ICS 65.020.30 CCS B 40 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 3075—2023 规模化羊场圈舍空气中有害微生物含量的 测定方法 Determination method of harmful microbial content in the air of large scale sheep house 2023-06-30发布 2023-07-30实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 3 075—2023 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（ SAM/TC 19 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古自治区生态环境科学研究院、内蒙古北平纺 织有限责任公司二狼山牧场、乌拉特中旗绿色产业发展中心、乌拉特中旗畜牧和水产服务中心。 本文件主要起草人：李长青、王超、皇甫江、郭二果、金海、田丰、王利、郭天龙、刘树军、赵启 南、阿拉木斯、乌日勒格、张海鹰、张介铭、乌云娜、孙雪峰。 DB15/T 3075 —2023 1 规模化羊场圈舍空气中有害微生物含量的测定方法 1 范围 本文件规定了 规模化羊场封闭圈舍空气中主要有害微生物含量的测定方法 。 本文件适用于规模化羊场。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4789.2 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 GB 4789.3 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数 GB 4789.10 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的测定 GB/T 18204.3 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 规模化羊场 large scale sheep farm 存栏基础母羊达到 500只以上的标准化羊场。 4 测定方法 培养基制备 4.1.1 大肠杆菌培养基：应按 GB 4789.3 的规定配制结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（ VRBA）(第二法 大肠菌群平板计数法 )，见附录 A中的A.1。 4.1.2 金黄色葡萄球菌培养基：应按 GB 4789.10 的规定配制 Baird-Parker琼脂培养基（第二法 金黄 色葡萄球菌 Baird-Parker平板计数），见附录 A中的A.2。 4.1.3 沙门氏菌培养基：应按 GB/T 13091 的规定配制亚硫酸铋琼脂培养基，见附录 A中的A.3。 4.1.4 细菌总数培养基：应按 GB/T 18204.3 的规定配制，见附录 A中的A.4。 4.1.5 真菌培养基：应按 GB/T 18204.3 的规定配制，见附录 A中的A.5。 采样 4.2.1 采样时间 DB15/T 3075 —2023 2 分别于8:00、14:00、20:00采样。 4.2.2 采样点设置 圈舍对角线五点法采样，周边 4点距墙面 1.5 m，采样点距地面 1.5 m。 4.2.3 采样方法 按照GB/T 18204.3 中的自然 沉降法执行，采样点设置 3个平行，静置 5分钟。 平板菌落计数 按照GB 4789.2 规定的方法计数，每个采样点取 3个平板的平均值计算。 微生物含量 微生物含量以 cfu/m3为记，按照奥梅梁斯基公示计算。 微生物含量（ cfu/m3）=50000*N/AT A：平板面积，单位为 cm2；T：平板暴露时间，单位为 min；N为平均菌落数，单位为 cfu。 DB15/T 3075 —2023 3 A A 附录 A （资料性） 培养基及制备方法 A.1 结晶紫中性红胆盐琼脂 A.1.1 成分 蛋白胨 7.0 g 酵母膏 3.0 g 乳糖 10.0 g 氯化钠 5.0 g 胆盐或3号胆盐 1.5 g 中性红 0.03 g 结晶紫 0.002 g 琼脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL A.1.2 制法 将上述成分溶于蒸馏水中，充分搅拌，调节 pH为7.4±0.1。煮沸2 min，将培养基融化并恒温至 45 ℃～50 ℃倾注平板。使用前临时制备，不应超过 3 h。 A.2 Baird-Parker琼脂培养基 A.2.1 成分 胰蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 5.0 g 酵母膏 1.0 g 丙酮酸钠 10.0 g 甘氨酸 12.0 g 氯化锂（ LiCl·6H2O） 5.0 g 琼脂 20.0 g 蒸馏水 950 mL A.2.2 增菌剂的配制 30%卵黄盐水 50 mL与经过除菌过滤的 1%亚碲酸钾溶液 10 mL混合，保存于冰箱内。 A.2.3 制法 将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节 pH为7.0±0.2。分装每瓶 95 mL，121 ℃ 高压灭菌 15 min。临用时加热溶化琼脂，冷至 50 ℃，每95 mL 加入预热至 50 ℃的卵黄亚碲酸钾增 菌剂5 mL摇匀后倾注平板 。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不应超过 48 h。 A.3 亚硫酸铋琼脂 DB15/T 3075 —2023 4 A.3.1 成分 蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 5.0 g 葡萄糖 5.0 g 硫酸亚铁 0.3 g 磷酸氢二钠 4.0 g 煌绿 0.025 g或5.0 g/L水溶液5.0 mL 柠檬酸铋铵 2.0 g 亚硫酸钠 6.0 g 琼脂 18.0 g～20.0 g 蒸馏水 1000 mL A.3.2 制法 将前三种成分加入 300 mL蒸馏水(制作基础液 )，硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入 20 mL和30 mL 蒸馏水中，柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一 20 mL和30 mL蒸馏水中，琼脂加入 600 mL蒸馏水 中；然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷至 80 ℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀 ，倒入基础 液中，混匀。 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节 pH为7.5±0.2，随即倾入琼脂液 中，混合均匀，冷至 50 ℃～55 ℃。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平板。 注： 本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处，超过 48 h会降低 其选择性，本培养基宜于当天制备，第二天使用。 A.4 营养琼脂 A.4.1 成分 蛋白胨 10.0 g 氯化钠 5.0 g 牛肉膏 5.0 g 琼脂 20.0 g 蒸馏水 1000 mL A.4.2 制法 将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节 pH为7.2～7.6，121 ℃、20 min灭菌，冷至 50 ℃～55 ℃倾注平板。 A.5 沙氏琼脂培养基 A.5.1 成分 蛋白胨 10.0 g 葡萄糖 40.0 g 琼脂 20.0 g 氯霉素 0.1 g 蒸馏水 1000 mL