(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210891678.8 (22)申请日 2022.07.27 (71)申请人 广州艾奇西新药研究有限公司 地址 510700 广东省广州市黄埔区神舟路 288号D栋312房 (72)发明人 冯胜昔　林立东　陈大娴　姚柳端　 (74)专利代理 机构 北京北翔 知识产权代理有限 公司 11285 专利代理师 邹琴琴　侯婧 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称 一种使用高效液相色谱分离检测磷霉素钠 及其制剂中有关物质的方法 (57)摘要 本发明涉及一种使用高效液相色谱分离检 测磷霉素钠及其制剂中有关物质的方法。 所述高 效液相色谱法使用电喷雾检测器(CAD)进行检 测， 并采用以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱 柱和甲酸水溶液为流动相。 本发 明的方法能够有 效分离磷霉素钠及其制剂中的有关物质， 专属性 良好， 并且灵敏度高、 准确度高、 检测成本低以及 可以排除磷霉素钠制剂中的枸橼酸干扰， 为磷霉 素钠及其制剂的质量控制提供了有效保障。 权利要求书2页 说明书8页 附图4页 CN 115097051 A 2022.09.23 CN 115097051 A 1.一种使用高效液相色谱分离检测磷霉素钠及其制剂中有关物质的方法， 用于同时分 离检测结构式为 的物质A、 结构式为 的物质B、 结构式为 的物质C、 结构式为 的物质D和结构式为 的物质E， 其特 征在于： 所述色谱条件为： 使用电喷雾检测器(CAD)进行检测； 采用以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱， 色谱 柱柱温为25 ‑35℃； 以体积浓度为0.1 ‑0.4％的甲酸水溶液为流动相， 流动相流速为0.4 ‑ 0.6mL/mi n， 等度洗脱； 所述方法包括如下步骤： (1)溶液配制 供试品溶液制备： 准备待测定的磷霉素钠或其制剂， 溶于水中； 对照溶液制备： 移取一定量的供试品溶液， 并加水定量稀释使得稀释后的溶液中的磷霉素钠的质量浓 度为供试品溶液的磷霉素钠质量浓度的1％； (2)测定法 量取相同体积的供试品溶液和对照溶液， 分别注入液相色谱仪， 按照色谱条件记录色 谱图， 并采用主成分自身对照法计算磷霉素钠或其制剂中的物质A、 物质B、 物质C、 物质D和 物质E的含量， 具体 计算公式为： 物质百分含量(％)＝(Au/As) ×(1/100)×100％ 其中： Au为供试品溶液中每种物质峰的峰面积； As为对照溶 液中磷霉素的峰面积。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 采用体积浓度为0.2 ‑0.4％， 特别是0.2％ 的甲酸水溶液为流动相。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述流动相的流速为0.45 ‑0.55mL/min， 例 如0.45mL/mi n、 0.5mL/mi n或0.55mL/min。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述磷霉素钠供试品溶液中磷霉素钠的质 量浓度为0.8 ‑2mg/mL， 优选1 ‑1.5mg/mL， 特别是1mg/mL； 所述磷霉素钠制剂供试品溶液中磷 霉素钠的质量浓度为2 ‑10mg/mL， 优选4 ‑8mg/mL， 特别是5mg/mL。 5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法， 其特征在于， 使用包含磷霉素钠和物质A的 混合水溶液作为系统适应性溶 液。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 在所述系统适应性溶液中， 磷霉素钠和物 质A的质量之比为80 ‑120:1， 特别是10 0:1。 7.根据权利要求1至4中任一项所述的方法， 其特征在于， 还使用了磷霉素钠灵敏度溶权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115097051 A 2液， 所述灵敏度溶液中的磷霉素钠的质量浓度为供试品溶液中的磷霉素钠质量浓度的 0.05％。 8.根据权利要求1至4中任一项所述的方法， 其特征在于， 还使用了磷霉素钠、 物质A、 物 质B、 物质C、 物质D或物质E的定位溶 液以确定各物质的出峰位置 。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于， 在所述磷霉素钠定位溶液中， 磷霉素钠的 质量浓度为0.1 ‑0.6 μg/mL， 优选0.2 ‑0.4 μg/mL， 特别是0.3 μg/mL； 在所述物质A 定位溶液中， 物质A的质量浓度为0.2 ‑1 μg/mL， 优选0.4 ‑0.8 μg/mL， 特别是0.7 μg/mL； 在所述物质B定位溶 液中， 物质B的质量浓度为0.6 ‑2 μg/mL， 优选0.8 ‑1.5 μg/mL， 特别是1μg/mL； 在所述物质C定 位溶液中， 物质C的质量浓度为0.1 ‑0.8 μg/mL， 优选0.2 ‑0.6 μg/mL， 特别是0.5 μg/mL； 在所述 物质D定位溶液中， 物质D的质量浓度为0.1 ‑0.6μg/mL， 优选0.2 ‑0.5μg/mL， 特别是0.4μg/ mL； 在所述物质E定位溶液中， 物质E的质量浓度为0.1 ‑1μg/mL， 优选0.2 ‑0.8 μg/mL， 特别是 0.6 μg/mL。 10.根据权利 要求1至4 中任一项所述的方法， 还配制了质量浓度 为0.8‑2mg/mL， 优选1 ‑ 1.5mg/mL， 特别是1mg/mL的枸橼酸定位溶 液以确定枸橼酸的出峰位置 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115097051 A 3