书书书　 /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /G2B /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 犛 犖／犜３ ７ ２ ９．１ １—２ ０ １ ４ /G28 /G32 /G33 /G34 /G35 /G36 /G37 /G21 /G38 /G39 /G3A /G3B /G34 /G3C /G3D /G3E /G3F /G40 /G41 　 /G42１ １ /G43 /G44： /G45、 /G46 /G47 /G44 /G2B /G48犘 犆 犚  犇犎 犘 犔 犆 /G41 犐 犱 犲 狀 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犳 狉 狌 犻 狋 狊 狆犲 犮 犻 犲 狊 犻 狀犲 狓 狆狅 狉 狋 犳 狅 狅 犱犪 狀 犱犱 狉 犻 狀 犽 —犘 犪 狉 狋１ １：犇 犲 狋 犲 犮 狋 犻 狅 狀狅 犳 犆．狉 犲 狋 犻 犮 狌 犾 犪 狋 犪 犪 狀 犱犆．狊 犻 狀 犲 狀 狊 犻 狊 犻 狀犵狉 犲 犱 犻 犲 狀 狋—犘 犆 犚  犇犎 犘 犔 犆犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ４０ １１ ３ /G49 /G4A ２ ０ １ ４０ ８０ １ /G4B /G4C /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /G2D /G2E /G2D /G2F /G30 /G31/G49 /G4A rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　Ｓ Ｎ／Ｔ３ ７ ２ ９《出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法 》共分为１ １个部分： — — —第１部分：草莓成分检测 　Ｐ Ｃ Ｒ法； — — —第２部分：杏成分检测 　实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ法； — — —第３部分：梨成分检测 　实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ法； — — —第４部分：芒果成分检测 　实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ法； — — —第５部分：木瓜成分检测 　实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ法； — — —第６部分：苹果成分检测 　实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ法； — — —第７部分：葡萄成分检测 　Ｐ Ｃ Ｒ法； — — —第８部分：山楂成分检测 　实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ法； — — —第９部分：桃成分检测 　实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ法； — — —第１ ０部分：香蕉成分检测 　实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ法； — — —第１ １部分：橘、橙成分检测 　Ｐ Ｃ Ｒ  ＤＨＰ Ｌ Ｃ 法。本部分为 Ｓ Ｎ／Ｔ３ ７ ２ ９的第１ １部分。本部分是按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本部分起草单位 ：中国检验检疫科学研究院 、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局 、中华人民共和国福建出入境检验检疫局 。本部分主要起草人 ：陈颖、吴亚君、韩建勋、黄文胜、王斌、曹际娟、邓婷婷、陈文柄。 Ⅰ犛 犖／犜３ ７ ２ ９．１ １—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法 　第１ １部分：橘、橙成分检测犘 犆 犚  犇犎 犘 犔 犆 法 １　范围 Ｓ Ｎ／Ｔ３ ７ ２ ９的本部分规定了出口食品和饮料中橘橙成分的实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ检测方法 。本部分适用于果汁 、果酱及其他以水果为原辅料的食品中橘橙成分的定性检测 。本部分所规定方法的最低检出限 （ＬＯＤ）为１％（重量比） 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 Ｇ Ｂ／Ｔ２ ７ ４ ０ ３ 　实验室质量控制规范 　食品分子生物学检测 ３　术语、定义和缩略语 下列术语和定义适用于本文件 。 ３．１　术语和定义 ３．１．１橘　犆 犻 狋 狉 狌 狊狉 犲 狋 犻 犮 狌 犾 犪 狋 犪橘是芸香科柑橘属橘种 ，为常绿乔木双子叶植物 。 ３．１．２橙　犆 犻 狋 狉 狌 狊狊 犻 狀 犲 狀 狊 犻 狊橙是芸香科柑橘属橙种 ，为常绿乔木双子叶植物 。 ３．１．３清汁　犆 犾 犪 狉 犻 犳 犻 犲 犱 犼狌 犻 犮 犲经过澄清工艺加工 ，没有浑浊和沉淀的果汁 。 ３．１．４浊汁　犆 犾 狅 狌 犱狔犼狌 犻 犮 犲未经过澄清工艺加工 ，浑浊但未分层和沉淀的果汁 。 ３．２　缩略语 ３．２．１　ＤＮＡ：ｄ ｅ ｏ ｘｙｒ ｉ ｂ ｏ ｎ ｕ ｌ ｅ ｉ ｃａ ｃ ｉ ｄ ，脱氧核糖核酸 。 ３．２．２　ｄ ＮＴ Ｐ：ｄ ｅ ｏ ｘｙｒ ｉ ｂ ｏ ｎ ｕ ｌ ｅ ｏ ｓ ｉ ｄ ｅｔ ｒ ｉ ｐｈ ｏ ｓｐｈ ａ ｔ ｅ，脱氧核苷酸三磷酸 。 ３．２．３　ｄ ＡＴ Ｐ：ｄ ｅ ｏ ｘｙａ ｄ ｅ ｎ ｏ ｓ ｉ ｎ ｅｔ ｒ ｉ ｐｈ ｏ ｓｐｈ ａ ｔ ｅ，脱氧腺苷三磷酸 。 １犛 犖／犜３ ７ ２ ９．１ １—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.３．２．４　ｄ Ｃ Ｔ Ｐ：ｄ ｅ ｏ ｘｙｃｙｔ ｉ ｄ ｉ ｎ ｅｔ ｒ ｉ ｐｈ ｏ ｓｐｈ ａ ｔ ｅ，脱氧胞苷三磷酸 。 ３．２．５　ｄ ＧＴ Ｐ：ｄ ｅ ｏ ｘｙ ｇｕ ａ ｎ ｏ ｓ ｉ ｎ ｅｔ ｒ ｉ ｐｈ ｏ ｓｐｈ ａ ｔ ｅ，脱氧鸟苷三磷酸 。 ３．２．６　ｄ ＴＴ Ｐ：ｄ ｅ ｏ ｘｙｔ ｈｙｍ ｉ ｄ ｉ ｎ ｅｔ ｒ ｉ ｐｈ ｏ ｓｐｈ ａ ｔ ｅ，脱氧胸苷三磷酸 。 ３．２．７　ｄ ＵＴ Ｐ：ｄ ｅ ｏ ｘｙｕ ｒ ｉ ｄ ｉ ｎ ｅｔ ｒ ｉ ｐｈ ｏ ｓｐｈ ａ ｔ ｅ，脱氧尿苷三磷酸 。 ３．２．８　Ｃ ＴＡＢ：ｃ ｅ ｔｙｌ ｔ ｒ ｉ ｔ ｈｙｌ ａ ｍｍ ｏ ｎ ｉ ｕ ｍｂ ｒ ｏ ｍ ｉ ｄ ｅ ，十六烷基三甲基溴化铵 。 ３．２．９　Ｔ ｒ ｉ ｓ：Ｔ ｒ ｉ ｓ（Ｈｙｄ ｒ ｏ ｘｙｍ ｅ ｔ ｈｙｌ）ａ ｍ ｉ ｎ ｏ ｍ ｅ ｔ ｈ ａ ｎ ｅ ，三羟甲基氨基甲烷 。 ３．２．１ ０　Ｅ ＤＴＡ：Ｅ ｔ ｈｙｌ ｅ ｎ ｅｄ ｉ ａ ｍ ｉ ｎ ｅ ｔ ｅ ｔ ｒ ａ ａ ｃ ｅ ｔ ｉ ｃａ ｃ ｉ ｄ ，乙二胺四乙酸 。 ３．２．１ １　Ｔ ａｑ：Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍ ｕ ｓａ ｑｕ ａ ｔ ｉ ｃ ｕ ｓ，水生栖热菌 。 ３．２．１ ２　ＯＤ：ｏｐｔ ｉ ｃ ａ ｌｄ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｙ，光度密度 。 ４　方法提要 提取ＤＮＡ，以ＤＮＡ为模版，分别采用橘橙的特异性检测引物进行 Ｐ Ｃ Ｒ扩增，将Ｐ Ｃ Ｒ产物经ＤＨ Ｐ Ｌ Ｃ分析，进行食品及饮料中橘橙成分的检测鉴定 ，其中以橘橙果肉 ＤＮＡ为阳性对照 ，以非橘橙来源的ＤＮＡ为阴性对照 ，无菌水作为空白对照 。 ５　试剂和材料 除另有规定外 ，所有试剂均为分析纯或生化试剂 。实验用水符合 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２的要求。所有试剂均 用无ＤＮＡ酶污染的容器分装 。 ５．１　检测用引物和探针 ：见表１。 表１　引物和探针序列 引物／探针 引物 ／探针序列 （５’→３’ ） 扩增片段长度 靶基因 内参照５’端引物 Ｃ ＴＴＧＡＴＴＴＴＡＣ ＣＡＡＡＧＡＴＧＡＴＧＡ 内参照３’端引物 ＴＴ Ｃ ＴＴ Ｃ Ｇ ＣＡＴＧＴＡＣ Ｃ Ｃ Ｇ ＣＡＧ 橘／橙５’端引物 ＧＧＡＡＴ Ｃ ＴＧＧＡＴＴＡＧＡＡＴＧＡＧ 橘／橙３’端引物 Ｇ Ｃ ＧＧＡＡＴＡＣ Ｔ Ｃ ＧＡＡＣ ＧＧＴ Ｃ１ ５ ９ｂｐ ９ ２ｂｐ植物核酮糖  １，５ 二磷酸羧化酶 ／加氧酶基因 橙Ｔ ｒ ｎ Ｌ  Ｔ ｒ ｎ Ｆ 基因间区 ５．２　Ｃ ＴＡＢ提取缓冲液 ：２ ０ｇ／ＬＣ ＴＡＢ ，１． ４ｍ ｏ ｌ／ＬＮ ａ Ｃ ｌ，０． １ｍ ｏ ｌ／ＬＴ ｒ ｉ ｓ  ＨＣ ｌ ，０． ０ ２ｍ ｏ ｌ ／ＬＮ ａ ２Ｅ ＤＴＡ， ｐＨ８． ０。 ５．３　Ｃ ＴＡＢ沉淀液：５ｇ／ＬＣ ＴＡＢ ，４ ０ｍｍ ｏ ｌ ／ＬＮ ａ Ｃ ｌ。 ５．４　三氯甲烷 （氯仿） 。 ５．５　异丙醇。 ５．６　７ ０％乙醇（体积比） 。 ５．７　Ｎ ａ Ｃ ｌ溶液（１． ２ｍ ｏ ｌ／Ｌ） 。 ５．８　琼脂糖：电泳纯。 ５．９　溴化乙锭 。 ５．１ ０　分子量标准品 （１ ０ ０ｂｐ～２０ ０ ０ｂｐ） （ｂｐ：ｂ ａ ｓ ｅｐａ ｉ ｒ，碱基对） 。 ５．１ １　电泳缓冲液 ：Ｔ ｒ ｉ ｓ５ ４ｇ，硼酸２ ７． ５ｇ，０． ５ｍ ｏ ｌ／ＬＴ Ｅ缓冲液（ｐＨ ８． ０）２ ０ｍＬ，加蒸馏水至 １０ ０ ０ｍＬ ；使用时１ ０倍稀释。 ５．１ ２　溴化乙锭贮存液 ：用水配制成 １ ０ｍｇ／ｍＬ。 ２犛 犖／犜３ ７ ２ ９．１ １—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.５．１ ３　加样缓冲液 ：０． ２ ５％溴酚蓝，质量浓度为 ４ ０％的蔗糖水溶液 。 ５．１ ４　１ ０×Ｐ Ｃ Ｒ 缓冲液：氯化钾１ ０ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ，硫酸铵１ ６ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ，硫酸镁２ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ，Ｔ ｒ ｉ ｓ  ＨＣ ｌ （ｐＨ ８． ８）２ ０ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ，Ｔ ｒ ｉ ｔ ｏ ｎＸ  １ ０ ０１％ ，Ｂ Ｓ Ａ１ｍ ｇ／ｍＬ。 ５．１ ５　ｄ ＮＴ Ｐ溶液（ｄ ＧＴ Ｐ、ｄ Ｃ Ｔ