ICS 65.020.01 CCS B 05 DB51 四川省 地方标准 DB51/T 3064—2023 中国大鲵野外种群及栖息地调查技术规程 2023-06-19发布 2023-08-01实施 四川省 市场监督管理局 发布 DB51/T 3064—2023 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 调查内容 ................................ ................................ ........... 2 5 调查方法 ................................ ................................ ........... 2 6 原始记录 ................................ ................................ ........... 4 7 调查结果 ................................ ................................ ........... 4 附录 A （资料性） 大鲵野外种群调查记录表 ................................ .............. 5 附录 B （资料性） e-DNA监测记录表 ................................ ................... 6 附录 C （资料性） 中国大鲵野外问卷调查记录表 ................................ .......... 7 附录 D （资料性） 中国大鲵主要形态学性状记录表 ................................ ........ 8 附录 E （资料性） 中国大鲵野外栖息地调查记录表 ................................ ........ 9 DB51/T 3064—2023 II 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 －2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》 的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由四川省农业农村厅提出、归口并解释。 本文件起草单位：中国科学院成都生物研究所。 本文件主要起草人： 赵天、江建平、王杰、谢锋、李成、朱未、赵春霖 。 本文件为首次发布。 DB51/T 3064—2023 1 中国大鲵野外种群及栖息地调查技术规程 1 范围 本文件规定了中国大鲵野外种群及栖息地 的调查内容、调查方法、 原始记录和 调查结果等要求。 本文件适用于对四川省 行政范围 内中国大鲵野外种群及栖息地的调查 和快速评估 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中 ，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 50707 河道整治设计规范 HJ 710.8 生物多样性观测技术导则 淡水底栖大型无脊椎动物 HJ 1167 全国生态状况调查评估技术规范 -森林生态系统野外观测 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件。 3.1 样线调查法 line transects 按照统计学要求布设调查样线，调查 人员在调查样线上行进，观察并记录样线两侧中国大鲵的个体 数的调查方法。 3.2 网笼陷阱 调查法 traps 按照统计学要求布设网笼陷阱，根据网 笼陷阱捕获的个体数对中国大鲵野外种群进行调查的方法。 3.3 环境DNA（e-DNA）调查法 environmental DNA survey 按照标准方法采集中国大鲵栖息地水样，经抽滤后分离 e-DNA，采用中国大鲵特异性引物的 PCR进 行扩增，测序分析环境中中国大鲵的存在与否和数量的调查方法。 3.4 栖息地 habitat 中国大鲵栖息的野外环境条件。 注：主要由生物和非生物环境 因子构成，涵盖了从水体到陆地的主要环境因子。 4 调查内容 4.1 中国大鲵的种群数量 包括采用样线调查法 和网笼陷阱调查法 分别调查到的中国大鲵成体、亚成体、幼体和卵的数量。 DB51/T 3064—2023 2 4.2 中国大鲵的主要形态学性状 包括性别、全长、体重、尾长、头长、后肢及后足长、尾宽、眼间距、前肢及前足长、尾高、头宽、 鼻间距、眼径、健康状况、是否存在外部伤口、是否存在微生物感染、是否有体外寄生虫等。 4.3 中国大鲵栖息地的 e-DNA分析记录 包括监测位点、采集时间、 DNA 提取结果、 PCR 分析检测结果等。 4.4 中国大鲵栖息地的主要环境因子 包括经纬度、海拔、 河岸土地利用类型、气温、空气湿度、河床类型、河流底质、河宽、水深、水 体流速、水体浊度、水温、总磷、总氮、氨氮、总硬度、溶解氧、总碱度、水体 pH、电导率、植被类 型与盖度、饵料生物 等。 4.5 中国大鲵及其栖息地的受胁因素 包括道路建设、砂石采挖、涉水工程建设、农牧渔业活动、污染类型、污染强度、外来物种等 。 5 调查方法 5.1 样线设置方法 5.1.1 河道选择方法 在开展调查的县市， 应通过与当地的政府部门（如渔政，林业站，保护区等）联系，也可采用访问 或文献调查的方式，筛选 2-3条有中国大鲵潜在分布的河流进行实地考察。 5.1.2 样线布设方法 在每条河流的上、中、下游分别设置 1条样线，累计 1 km。大型河流（长度 大于 5 km，河宽大于 5 m） 的样线设置 应为长 500 m ~ 1000 m，宽离岸 2 m，小型河流（长度 小于 5 km，河宽小于 5 m）的样线设置 应为长 200 m ~ 500 m，宽为整条河流的宽度。调查 应选择降雨少且水位低的时期以及流速缓慢的河段， 每条河流连续调查三天。 5.1.3 测量取样点选择 在调查开始前， 应在距起点 0.5 km处设置好安放器材及进行测量和棉签采样的工作点。在每一条样 线的起点，填好野外实地调查记录 表。 5.2 野外种群调查方法 5.2.1 样线调查法 应在天黑后进行。调查开始后， 3个 ~ 4个调查者并排沿着河流由下游至上游方向，通过聚光照明 涉水行进。涉水 应选择离岸 0.5 m、水深小于 1 m且透明度高的河道。调查 人员应佩戴手套， 用手抄网 捕捉见到的大鲵个体。 相关调查结果 参照附录 A进行填写。 5.2.2 网笼陷阱 调查法 水温低于 22 °C时，在较深且 /或透明度较低的水体 采用网笼陷阱调查法 ，该方法尤其适用于调查 大鲵种群密度较低的地区。 网笼陷阱调查法 布置的密度为 每条样线 3个 ~ 5个网笼，放网时间为每日黄 DB51/T 3064—2023 3 昏，收网时间 为次日早上 6点。诱饵可选择鸡肠，猪肝 、沙丁鱼等。 网笼陷阱调查法 不宜在大鲵的繁殖 季节使用。 相关调查结果 参照附录 A进行填写。 5.2.3 环境DNA（e-DNA）调查法 该方法应在白天进行。在样线中水深 大于 1 m，流速小于 1 m/s且有大石块分布的点取 e-DNA 水样， 取样点设置为 每条样线 3个。采用清洁剂清洗并用采样点河水润洗过的容器（ 4 L ~ 5 L塑料瓶）取水体 表面以下 2 cm ~ 5 cm的水样 4 L。采样人员 应佩戴手套，且每次采样 应更换手套。每个点取两瓶水样， 用孔径为 0.45 µm的硝酸纤维滤纸（或 玻璃纤维滤纸）在真空抽滤机过滤（玻璃设备 应提前高温灭菌处 理），滤膜保存在 95%无水乙醇中用作后续分析（必要时可以更换滤膜，但所有滤膜均 应保存在 95%无 水乙醇中）。 相关调查结果 参照附录B进行填写。 5.2.4 问卷调查法 在每个村向至少 10名当地人了解长期以来大鲵种群数量的变动以及栖息地受胁情况 ，参照附录 C填 写。 5.3 形态学性状测量方法 5.3.1 形态学测量方法 对采集到的个体编号，采用软尺和游标卡尺测量其 11个外部形态学性状（ 如图1所示） ，采用便携 式钩秤测量其体重。观察判断个体性别、健康状况、是否存在外部伤口 、是