ICS 13.060 C 51 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 4159—2020 水质 苦味酸的测定 液相色谱-串联质谱法 Water quality—Determination of trinitrophenol—Liquid chromatography-Tandem mass spectrometry 2020 - 09 - 25 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 10 - 25 实施 发 布 DB37/T 4159—2020 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 方法原理 .......................................................................... 1 4 试剂和材料 ........................................................................ 1 5 仪器和设备 ........................................................................ 2 6 样品 .............................................................................. 2 7 分析步骤 .......................................................................... 2 8 结果计算与表示 .................................................................... 3 9 精密度与准确度 .................................................................... 4 10 质量保证和质量控制 ............................................................... 4 I DB37/T 4159—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省住房和城乡建设厅提出并组织实施。 本标准由山东省城镇给水排水标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省城市供排水水质监测中心、山东珞珈计量检测有限公司、济南市疾病预防 控制中心、国家城市供水水质监测网青岛监测站、山东省分析测试中心、中国兵器工业集团第五三研究 所。 本标准主要起草人：孙韶华、贾瑞宝、王明泉、赵清华、辛晓东、宋艳、刘莉、刘仲、王晓芳、赵 汝松、高岩立、冀克俭、王晓利、梁玉、刘岚铮。 II DB37/T 4159—2020 水质 苦味酸的测定 液相色谱-串联质谱法 警告：实验中使用的溶剂和试剂均具有一定的毒性，对健康具有潜在的危害，应尽量避免与这些化 学品的直接接触。样品制备过程应在通风橱中进行，操作时应按规定要求佩戴防护器具,避免接触皮肤 和衣物。 1 范围 本标准规定了测定生活饮用水及其水源水中苦味酸的液相色谱-串联质谱法。 本标准适用于生活饮用水及其水源水中苦味酸的测定。 进样量10 μL时，本标准的方法检出限为1 μg/L，测定下限为4 μg/L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5750.2—2006 生活饮用水标准检验方法 水样的采集与保存 GB/T 5750.3—2006 生活饮用水标准检验方法 水质分析质量控制 GB/T 32465 化学分析方法验证确认和内部质量控制要求 GB/T 33087 仪器分析用高纯水规格及试验方法 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 HJ/T 164 地下水环境监测技术规范 3 方法原理 样品经0.22 μm针头过滤器过滤后直接进样，经液相色谱仪分离后进入串联质谱仪，采用多反应监 测（MRM）模式，根据保留时间和特征离子峰进行定性分析，外标法定量分析。 4 试剂和材料 4.1 载气：高纯氮，纯度≥99.999 %。 4.2 高纯水：水质应满足 GB/T 33087 的规定。 4.3 甲醇：色谱纯。 4.4 苦味酸标准溶液：ρ=100 mg/L，溶剂为甲醇，有证标准物质。 4.5 一次性针头过滤器：0.22 μm，聚四氟乙烯（PTFE）材质。 4.6 一次性注射器：2.5 mL。 4.7 标准贮备液的制备：ρ=10.0 mg/L。取 1.00 mL 苦味酸标准溶液（4.4），用高纯水（4.2）稀释并 定容至 10 mL，配制 10.0 mg/L 苦味酸标准贮备液。于 4 ℃以下冷藏密封避光保存。 1 DB37/T 4159—2020 4.8 标准使用液的制备：ρ=1.00 mg/L。取 1.00 mL 苦味酸贮备液（4.7），用高纯水（4.2）稀释并定 容至 10 mL，配制 1.00 mg/L 苦味酸标准使用液。于 4 ℃以下冷藏密封避光保存。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 色谱柱：C18 色谱柱（3.5 μm，2.1 mm×100 mm）或其他性能等效的色谱柱。 样品瓶：玻璃瓶，2 mL。 容量瓶：10 mL。 采样瓶：棕色玻璃瓶，具有玻璃塞。 微量注射器：100 μL 和 1 000 μL。 6 样品 6.1 样品的采集和保存 按照HJ/T 91和HJ/T 164的相关规定采集样品。用采样瓶（5.5）采集样品。 按照GB/T 5750.2—2006的相关规定保存样品。样品采集后在4 ℃以下冷藏保存，24 h内完成水样过 滤处理并上机测试。若水样中存在残留氯，加入抗坏血酸去除余氯。 6.2 试样制备 将水样经一次性针头过滤器（4.5）过滤后，置于进样瓶中，待测。如水样浓度较高或基体复杂， 可将样品适当稀释后，再经过一次性针头过滤器过滤。 6.3 空白试样制备 用高纯水（4.2）代替样品，按照与试样制备（6.2）相同的步骤制备空白试样。 7 分析步骤 7.1 色谱分析条件 7.1.1 7.1.2 7.1.3 7.1.4 流动相：A 相——高纯水（4.2），B 相——甲醇（4.3），A:B=10:90（V:V），等度洗脱。 流速：0.25 mL/min。 柱温：30 ℃。 进样体积：10 μL。 7.2 质谱分析条件 7.2.1 离子源：电喷雾离子源，负离子模式。 7.2.2 离子源温度：350 ℃。 7.2.3 扫描方式：MRM，多反应监测条件见表 1。 2 DB37/T 4159—2020 表1 苦味酸的 ESI-MS/MS 质量条件参数 中文名 苦味酸 母离子 子离子 碎裂电压 碰撞能 m/z m/z V V 197.9 109 8 181.9 109 12 228 7.3 校准曲线的绘制 7.3.1 本方法使用外标法定量。 7.3.2 校准系列的配制：取 6 个 10 mL 容量瓶，用微量注射器（5.6）依次准确加入 40 μL、100 μL、 150 μL、200 μL、250 μL、500 μL 标准使用液（4.8），用高纯水（4.2）定容至刻度，配制浓度分 别为 4 μg/L、10 μg/L、15 μg/L、20 μg/L、25 μg/L、50 μg/L 校准系列，现用现配。 7.3.3 按照质量浓度从低到高依次进样，以校准系列溶液中目标组分的质量浓度为横坐标，以峰面积 为纵坐标，绘制校准曲线。 7.4 试样测定 7.4.1 采用自动进样器，进样量为 10 μL。 7.4.2 按照与校准曲线的绘制（7.3）相同的步骤进行试样（6.2）的测定。 7.4.3 苦味酸 MRM 色谱图见图 1。 图1 苦味酸 MRM 色谱图 7.5 空白试验 按照与试样测定（7.4）相同的步骤进行空白试样（6.3）的测定。 8 结果计算与表示 8.1 定性结果 根据苦味酸MRM色谱图中的保留时间和特征离子对进行定性分析。 8.2 定量结果 3 DB37/T 4159—2020 根据样品中目标物定量离子对的峰面积，外标法定量。苦味酸的定量离子对为228＞181.9。 8.3 结果计算 水样中目标化合物的质量浓度计算见式（1）： = Ab ........................................ (1) k 式中： ρ——水样中目标化合物的质量浓度（μg/L）； A ——水样中目标化合物对应的峰面积； k ——校准曲线的斜率； b ——校准曲线的截距。 测定结果位数的保留与测定下限一致，最多保留三位有效数字。 9 精密度与准确度 9.1 精密度 4家实验室分别测定浓度为4 μg/L、30 μg/L、50 μg/L的样品，实验室内相对标准偏差为0.8 %～ 4.5 %；实验室间相对标准偏差分别为6.8 %、7.0 %和5.5 %；重复性限为0.35 μg/L、1.3 μg/L和2.1 μ g/L；再现性限为0.86 μg/L、7.0 μg/L和8.7 μg/L。 9.2 准确度 4家实验室分别测定地表水、地下水、出厂水及管网水加标样品。加标浓度分别为4 μg/L、30 μg/L、 50 μg/L时，加标回收率分别为80.9 %～107 %、93.0 %～101 %、88.7 %～97.7 %。 10 质量保证和质量控制 10.1 空白试验 每批次样品应做空白试验，测定结果不能超过方法的检出限。 10.2 校准曲线要求 2 分析样品之前应建立能够覆盖样品浓度范围的至少6个浓度点的校准曲线，曲线的相关系数r 应大 于0.995。 10.3 平行样 平行双样测定结果的相对偏差满足GB/T 5750.3—2006的要求。 10.4 基体加标 基体加标样品的加标回收率范围满足GB/T 3246