书书书犐 犆 犛６ ７．０ ５ ０犆５ ３ 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜２ ０ １ ２—２ ０ １ ９ 代替Ｓ Ｎ／Ｔ２ ０ １ ２—２ ０ ０ ７ 出口食醋中苯甲酸 、山梨酸的检测方法液相色谱及液相色谱 质谱／质谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犫 犲 狀 狕 狅 犻 犮犪 犮 犻 犱犪 狀 犱狊 狅 狉 犫 犻 犮犪 犮 犻 犱犻 狀狏 犻 狀 犲 犵犪 狉犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋—犔 犆犪 狀 犱犔 犆  犕 犛 ／犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ９１ ０２ ５发布 ２ ０ ２ ００ ５０ １实施 中华人民共和国海关总署 发 布书书书前　　言 　　本标准是按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则编写 。本标准代替 Ｓ Ｎ／Ｔ２ ０ １ ２—２ ０ ０ ７《进出口食醋中苯甲酸 、山梨酸的检测方法 　液相色谱法 》 ，除编辑性修改外 ，主要变化如下 ： — — —本标准增加确证法 ； — — —标准名称改为出口食醋中苯甲酸山梨酸的检测方法液相色谱及液相色谱 质谱法。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国太原海关 、山西中医药大学 。本标准主要起草人 ：花锦、宋欢、高媛惠、张鑫鑫、刘晓琳、郭丽丽。本标准所代替标准的历次版本发布情况为 ： — — —Ｓ Ｎ／Ｔ２ ０ １ ２—２ ０ ０ ７。 Ⅰ犛 犖／犜２ ０ １ ２—２ ０ １ ９出口食醋中苯甲酸 、山梨酸的检测方法液相色谱及液相色谱 质谱／质谱法 １　范围 本标准规定了进出口食醋中苯甲酸 、山梨酸的液相色谱检测以及液相色谱 质谱／质谱检测和确证方法。本标准适用于食醋中苯甲酸 、山梨酸的测定和确证 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本标准 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　方法提要 试样在酸性条件下蒸馏 ，馏出液采用液相色谱紫外检测器或液相色谱 质谱／质谱仪测定 ，外标峰面积法定量 。 ４　试剂和材料 除有特殊说明以外 ，所用试剂均为分析纯 ，水为一级水 。 ４．１　甲醇：色谱纯。 ４．２　乙腈：色谱纯。 ４．３　柠檬酸（Ｃ６Ｈ８Ｏ７·Ｈ２Ｏ） 。 ４．４　柠檬酸三钠 （Ｎ ａ３Ｃ６Ｈ５Ｏ７·２Ｈ２Ｏ） 。 ４．５　酒石酸。 ４．６　乙酸铵：色谱纯。 ４．７　氯化钠。 ４．８　碳酸氢钠 。 ４．９　柠檬酸缓冲溶液 （５ｍ ｍ ｏ ｌ ／Ｌ） ：称取柠檬酸 （４． ３）０． ７ｇ和柠檬酸三钠 （４． ４）０． ６ｇ加水溶解定容至１Ｌ。 ４．１ ０　酒石酸（１ ５％） ：取１ ５ｇ酒石酸（４． ５）用水定容到 １ ０ ０ｍＬ 。 ４．１ １　碳酸氢钠溶液 （２ ０ｇ／Ｌ） ：称取２ｇ碳酸氢钠 （４． ８） ，加水至１ ０ ０ｍＬ ，振摇溶解 。 ４．１ ２　５ｍＭ乙酸铵溶液 ：称取０． ３ ８ ５ｇ乙酸铵（４． ６） ，加水至１Ｌ，振摇溶解 。 ４．１ ３　苯甲酸钠标准物质 （Ｃ６Ｈ５ＣＯＯＮ ａ ，ＣＡ Ｓ号：５ ３ ２  ３ ２  １ ） ，纯度≥９ ９． ０％：或苯甲酸 （Ｃ６Ｈ５ＣＯＯＨ， ＣＡ Ｓ号：６ ５  ８ ５  ０） ，纯度≥９ ９． ０％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质 。 ４．１ ４　山梨酸钾标准物质 （Ｃ６Ｈ７ＫＯ２，ＣＡ Ｓ号：５ ９ ０  ０ ０  １ ） ，纯度≥９ ９． ０％；或山梨酸 （Ｃ６Ｈ８Ｏ２，ＣＡ Ｓ号： １ １ ０  ４ ４  １ ） ，纯度≥９ ９． ０％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质 。 ４．１ ５　苯甲酸、山梨酸标准储备溶液 （１０ ０ ０ｍ ｇ／Ｌ） ：分别准确称取苯甲酸钠 （４． １ ３）和山梨酸钾 （４． １ ４）标 １犛 犖／犜２ ０ １ ２—２ ０ １ ９准物质０． １ １ ８ｇ、０． １ ３ ４ｇ（精确到０． ０ ０ ０１ｇ） ，用水溶解并分别定容至 １ ０ ０ｍＬ 。于４℃贮存。当使用苯甲酸和山梨酸标准品时 ，需要用甲醇溶解并定容 。 ４．１ ６　苯甲酸、山梨酸标准混合液 ：准确移取苯甲酸 、山梨酸标准储备液 （４． １ ５）各１ ０． ０ｍＬ ，移入１ ０ ０ｍＬ容量瓶中 ，用水定容 。置于０℃～４℃保存１周。 ４．１ ７　空白样品提取液 ：采用空白样品 ，按照６． １步骤得到的溶液 。 ４．１ ８　消泡剂：信越ＫＭ  ７ ２ Ｇ Ｓ 。 ４．１ ９　滤膜：０． ４ ５μｍ，水系。 ４．２ ０　滤膜：０． ２ ２ １μｍ，水系。 ５　仪器和设备 ５．１　天平：感量为０． １ｍｇ和１ｍｇ。 ５．２　高效液相色谱仪 ：配紫外检测器 。 ５．３　高效液相色谱 质谱／质谱仪，配有电喷雾离子源 （Ｅ Ｓ Ｉ） 。 ５．４　蒸馏装置 ：参见附录 Ａ。 ６　测定步骤 ６．１　试样的处理 准确称取 ５ ０． ０ｇ试样，加入４ ０ｇ氯化钠（４． ７） ，５ｍＬ１ ５％ 酒石酸溶液 （４． １ ０） ，１滴消泡剂 （４． １ ８） ，加 水至约２ ０ ０ｍＬ ，混匀后，进行蒸馏 （蒸馏速度约为 ２． ５ｍＬ／ｍ ｉ ｎ） ，收集约９ ０ｍＬ馏出液，用水定容至 １ ０ ０ｍＬ 。用０． ４ ５μｍ的滤膜过滤后 ，待液相色谱测定 （如需质谱法确证 ，用０． ２ ２μｍ的滤膜过滤 ） 。 ６．２　测定 ６．２．１　液相色谱条件 液相色谱条件如下 ： ａ）　色谱柱：Ｃ１ ８柱（１ ５ ０ｍｍ×４． ６ｍｍ ，５μｍ，或相当者 ） ； ｂ）　流动相：甲醇：乙腈：５ｍｍ ｏ ｌ／Ｌ柠檬酸缓冲溶液 （１ ０∶２ ０∶７ ０ ，Ｖ／Ｖ／Ｖ） ； ｃ）　流速：１． ０ｍＬ／ｍ ｉ ｎ； ｄ）　检测波长 ：２ ３ ０ｎ ｍ； ｅ）　柱温：３ ０℃； ｆ）　进样量：２ ０μＬ。 ６．２．２　高效液相色谱 质谱／质谱条件 高效液相色谱 质谱／质谱条件如下 ： ａ）　色谱柱：Ｃ１ ８柱（１ ０ ０ｍｍ×２． １ｍｍ ，１． ７μｍ，或相当者 ） ； ｂ）　流动相：甲醇 ５ｍＭ 乙酸铵溶液 ，梯度洗脱程序见表 １； 表１　梯度洗脱程序 时间（ｍ ｉ ｎ） ５ｍＭ乙酸铵（％） 甲醇（％） ０． ０ ０ ９ ０ １ ０ ２犛 犖／犜２ ０ １ ２—２ ０ １ ９表１（续） 时间（ｍ ｉ ｎ） ５ｍＭ乙酸铵（％） 甲醇（％） ２． ０ ０ ３ ０ ７ ０ ３． ０ ０ ２ ０ ８ ０ ３． ５ ０ ２ ０ ８ ０ ５． ０ ０ ９ ０ １ ０ 　　ｃ）　流速：０． ３ ０ｍＬ ／ｍ ｉ ｎ； ｄ）　柱温：３ ５℃； ｅ）　进样量：１ ０μＬ； ｆ）　离子源：电喷雾离子源 ； ｇ）　扫描方式 ：负离子； ｈ）　检测方式 ：多反应监测 （ＭＲＭ） ； ｉ）　质谱／质谱参考条件参见附录 Ｂ。 ６．２．３　液相色谱测定 根据样液中苯甲酸和山梨酸的含量 ，选定浓度相近的标准混合工作液 ，保证样品溶液中苯甲酸 、山梨酸的响应值在线性范围内 ，标准工作液与样液等体积参差进样进行测定 。在上述色谱条件下 ，苯甲酸和山梨酸的参考保留时间分别约为 ６． ５ｍ ｉ ｎ 和９． ４ｍ ｉ ｎ 。苯甲酸、山梨酸标准溶液色谱图参见附录 Ｃ中 Ｃ． １。 ６．２．４　液相色谱 质谱／质谱测定和确证 按照液相色谱 质谱／质谱条件测定样品和基质标准工作溶液 ，如果目标化合物的保留时间与标准品保留时间相差不超过 ±２． ５％，所选择的离子对均出现 ，且定性离子对的丰度比与浓度相当基质标准工作溶液的丰度比一致 ，丰度比允许偏差不超过表 ２规定的范围 ，则可确定为样品中存在对应的待测分析物。苯甲酸、山梨酸标准溶液多反应监测图参见附录 Ｃ． ２。 表２　定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度 （％基峰） 允许的相对偏差 ＞５ ０％ ±２ ０％ ＞２ ０％到５ ０％ ±２ ５％ ＞１ ０％到２ ０％ ±３ ０％ ≤１ ０％ ±５ ０％ ６．２．５　空白试验 除不加式样外 ，均按上述步骤进行 。 ７　结果计算和表述 用色谱数据处理软件外标法或按式 （１）计算，计算结果需扣除空白值 ： ３犛 犖／犜２ ０ １ ２—２ ０ １ ９犡犻＝犃×犮犻×犞１×１０ ０ ０犃犛×犿×１０ ０ ０……………………（ １） 　　式中： 犡犻— — —试样中苯甲酸或山梨酸含量 ，单位为毫克每千克 （ｍｇ／ｋｇ） ； 犃— — —样液中苯甲酸或山梨酸的峰面积 ； 犮犻— — —标准工作液中苯甲酸或山梨酸的浓度 ，单位为微克每毫升 （μｇ／ｍＬ） ； 犞１— — —样液最终定容体积 ，单位为毫升 （ｍＬ） ； 犃犛— — —标准工作液中苯甲酸或山梨酸的峰面积 ； 犿— — —试样的质量 ，单位为克 （ｇ） 。计算结果以待测物的平行测定值的算术平均值表示 。当计算结果大于等于 １时，保留到三位有效数字；当计算结果小于等于 １时，保留到两位有效数字 。 ８　定量限、正确度（回收率）测定低限 ８．１　测定低限 液相色谱法及液相色谱 质谱／质谱法中苯甲酸和山梨酸的定量限均为 ０． １ｍｇ／ｋｇ。 ８．２　回收率 液相色谱及液相色谱 质谱／质谱法的测定回收率参见附录 Ｄ。 ４犛 犖／犜２ ０ １ ２—２ ０ １ ９附　录　犃（资料性附录 ） 蒸馏装置图 +' /Char212/Char181/Char201/Char198/Char32/Char208/Char192/Char196/Char185