ICS 71.040 Z 22 备案号： 辽 DB21 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3304—2020 畜禽粪便中西玛津残留量的测定 气相色谱-质谱法 Determination of simazine residue in livestock manure Gas chromatography-mass spectrometry method 2020 - 09 - 30 发布 辽宁省市场监督管理局 2020 - 10 - 30 实施 发 布 DB21/T 3304—2020 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009《标准化工作导则》给出的规则编写。 本标准由辽宁省农业农村厅提出并归口管理。 本标准起草单位：沈阳海关技术中心、沈阳农业大学、辽宁省农业科学院。 本标准主要起草人：徐宜宏，付海滨，李晓东，姜玲玲，金雁，胡姝，张敏，李丽娜。 本标准发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024-23447862 标准起草单位通讯地址：辽宁省沈阳市沈河区东滨河路106号，联系电话：024-24808859 I DB21/T 3304—2020 畜禽粪便中西玛津残留量的测定 气相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了畜禽粪便中西玛津残留量的气相色谱-质谱检测方法。 本标准适用于畜禽粪便中西玛津残留量的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于文本件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 试样经乙酸乙酯-乙腈混合溶液提取，通过弗罗里硅土固相萃取柱或中性氧化铝固相萃取柱净化， 气相色谱-质谱法（GC-MS）测定与确证，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 正己烷：色谱纯； 4.2 石油醚：分析纯，30℃-60℃； 4.3 乙腈：色谱纯； 4.4 丙酮：色谱纯； 4.5 乙酸乙酯-乙腈（1+1，V+V）：量取 50 mL 乙酸乙酯和 50 mL 乙腈，混合均匀； 4.6 石油醚-丙酮（1+1，V+V）：量取 50 mL 石油醚和 50 mL 丙酮，混合均匀； 4.7 正己烷-石油醚（1+1，V+V）：量取 50 mL 正己烷和 50 mL 石油醚，混合均匀； 4.8 无水硫酸钠：于 650℃灼烧 4h，用前于 105℃烘 4h，冷却后贮于密闭容器中，备用； 4.9 西玛津标准品(CAS：122-34-9)：纯度≥98%； 4.10 西玛津标准储备溶液：准确称取适量的西玛津标准品，用丙酮配制成浓度为 100 μg/mL 的 标准储备溶液；该溶液在 0℃～4℃条件下保存（有效期为 6 个月）； 4.11 西玛津基质标准工作溶液：根据需要吸取一定体积的标准储备液（4.10），用空白样品提取 液配成所需浓度的基质标准工作溶液； 1 DB21/T 3304—2020 4.12 弗罗里硅土固相萃取柱：500 mg，6 mL 或相当者； 4.13 中性氧化铝固相萃取柱：1 g，3 mL 或相当者。 5 仪器和设备 5.1 气相色谱-质谱仪（GC-MS）：配有电子轰击源（EI）； 5.2 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.1 g； 5.3 氮吹仪：可控温； 5.4 均质器：转速不低于 10000 r/min；； 5.5 离心机：转速不低于 4000 r/min； 5.6 涡旋混匀机。 6 试样制备与保存 将采集的新鲜畜禽粪样品 ,置于洁净的塑料袋中, 混匀，使固液均匀分布后，洁净容器内作为试样。 密封并标明标记。-18℃以下冷冻干燥保存。 在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 7 测定步骤 7.1 提取 称取试样2g（精确至0.01g），转入100 mL离心管中。加入20 mL乙酸乙酯-乙腈混合溶剂（4.5）， 均质提取40 s，4000 r/min 离心5 min，提取液经10 g无水硫酸钠柱(4.8)过滤至浓缩管，残渣再加入 20 mL乙酸乙酯-乙腈混合溶剂（4.5），重复上述操作。合并滤液于同一浓缩管中，于40℃减压蒸发至 近干,待净化。 7.2 净化 7.2.1 禽类粪便样品：用 2 mL 正己烷（4.1）将上述残渣涡旋混合溶解，注入预先用 5 mL 正己烷 淋洗的弗罗里硅土固相萃取柱（4.12）中净化。分别用 10 mL 正己烷，10 mL 石油醚淋洗，弃掉淋洗液。 用 10 mL 石油醚-丙酮（4.6）的混合溶剂洗脱，控制流速 2∽3 mL/min。收集全部洗脱液于浓缩管中， 于 40℃减压蒸发至近干，用正己烷（4.1）定容至 1.0 mL，涡旋混合溶解残渣，供 GC-MS 测定。 7.2.2 畜类粪便样品：用 2 mL 正己烷将上述残渣涡旋混合溶解，注入预先用 5 mL 正己烷预淋洗 的中性氧化铝柱（4.13）中净化。分别用 10 mL 用正己烷，10 mL 正己烷-石油醚（4.7），弃掉淋洗液。 用 10 mL 石油醚-丙酮（4.6）的混合溶剂洗脱，控制流速 2～3 mL/min，收集全部洗脱液于浓缩管中， 于 40℃减压蒸发至近干，用正己烷（4.1）定容至 1.0 mL，涡旋混合溶解残渣，供 GC-MS 测定。 7.3 测定 7.3.1 气相色谱-质谱条件 a) 色谱柱：DB-35 MS 柱（30 m×0.25 mm ×0.25 m），或相当者； 2 DB21/T 3304—2020 b) 色谱柱温度： 100℃ 15℃/min 240℃(3min) 8℃/min 300℃ (15min) ； c) 进样口温度：280℃； d) 接口温度：300℃； e) 电离方式：电子轰击源电离（EI），定量离子为 201 m/z，定性离子为 186、173、203 m/z； f) 离子源温度：230℃； g) 四级杆温度：150℃ h) 载气：氦气，纯度≥99.999%，流速2.0 mL/min； i) 进样方式：无分流，0.75 min后开启分流阀。 j) 进样量：1 L； k) 测定方式：选择离子监测（SIM）； l) 溶剂延迟时间：7.0 min。 7.3.2 定性测定 根据样液中西玛津残留量情况，选定浓度相近的标准工作溶液，标准工作溶液和待测样液中西玛津 的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准工作溶液和样液等体积交替进样测定。在上述GC-MS条件 （7.3.1）下，西玛津的参考保留时间为9.40-9.50 min，标准品色谱图参见附录A中图A.1。 进行气相色谱-质谱测定时，若被测物质色谱峰保留时间与标准比较，偏差在±2.5%之内，并且在 扣除背景后的样品谱图中，所选择的西玛津的特征离子（m/z，定性离子）均出现，同时所选择离子的 丰度比与标准物质离子丰度比相一致，或相似度在允许偏差之内（见表1），被确证的样品可判定为阳 性检出。 表1 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% ＞50 20～50 10～20 ≤10 允许的相对偏差/% ±10 ±15 ±20 ±50 7.3.3 定量测定 根据样液中西玛津残留量的情况，选定浓度相近的基质标准工作溶液，基质标准工作溶液和待测样 液中西玛津的响应值均应在仪器检测的线性范围内，对标准工作溶液与样液等体积进样测定，外标法定 量。 7.4 空白试验 除不称取试样外，其余均按上述步骤进行。 7.5 结果计算和表述 3 DB21/T 3304—2020 用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中西玛津残留量： X  A  c  V  1000 …………………(1) As  m  1000 式中： X ——试样中西玛津残留量，单位为毫克每千克，mg/kg； A ——样液中西玛津的峰面积； c ——基质标准工作溶液中西玛津的浓度，单位为微克每毫升，g/mL； V ——样液最终定容体积，单位为毫升，mL； As ——基质标准工作溶液中西玛津的峰面积； m ——最终样液所代表的试样量，单位为克，g。 注： 计算结果应扣除空白值。 8 定量限和回收率 8.1 定量限 本方法的定量限为0.01 mg/kg。 8.2 添加浓度范围、回收率及精密度 表2 样品的添加浓度、回收率及精密度的实验数据 样品 添加浓度/（mg/kg） 回收率范围/（%） 相对标准偏差(RSD)(n=6)/% 畜类粪便样品 0.01 74.3-96.1 7.1 0.02 91.0-112.5 5.4 0.1 91.6-102.2 3.5 0.01 90.0-104.7 4.7 0.02 92.0-102.7 2.1 0.1 93.5-104.2 3.1 禽类粪便样品 4 DB21/T 3304—2020 附 录 A （资料性附录） 西玛津标准品的色谱图 9.40 图A.1 西玛津标准品的总离子流色谱图 图A.2 西玛津标准品的全扫描（EI）质谱图 _________________________________ 5