测定毒力的方法。 3.6 致死中浓度（LC 50） Median lethal concentration 能使试验的生物群体半数死亡所需的药剂浓度（mg/L）。 4 试剂和材料 4.1 生物试材 柑橘木虱：经室内饲养的 F1代4龄若虫。 供试植物：未被药剂污染的柑橘当年生嫩叶。 4.2 试验试剂与药剂 试验药剂采用原药。试剂为分析纯试剂。 5 主要仪器设备 电子天平（感量 0.0001 g），微量点滴器（ 5 μL），毛笔，直径为 9 cm培养皿，移液器，昆虫饲养 笼（长60 cm×宽60 cm×高90 cm），人工气候箱。 6 试验步骤 6.1 药剂配制 将药剂用丙酮或二甲基亚砜、乙醇等有机溶剂充分溶解，配制成母液，然后按比例稀释 5个-7个系 列质量浓度。 6.2 药剂处理 将湿润棉花放入培养皿内底部保湿，并在棉花表面铺上滤纸片。将柑橘叶片清洗干净，擦干并平放 于滤纸片表面。用毛笔选取 F1代柑橘木虱若虫置于叶片上备用，每个培养皿中放入 10头，重复 4次。将 培养皿内柑橘木虱若虫逐头进行点滴处理，点滴于虫体前胸背板上，实验组每头点滴药剂 0.4 μL，每组 点滴后用保鲜膜将培养皿盖好，并在保鲜膜上用昆虫针扎 15-20个小孔。将所有点滴后的试虫转移至人 工气候箱中，设置温度为 25±1℃，相对湿度为 75%～85%，光周期为（ L：D）16 h：8 h。点滴不含药 剂的有机溶剂作为对照组。 6.3 结果检查 处理后24 h调查试虫死亡情况，记录总虫数和死亡虫数。以毛笔轻触虫体腹部， 30 s腿不能动的个 体视为死亡。 7 数据统计与分析 DB36/T 1745 —2023 3 7.1 计算方法 根据调查数据，计算各处理的校正死亡率，单位为百分率（ %）。按公式（ 1）和公式（ 2）计算， 计算结果均保留到小数点后两位： 100 1NKP …………………………………………… （1） 式中： P1——死亡率，单位为百分率（ %）； K——表示每处理浓度总死亡虫数，单位为头； N——表示每处理浓度总虫数，单位为头。 100100t 2 PPPP ……………………………………… （2） 式中： P2——校正死亡率，单位为百分率（ %）； Pt——处理死亡率，单位为百分率（ %）； P0——空白对照死亡率，单位为百分率（ %）。 若对照死亡率＜ 5%，无需校正；对照死亡率在 5%～20%之间，应按公式（ 2）进行校正；对照死 亡率＞20%，试验需重做。 7.2 统计分析 用DPS、SPSS等软件进行统计分析，计算各药剂的 LC50及其95%置信限，评价供试药剂对柑橘木虱 的触杀活性。 8 抗药性水平的计算与评估 8.1 敏感性基线 柑橘木虱对部分杀虫剂的敏感性基线（参见附录 A）。 8.2 抗药性水平的分级标准 抗性水平分级参照 NY/T 2360-2013 中的规定，见表 1。 表1 抗药性水平的分级标准 抗药性水平分级 抗性倍数（ RR） 低水平抗性 RR≤10.0 中等水平抗性 10.0 ＜RR＜100.0 高水平抗性 RR≥100.0 8.3 抗药性水平的计算 DB36/T 1745 —2023 4 根据敏感品系的 LC50值和测试种群的 LC50值，按式（ 3）计算测试种群的抗性倍数（ RR）。 5050 LCLCRR敏感品系的测试种群的 …………………………………… （3） 按照抗药性水平的分级标准，对测试种群的抗药性水平做出评估。 9 检测报告编写 根据统计结果和抗性水平评估，写出正式抗性监测报告，并列出原始数据。