ICS67.050 M74 团体标准 T/CDZX003—2023 乳粉中磷脂酰胆碱的测定高效液相色谱法 Determinationofphosphatidylcholineinmilkpowder—HPLCmethod 2023-07-03发布 2023-08-01实施 常德市质量协会发布 全国团体标准信息平台 目  次 前  言.............................................................................II 1范围...............................................................................1 2规范性引用文件.....................................................................1 3原理...............................................................................1 4试剂及材料.........................................................................1 5仪器和设备.........................................................................2 6试样制备与保存.....................................................................2 7测定步骤...........................................................................2 8结果计算和表述.....................................................................3 9精密度.............................................................................3 附录A（资料性附录）磷脂酰胆碱标准溶液色谱图.........................................4 全国团体标准信息平台 T/CDZX003-2023 II前  言 本文件按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。 本文件起草单位：中国检验认证集团湖南有限公司，常德市食品检验所，常德市产商品质量监督检 验所,湖南省产商品质量检验研究院，常德市纤维质量监测中心，辽宁省检验检测认证中心。 本文件主要起草人：王美玲、杨芳、刘建平、龙泽霞、郭予昕、卢文艳、袁凤君、刘振强、彭玲、 彭小悦、赵飞、王林、吴秀娟、刘雅婷、向辉、龚德力、薛小娟、张晓惠、代泳波、唐毅、杨军、郭盛、 刘芳、陈浩、刘娜、刘颖。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/CDZX003-2023 1乳粉中磷脂酰胆碱的测定高效液相色谱法 1范围 本文件规定了乳粉中磷脂酰胆碱的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于乳粉中磷脂酰胆碱的测定。 当取样量为1g，定容至5.0mL，检出限为5mg/100g，定量限为10mg/100g。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 根据相似相溶原理，溶液氯仿-甲醇（2+1,V/V）溶液对磷脂酰胆碱能很好的溶解和提 取，提取后过有机滤膜，液相色谱仪测定，外标法定量，测定磷脂酰胆脂含量。 4试剂及材料 除非另有说明，本文件所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1试剂 4.1.1氯仿：色谱纯。 4.1.2乙腈：色谱纯。 4.1.3甲醇：色谱纯。 4.1.4氯化钠：分析纯。 4.2溶液配制 4.2.1仿-甲醇溶液（2+1,V/V）：量取200mL氯仿加入到100mL甲醇中，混匀。 4.2.2氯化钠水溶液（8.8g/L）：称取0.88g氯化钠溶解于水中，转入100mL容量瓶中， 用水定容至刻度，摇匀。 4.3标准物质和标准溶液配制 4.3.1磷脂酰胆碱：纯度≥98%。 4.3.2标准储备液（1.0mg/mL）：称取适量的磷脂酰胆碱于10mL容量瓶中，用甲醇溶解 并定容至刻度，4℃下保存。 全国团体标准信息平台 T/CDZX003-2023 24.3.3标准工作溶液：移取一定体积的磷脂酰胆碱标准储备液（4.3.2），用氯仿-甲醇溶 液（4.2.1）稀释成0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL 系列浓度的标准工作溶液，现配现用。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配DAD检测器。 5.2超声波清洗器。 5.3涡旋混合器。 5.4分析天平：感量为0.0001g和0.001g。 5.5离心机：转速不低于6000r/min） 5.6氮吹仪：可控温。 5.7微孔滤膜：0.22mm，有机相型。 6试样制备与保存 取代表性样品500g混匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记，备用。应防止样 品受到污染或发生分析物含量的变化。 7测定步骤 7.1.1样品前处理 称取混合均匀的试样1g(精确到0.001g)于50mL离心管中，加入10mL氯仿-甲醇溶液 （4.2.1），于涡旋混合器上混匀1min，置于超声波清洗器上超声提取15min后，6000r/min 离心3min，吸取上层有机相于另一个50mL离心管中。在残渣中再加入10mL氯仿-甲醇溶液 （4.2.1）重复提取一次，合并提取液。在提取液中加入3mL氯化钠水溶液（4.2.2），涡旋 混匀3min后，6000r/min离心3min，取下层有机相于25mL离心管中，在45℃下氮吹浓缩至 近2mL左右，转移至10mL刻度离心管中，用氯仿-甲醇溶液（4.2.1）定容至5.0mL，再经0.22 m有机系微孔滤膜过滤，用于测定。 7.2测定 7.2.1液相色谱条件 a)色谱柱：HILIC亲水作用色谱柱，250mm´4.6mm（内径），粒径5mm，或性能相 当者； b)流动相：A为乙腈，B为乙腈-水（2+1,V/V），梯度洗脱程序见表1； c)流速：1.0mL/min； d)柱温：40℃； e)检测波长：205nm f)进样量：20mL。 按照表1进行梯度洗脱。 表1流动相梯度洗脱程序 时间 流动相A 流动相B 全国团体标准信息平台 T/CDZX003-2023 3(min) （%） （%） 0 100 0 8 80 20 12 55 45 16 20 80 20 0 100 25 0 100 26 100 0 31 100 0 7.2.2定量测定 按照7.2.1色谱条件测定样液和标准工作溶液，外标法定量。待测样液中磷脂酰胆碱的浓 度应在标准曲线范围之内，如果超出标准曲线范围，应稀释到合适浓度后分析。在上述仪器 条件下，磷脂酰胆碱的保留时间约为16.33min。标准工作溶液的色谱图参见附录A中图A.1。 7.3空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 8结果计算和表述 试样中磷脂酰胆碱的含量按式（1）计算。 ............................................................................(1) 式中： ——试样中磷脂酰胆碱的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）； ——试样的质量，单位为克（g）； ——试样的定容体积，单位为毫升（mL）； ——样液中磷脂酰胆碱的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）。 计算结果需扣除空白，结果保留三位有效数字。 9精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。 全国团体标准信息平台 T/CDZX003-2023 4AA 附录A （资料性附录） 磷脂酰胆碱标准溶液色谱图 A.1地域保护范围 图A.1磷脂酰胆碱标准溶液色谱图 _________________________________ 全国团体标准信息平台 T/CDZX003-2023 5全国团体标准信息平台