1 ICS 65.020.30 CCS B 43 DB2302 齐 齐 哈 尔 市 地 方 标 准 DB2302/ T 03 6—2023 雏鹅大肠杆菌病防治 技术规程 2023 - 06 - 01发布 2023 - 07 - 01实施 齐齐哈尔市市场监督管理局 发 布 DB2302/T 036—2023 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由齐齐哈尔市农业农村局 提出并归口 。 本文件起草单位 ：黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院 、杜尔伯特蒙古族自治县畜牧技术服务中心 、 齐齐哈尔市畜牧兽医服务中心 、黑龙江省农业科学院齐齐哈尔分院 、龙江县哈拉海乡畜牧兽医综合服务 站、明水县动物检疫中心 。 本文件主要起草人 ：王爽、郭文凯、张鹏宇、石荷叶、刘伟宁、黄显晔、崔毅、王观悦、罗天瑶、 孟维珊、陈曦、杨旭东、张艳、刘雪松、薛沾枚、李旭业、尤海洋、李莉、陈亮、李伟、王志强、秦平 伟、陈楠楠、邹跃、王丽坤、丁昕颖、付龙、田蕾、王振、杨昊天、于辰龙、王佳、王岩、黄宇翔、谢 宇庭、胡宁、张政、夏立勇、王兵兵、刘勇、郭秋楠、闫静、孙良文、王鹤欣、李玉召、杜军、吕雄杰、 王东权、卢洪波、陶婧、王俊强、王立达、韩业辉、李青超、关凤贵、李兰璞。 DB2302/T 036—2023 雏鹅大肠杆菌病防治 技术规程 1 范围 本文件规定雏鹅大肠杆菌病的 流行特点 、诊断、防疫、治疗和诊疗档案 。 本文件适用于齐齐哈尔地区雏鹅大肠杆菌病的防治 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文件 ， 仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB 13078 饲料卫生标准 GB 18596 畜禽养殖业污染物排放标准 GB/T 36195 畜禽粪便无害化处理技术规范 NY/T 5030 无公害农产品 兽药使用准则 NY/T 5339 无公害农产品 畜禽防疫准则 《病死及病害动物无害化处理技术规范 》 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 雏鹅 出壳至 3周龄的幼鹅 。 3.2 雏鹅大肠杆菌病 雏鹅饲养期内由致病性大肠杆菌引起的局部或全身感染的细菌性传染病 。 4 流行特点 4.1 发病日龄 雏鹅易感 ，2周龄内多发 。 4.2 发病季节 一年四季均可发病 ，冬末春初为流行高发期 。 DB2302/T 036—2023 4.3 传播途径 4.3.1 垂直传播 患有大肠杆菌性输卵管炎母鹅产蛋时 ，大肠杆菌侵入蛋内 ，造成垂直传播 。 4.3.2 水平传播 4.3.2.1 种蛋存放与孵化时 ，带菌种蛋污染健康种蛋 。蛋壳被污染 后进入蛋内 ，孵出的雏鹅发病或带 菌。 4.3.2.2 被污染的饲料 、牧草、饮水、空气、土壤、运输工具 、饲养设施 、生产工具及有关接触人员 会通过呼吸道与消化道等传播途径将大肠杆菌病传播给雏鹅 ，导致疾病的发生。 4.4 发病率和死亡率 病鹅呈败血性症状 ，发病率10%～30%，2周龄内雏鹅死亡率可高达 50%。 5 诊断 5.1 原则 通过流行病学调查 、临床症状 、病理变化等作出的 初步诊断 。再经病原分离鉴定 ，排除其他病原感 染，确诊为原发性大肠杆菌病 。继发性大肠杆菌病的诊断 ，必须在其他原发性疾病基础上分离出大肠杆 菌。 5.2 症状 5.2.1 病程3 d～5 d，个别10 d以上。 5.2.2 患病雏鹅表现精神沉郁 ，缩头闭眼 ，走路摇晃 ，食欲减退或不食 ，角膜混浊 ，鹅体污浊 ，垂翅， 饮水增多 ，拉黄白色稀便 。 5.2.3 急性型的 病程短，可见神经症状疾跑 ，伸颈，随即倒地死亡 。 5.3 病理学 腹腔、肝脏以及心包膜可见纤维素性渗出物 ，呈淡黄色 ；腹腔积液 ，心包液浑浊 ；肝脏肿大 ，表面 可见出血点 ，质地变脆 。十二指肠后段浆膜面充血呈淡红色 ，肠粘膜轻度出血 。肾轻度水肿 ，质脆。腺 胃乳头出血 ，脾脏轻微肿大 ，有出血。小肠后端及盲肠有坏死样肉芽肿 ，肠粘膜脱落 。 5.4 病原学 5.4.1 涂片镜检 取病死雏鹅心脏 、肝脏和脾脏作涂片 ，革兰氏染色镜检 ，可见单个或成丛两端钝圆 、无荚膜革兰氏 阴性小杆菌。 5.4.2 病原分离培养 无菌条件下取病死雏鹅的心脏 、肝脏和脾脏 ，接种营养琼脂 、麦康凯和伊红美兰琼脂平板 ，放入37℃ 恒温培养箱培养 24 h，营养琼脂上可见直径 1 mm～2 mm、圆形、湿润光滑 、边缘整齐 、隆起的灰白色菌 落；麦康凯培养基上菌落颜色呈粉红色 ，伊红美蓝培养基上菌落呈黑色 且带金属光泽 。挑取以上特征单 DB2302/T 036—2023 个菌落，划线传代培养纯化进行革兰氏染色 ，显微镜观察细菌形态为两端钝圆革兰氏阴性小杆菌 。单个 菌落接种普通肉汤增殖培养 。 5.4.3 分离菌株生化试验 生化实验糖发酵试验能发酵乳糖 ，发酵葡萄糖产酸产气 ，发酵麦芽糖 、甘露醇，吲哚试验为阳性 ， 尿素酶试验阴性 ，VP试验阴性 、MR试验阳性 。 5.4.4 分离菌株的 PCR扩增 以增殖的菌液为模板 ，用细菌16S rDNA 的通用引物进行 PCR扩增。PCR扩增体系为 ：模板0.5 μL， 上、下游引物各 1 μL，taq聚合酶dNTP混合物12.5 μL，超纯水10 μL。PCR扩增程序为 ：94℃预变性5 min； 94℃变性1 min，55℃退火1 min，72℃延伸90 s，30个循环;72 ℃终延伸10 min。推荐的大肠杆菌通用引 物序列见附录A。扩增产物用 1%琼脂糖凝胶电泳检测目的片段为 1457 bp。 5.4.5 分离菌株的同源性分析 将分离菌株的 16S rDNA凝胶电泳产物进行回收 并测序，结果与已知大肠杆菌菌株 基因序列 进行同源 性比对，同源性在 99%以上确定为大肠杆菌 。 5.4.6 致病性试验 雏鹅致病性试验 ：取SPF雏鹅10只，随机分成 2组，每组5只，试验组分别用鉴定的大肠杆菌肉汤培 养物进行颈部皮下注射 ，每只雏鹅接种上述细菌 0.5 mL(大肠杆菌浓度为 3.0×109 CFU/mL)，对照组每只 接种生理盐水 0.5 mL；实验组雏鹅 12 h左右开始出现精神沉郁 ，腹围增大 ，48 h内全部死亡 ；死亡后剖 检雏鹅，其病理变化与自然发病雏鹅相同 ；对死亡雏鹅心脏 、肝脏组织涂片染色镜检见大肠杆菌 。 6 防疫 6.1 饲养管理 6.1.1 选择来源清楚 ，非疫区产蛋、孵化的雏鹅。 6.1.2 雏鹅运载车辆 、工具及用品等在装载前和卸载后应及时做好清洗和消毒工作 。运输路线远离 疫 区及市场等人口聚集地 。运输抵达后对鹅雏用 0.3%过氧乙酸或 0.1%新洁尔灭喷洒消毒 。 6.1.3 转群前应将鹅舍彻底清扫干净 ，用2%火碱或0.3%过氧乙酸等喷洒 ，再用密闭甲醛 （40 ml/m3）加 入高锰酸钾 （20 g/m3）熏蒸消毒 。 6.1.4 加强饲养管理 ，提高机体抗病能力 。根据鹅的品种 、大小、强弱不同 ，分群饲养 。合理调控舍 内温度、湿度、光照强度 、通风和饲养密度 。 6.1.5 保证饮水 充足，饲料供给营养需要 。饮用水卫生应符合 GB 5749的规定。饲料卫生应符合 GB 13078 的规定。 6.1.6 及时清扫粪便 、更换垫料 ，保持鹅舍干燥清洁 。饮水、喂料工具每日清洗后消毒 ，其他用品定 期清洁、消毒。用0.1%新洁尔灭或 0.2%～0.5%过氧乙酸喷洒或浸泡消毒 。 6.1.7 鹅舍周围环境每 2～3个月用2%火碱喷洒消毒 1次。水池经常换水 ，每月用生石灰 （14 g/m3～20 g/m3）或漂白粉（1 g/m3）至少消毒1次。 6.1.8 日观察记录鹅群 的采食、饮水、粪便、精神、活动、呼吸等基本情况 ，及时隔离病 、弱鹅。对 重病及病死鹅进行剖检及实验室病原诊断 。 6.1.9 病死鹅、粪污、免疫用品等废弃物处理应符合 GB/T 36195的规定，并执行《病死及病害动物无 害化处理技术规范 》的相关要求 。