(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210984389.2 (22)申请日 2022.08.17 (71)申请人 神威药业 集团有限公司 地址 050000 河北省石家庄市栾城区石栾 大街168号 申请人 京津冀联创药物研究 （北京） 有限公 司 (72)发明人 李丹　王喜军　闫广利　张喜武　 侯金才　 (74)专利代理 机构 北京汇智英财专利代理有限 公司 11301 专利代理师 牟长林 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/34(2006.01) (54)发明名称 一种基于UPLC-Q-TOF-MS技术的圣愈汤化学 成分分析方法及鉴定 (57)摘要 本发明公开了一种基于UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术 的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定， 属于药物分 析领域， 采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时 间质谱联用技术(UPLC ‑Q‑TOF‑MS)对圣愈汤基准 样品中的化学成分进行表征， 可以对圣愈汤中的 成分进行更全面的有效分析鉴定， 能够快速分析 及准确鉴定出多个化合物， 且灵敏度高， 分离度 好。 权利要求书2页 说明书13页 附图5页 CN 115452971 A 2022.12.09 CN 115452971 A 1.一种基于UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定， 其特征在于： 采用 超高效液相色谱串 联四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC ‑Q‑TOF‑MS)对圣愈汤基准样品中 的化学成分进行表征。 2.根据权利要求1所述的一种基于UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及 鉴定， 其特征在于， 包括以下UPLC色谱条件： 色谱柱为Waters  ACQUITY UPLCTM HSS T3色谱 柱(2.1mm ×100mm,1.8 μm)， 流动相A为0.1％甲酸乙腈， 流动相B为0.1％甲酸水， 柱温为40 ℃， 进样室温度为 4℃， 进样量 为2 μl， 流速为0.4ml/mi n， 梯度洗脱。 3.根据权利要求2所述的一种基于UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及 鉴定， 其特征在于： 梯度洗脱程序为0 ‑5min， 1％ ‑10％A； 5‑11min， 10％ ‑28％A； 11 ‑18min， 28％‑48％A； 18 ‑20min， 48％ ‑70％A； 20 ‑22min， 70％ ‑100％A； 22 ‑24min， 100％ ‑100％A； 24 ‑ 24.5min， 100％‑1％A； 24.5 ‑27min， 1％‑1％A。 4.根据权利要求1所述的一种基于UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及 鉴定， 其特征在于， 包括以下Q ‑TOF‑MS质谱条件： 电喷雾电离源(ESI)， 正、 负离子检测模式 (ESI+、 ESI ‑)， 扫描模式为全扫描； MS参数： 质量范围m/z  50‑1500Da， 扫描时间0.2s， 雾化气 和锥孔气为氮气， 毛细管电压2.8kv， 锥孔采样电压40v， 锥孔气流量50L/h， 离子源温度110 ℃， 碰撞能15 ‑45eV， 脱溶剂气温度350℃， 脱溶剂气流量800L/h； 准确质量校正采用亮氨酸 脑啡肽([M+H]+556.2771， [M ‑H]‑554.2615)溶液， 质量浓度为1μg/L， 流速5 μL/min， 校正频 率为5s。 5.根据权利要求1所述的一种基于UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及 鉴定， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1.圣愈汤基准样品的制备： 取圣愈汤各组分物质， 加水， 浸泡， 煎煮， 滤过； 待滤液冷却 后将其转至冻干瓶中， 冷冻干燥， 得圣愈汤基准样品； S2.供试品溶液的制备： 取圣愈汤基准样品， 置于瓶中， 加入 甲醇溶解， 超声处理， 然后 进行离心处 理， 取上清液， 即得 供试品溶液； S3.对照品溶液的制备： 精密称取梓醇、 咖啡酸、 阿魏酸、 绿原酸、 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、 异阿魏酸、 人参皂苷Rg1、 人参皂苷Re、 人参皂苷Rb1、 黄芪甲苷、 藁本内酯、 川芎嗪、 汉黄芩 素、 地黄苷D、 刺芒柄花素各对照品0.2g， 加甲醇使溶解并定容10ml， 摇匀， 得浓度均为20 μg/ ml的混合对照品溶 液； S4.将供试品溶液和对照品溶液分别采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联 用技术(UPLC‑Q‑TOF‑MS)进行检测， 得到供 试品溶液的色谱图和对照品溶 液的色谱图； S5.收集有关圣愈汤各单味药的化学成分信息， 建立全方化学成分信息库， 将信息库的 数据集导入UNIFI  1.8软件中， 与所采集的质谱 数据进行自动匹配， 选择误差在 ±5ppm以内 的化合物； S6.通过对照品色谱图比对、 裂解规律分析并结合相关文献报道， 进一步对化合物结构 进行鉴定 。 6.根据权利要求5所述的一种基于UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及 鉴定， 其特征在于， 步骤S1中， 圣愈汤基准样 品的制备具体操作为： 取当归、 黄芪各6.0g， 取 生地黄、 熟地黄、 人参、 川芎各3.6g， 加水1200mL， 浸泡60min， 武火加热至沸腾后， 转为文火 保持微沸， 35min后煎煮至600mL， 药液趁热用120目尼龙滤布滤过， 待滤液冷却后将其转至权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115452971 A 2冻干瓶中， 置 于冷冻干燥机内预冻再冷冻干燥， 冷冻干燥结束得圣愈汤基准样品。 7.根据权利要求6所述的一种基于UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及 鉴定， 其特征在于， 预冻的温度为 ‑80℃， 时间为12h； 冷冻干燥的温度为 ‑45℃， 压力为29Pa， 时间为24h 。 8.根据权利要求5所述的一种基于UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及 鉴定， 其特征在于， 步骤S2中， 供试品溶液的制备具体操作为： 取圣愈汤基准样品0.5g， 精密 称定， 置于具塞锥形瓶中， 加入50％甲醇10mL溶解， 密塞， 称定重量， 超声处理后放冷至室 温， 称定重量， 用50％甲醇补足减失的重量， 摇匀， 转移至离心管中， 然后进行离心处理， 然 后静置， 取 上清液， 即得 供试品溶液。 9.根据权利要求8所述的一种基于UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及 鉴定， 其特征在于， 步骤S2中， 超声处理的功率为250W， 频率为50kHz， 超声时间为60min； 离 心时间为10mi n。 10.根据权利要求1所述的一种基于UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及 鉴定， 其特征在于： 在圣愈汤中共鉴定出147个化合物， 其中黄酮类14个， 苯丙素类22个， 有 机酸类15个， 核苷类8个， 糖类6个， 氨基酸类5个， 内酯类18个， 萜类11个， 生物碱类4个， 皂苷 类27个， 其 他类17个。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115452971 A 3