SN-T 3767.2-2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增 LAMP 检测方法第2部分筛选方法

书书书　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜３７６７．２—２０１４出口食品中转基因成分环介导等温扩增（犔犃犕犘）检测方法第２部分：筛选方法犔狅狅狆 犿犲犱犻犪狋犲犱犻狊狅狋犺犲狉犿犪犾犪犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀犱犲狋犲犮狋犻狅狀犿犲狋犺狅犱犳狅狉犵犲狀犲狋犻犮犪犾犾狔犿狅犱犻犳犻犲犱犮狅犿狆狅狀犲狀狋狊犻狀犳狅狅犱犳狅狉犲狓狆狅狉狋—犘犪狉狋２：犛犮狉犲犲狀犻狀犵犿犲狋犺狅犱２０１４０１１３发布２０１４０８０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　ＳＮ／Ｔ３７６７《出口食品中转基因成分环介导等温扩增（ＬＡＭＰ）检测方法》共分为３０部分：第１部分：通用要求和定义；第２部分：筛选方法；第３部分：玉米Ｂｔ  １１品系；第４部分：玉米Ｂｔ１７６品系；第５部分：玉米ＧＡ２１品系；第６部分：玉米ＭＩＲ１６２品系；第７部分：玉米ＭＩＲ６０４品系；第８部分：玉米ＭＯＮ８１０品系；第９部分：玉米ＭＯＮ８６３品系；第１０部分：玉米ＭＯＮ８８０１７品系；第１１部分：玉米ＭＯＮ８９０３４品系；第１２部分：玉米Ｔ  ２５品系；第１３部分：玉米３２７２品系；第１４部分：玉米５９１２２品系；第１５部分：大豆Ａ２７０４  １２品系；第１６部分：大豆Ａ５５４７  １２７品系；第１７部分：大豆ＤＰ３５６０４３品系；第１８部分：大豆ＧＴＳ４０  ３  ２品系；第１９部分：大豆ＭＯＮ８９７８８品系；第２０部分：水稻Ｂｔ  ６３品系；第２１部分：水稻ＫＦ６品系；第２２部分：水稻ＫＦ８品系；第２３部分：水稻ＫＭＤ品系；第２４部分：水稻ＬＬＲＩＣＥ６２品系；第２５部分：水稻Ｍ１２品系；第２６部分：水稻Ｔ１Ｃ  １９品系；第２７部分：水稻Ｔ２Ａ  １品系；第２８部分：小麦Ｂ７３  ６  １品系；第２９部分：甜菜Ｈ７  １品系；第３０部分：油菜ＲＴ  ７３品系。本部分为ＳＮ／Ｔ３７６７的第２部分。本部分按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫 Ⅰ犛犖／犜３７６７．２—２０１４ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、中华人民共和国汕头出入境检验检疫局、广州迪澳生物科技有限公司。本部分主要起草人：冯家望、王小玉、邝筱珊、李志勇、曾静、薛峰、陈颖、郑文杰、高东微、胡松楠、栾凤侠、徐君怡、陈双雅、张舒亚、邵碧英、蔡颖、程阳、常彦磊。 Ⅱ犛犖／犜３７６７．２—２０１４ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.出口食品中转基因成分环介导等温扩增（犔犃犕犘）检测方法第２部分：筛选方法１　范围ＳＮ／Ｔ３７６７的本部分规定了植物源性食品中转基因成分的环介导等温扩增（ＬＡＭＰ）筛选检测方法。本部分适用于进出口水稻、玉米、大豆、马铃薯及小麦其加工产品的定性检测。本方法的定性检测低限为０．５％（质量分数）。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法ＧＢ／Ｔ１９４９５．２　转基因产品检测　实验室技术要求ＧＢ／Ｔ１９４９５．３　转基因产品检测　核酸提取纯化方法ＧＢ／Ｔ１９４９５．７　转基因产品检测　抽样和制样方法ＳＮ／Ｔ１２０４　植物及其加工产品中转基因成分实时荧光ＰＣＲ定性检验方法３　缩略语下列缩略语适用于本文件。ＰＬＤ：ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＤｇｅｎｅ，磷脂酶Ｄ基因ＺＥＩＮ：玉米醇溶蛋白基因Ｌｅｃｔｉｎ：植物凝集素基因ＳＴ  ＬＳ１：马铃薯光诱导组织特异性基因ＧＡＧ５６Ｄ：小麦属醇溶蛋白基因ＣａＭＶ３５Ｓ：３５Ｓｐｒｏｍｏｔｅｒｆｒｏｍｃａｕｌｉｆｌｏｗｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，来源于花椰菜花叶病毒的３５Ｓ启动子ＮＯＳ：ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒｏｆｎｏｐａｌｉｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅ，胭脂碱合成酶基因终止子ＦＭＶ３５Ｓ：３５Ｓｐｒｏｍｏｔｅｒｆｒｏｍａｍｏｄｉｆｉｅｄｆｉｇｗｏｒｔｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ（ｃａｕｌｉｍｏｖｉｒｕｓｇｒｏｕｐ），来源于玄参花叶病毒３５Ｓ启动子ＮＰＴⅡ：ｎｅｏｍｙｃｉｎ  ３’ｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｇｅｎｅ，新霉素 ３’，磷酸转移酶基因ＢＡＲ：ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｇｅｎｅｆｒｏｍ犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊，来源于杆菌犅犪 犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊草丁膦乙酰转移酶基因ＰＡＴ：ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｇｅｎｅ，草丁膦乙酰转移酶基因ＧＯＸ：ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅ，草甘膦氧化还原酶基因ＬＡＭＰ：ｌｏｏｐ ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，环介导等温扩增１犛犖／犜３７６７．２—２０１４ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.ＴｒｉｔｏｎＸ  １００：聚乙二醇辛基苯基醚ｄＮＴＰ：ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，脱氧核苷三磷酸４　防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合ＧＢ／Ｔ１９４９５．２的规定。５　抽样与制样按照ＧＢ／Ｔ１９４９５．７的规定执行。６　核酸提取纯化按照ＧＢ／Ｔ１９４９５．３的规定执行。７　犔犃犕犘检测方法７．１　原理７．１．１　一般原理根据转基因植物外源基因和内源基因序列设计特异性内引物和外引物各一对或者添加一条或一对环引物，本标准所涉及的目标基因序列参见附录Ａ。所设计的引物特异性识别目标序列上的六个独立区域，在反应缓冲液中脱氧核糖核酸三磷酸、寡核苷酸引物在犅狊狋聚合酶的作用下启动循环链置换反应，在特异目标序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎 环ＤＮＡ混合物；从ｄＮＴＰ析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Ｍｇ２＋结合，产生副产物（焦磷酸镁）形成乳白色沉淀，加入显色液，即可通过颜色变化观察判定结果。在反应混合体系中不应存在ＤＮＡ聚合酶的抑制剂。在设置合适对照和在检测下限的情况下，定性检测结果可清楚判断样品是否为转基因产品。７．１．２　显色液显色原理ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ Ⅰ是一种高灵敏的ＤＮＡ荧光染料，可以嵌入方式结合到双链ＤＮＡ的小沟内。当它与双链ＤＮＡ结合时，荧光信号是游离状态的８００～１０００倍。在不发生扩增反应时，ＳＹＢＲ染料分子的荧光信号不发生改变，颜色显现为橙色；当发生扩增反应时，随着双链ＤＮＡ的增加，ＳＹＢＲ染料的荧光信号也随之大幅度增强，其信号强度可代表双链ＤＮＡ分子的

SN-T 3767.2-2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增 LAMP 检测方法 第2部分 筛选方法

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