ICS 65.020.30 CCS B 41 DB42 湖北省 地方 标准 DB42/T 1992—2023 动物尿液中 α-受体激动剂的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 Determination of α-receptor agonists in animals urine by high-performance liquid chromatography -tandem mass spectrometry 2023 - 03 - 28发布 2023 - 05 - 28实施 湖北省市场监督管理局 发布 DB42/T 1992 —2023 I 目次 前言 ................................ ................................ ................ III 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 原理 ................................ ................................ ............... 1 5 试剂和材料 ................................ ................................ ......... 1 6 仪器和设备 ................................ ................................ ......... 2 7 样品的制备和保存 ................................ ................................ ... 2 8 测定步骤 ................................ ................................ ........... 2 9 结果计算 ................................ ................................ ........... 4 10 灵敏度、准确度和精密度 ................................ ............................ 5 附录A（资料性） 7种α-受体激动类药物中英文通用名称 、化学分子式和 CAS号 ............... 6 附录B（资料性） 猪尿基质匹配 7种α-受体激动类药物标准溶液色谱图 ....................... 7 DB42/T 1992 —2023 III 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖北省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位 : 湖北省兽药监察所（湖北省畜禽产品质量监督检验测试中心）、武汉海关技术中 心。 本文件主要起草人：王峻、金秀娥、龚波、王鹏、李菁菁、曾勇、王建华、卢芳、舒金秀、陈向丹、 胡深、董文婷、周平、吴晓翠、冯超林 。 本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话： 027-87665821 ，邮箱 hbsy@ivdc.com.cn ；对本文件的有关修改意见建议请反馈至湖北省兽药监察所（湖北 省畜禽产品质量监 督检验测试中心），联系电话： 027-87286385 ，邮箱： hbsy@ivdc.com.cn 。 DB42/T 1992 —2023 1 动物尿液中α -受体激动剂的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本文件规定了动物尿液中可乐定、溴莫尼定、替扎尼定、胍法辛、胍那苄、安普乐定、赛拉嗪等 7 种α-受体激动剂的液相色谱 -串联质谱测定方法。 本文件适用于猪、牛、羊的尿液中可乐定、溴莫尼定、替扎尼定、胍法辛、胍那苄、安普乐定、赛 拉嗪等7种α-受体激动剂的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中残留的 α-受体激动剂，经过氢氧化钠溶液碱化，乙酸乙酯提取并浓缩后用混合型阳离子固相 萃取小柱净化，液相色谱 -串联质谱测定，外标法定量。 5 试剂和材料 测定试剂和材料如下： —— 水为符合 GB/T 6682 规定的一级水 ； —— 甲醇（CH3OH）：色谱纯 ； —— 甲酸(HCOOH)：色谱纯 ； —— 氢氧化钠（ NaOH）：分析纯 ； —— 乙酸乙酯（ CH3COOC 2H5）：分析纯 ； —— 氯化钠（ NaCl）：分析纯 ； —— 氨水(NH4OH)：25%～28%，分析纯 ； —— 氢氧化钠溶液 （5 mol/L）：准确称取固体氢氧化钠 100 g，用水溶解并定容至 500 mL； —— 5%氨水甲醇溶液 ：取5 mL氨水，用甲醇定容至 100 mL； —— 0.1%甲酸溶液 ：取甲酸0.1 mL，用水定容至 100 mL； —— 甲酸-甲醇溶液 ：取0.1%甲酸溶液 90 mL，加甲醇10 mL，混匀； DB42/T 1992 —2023 2 —— 标准物质：盐酸可乐定、溴莫尼定、盐酸替扎尼定、胍法辛、胍那苄、盐酸安普乐定、赛拉 嗪含量均≥ 98.0%。具体见附录 A； —— 标准储备液 ：准确称取适量的标准物质 ，用甲醇分别配制成 1 mg/mL标准储备液 ，于2 ℃～ 8 ℃温度保存 ，有效期6个月； —— 混合标准中间液 ：分别准确量取 1.00 mL可乐定、溴莫尼定 、替扎尼定 、胍法辛、胍那苄、 安普乐定 、赛拉嗪标准储备液置于同一个棕色 100 mL量瓶中，用甲醇配制成浓度为 10 μg/mL的混合标准中间液 ，于2 ℃～8 ℃温度保存 ，有效期1个月； —— 混合型阳离子固相萃取柱 ：60 mg/3 mL，或相当者 ； —— 微孔滤头 ：0.22 μm有机相。 6 仪器和设备 测定仪器和设备如下： —— 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ ESI）； —— 天平：感量0.01 g和0.01 mg； —— 氮吹仪； —— 冷冻高速离心机 ：转速≥10000 r/min； —— 振荡器； —— 涡旋混合器 ； —— 离心管：50 mL； —— 固相萃取装置 ； —— pH计。 7 样品的制备和保存 样品的制备 取适量新鲜或解冻后摇匀的空白或供试样品，如有混浊，离心后取上清备用。 —— 取摇匀的供试样品，作为供试试样。 —— 取摇匀的空白样品，作为空白试样。 —— 取摇匀的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样。 样品的保存 -20 ℃以下条件保存 。 8 测定步骤 样品前处理 取试样5.0 mL,于50 mL塑料离心管中 , 用5 mol/L氢氧化钠溶液调 pH值至10.0～11.0，涡旋混匀 ，加 乙酸乙酯 10 mL，加1.5 g～2.0 g氯化钠，充分振荡 ，于10000 r/min离心5 min，转移上清液于另一 50 mL 塑料离心管中 。下层溶液中加乙酸乙酯 10 mL重复提取一次 ，合并两次上清液 ，50 ℃氮气吹干 ，加甲酸 -甲醇溶液 5.0 mL溶解残余物 ，备用。