(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221084909 2.5 (22)申请日 2022.07.19 (71)申请人 东阿阿胶股份有限公司 地址 252200 山东省聊城市东阿县阿胶街 78号 申请人 兰州大学 (72)发明人 胡芳弟　钤莉妍　张淹　刘海滨　 孔令梅　齐晓丹　韩佳冰　李文　 崔方　王春艳　王中超　张燕　 杨海菊　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 申素霞 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01)G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种复方阿胶浆的前处理方法和复方阿胶 浆中低聚糖的检测方法 (57)摘要 本发明提供了一种复方阿胶浆的前处理方 法和复方阿胶浆中低聚糖的检测方法， 涉及分析 检测技术领域。 本发明先利用第一醇溶剂进行沉 淀除去部分单糖， 降低单糖的响应值， 改善了低 聚糖特征图谱； 采用体积比为1： 1～1.5的水与第 二醇混合溶剂进行沉淀， 去除蛋白质和多糖的干 扰， 保护低 聚糖免受破坏； 利用50～70％乙腈水 溶液进行溶解中， 提高了待测样品液的稳定性； HPLC检测采用ELSD检测器， 溶剂兼容性好； 采用 特定的流动相体系和梯度系统程序， 得到的低聚 糖特征图谱中各成分分离度良好， 无杂质峰干 扰， 甘露三糖含量的检测结果准确度、 精确度和 稳定性高， 弥补了 《中国药 典》 中复方阿胶浆的低 聚糖特征图谱以及甘露三糖含量测定方法的空 白。 权利要求书1页 说明书13页 附图9页 CN 115219628 A 2022.10.21 CN 115219628 A 1.一种复方阿胶浆的前处 理方法， 包括以下步骤： 将复方阿胶浆与第一醇溶剂混合， 进行第一 沉淀， 得到醇沉物； 将所述醇沉物、 水和第二醇溶剂混合， 进行第二沉淀， 得到液体组分； 所述水和第二醇 溶剂的体积比为1： (1～1.5)； 将所述液体组分浓 缩， 得到待测复方阿胶浆低聚糖。 2.根据权利要求1所述的前处理方法， 其特征在于， 所述第 一醇溶剂的体积为复方阿胶 浆与第一醇溶剂总体积的95～ 98％。 3.根据权利要求1所述的前处理方法， 其特征在于， 所述复方阿胶浆与水的体积比为1： (2～50)。 4.根据权利要求1或2所述的前处理方法， 其特征在于， 所述第一醇溶剂和第二醇溶剂 独立地包括乙醇和/或甲醇。 5.根据权利要求1、 2或3所述的前处理方法， 其特征在于， 所述第一沉淀和第二沉淀的 时间独立 地为12～18h。 6.一种复方阿胶浆中低聚糖的检测方法， 包括以下步骤： 将权利要求1～5任一项所述前处理方法得到的待测复方阿胶浆低 聚糖溶解于乙腈水 溶液中， 得到待测样品液； 所述乙腈水 溶液中乙腈的体积分数为5 0～70％； 将所述待测样品液进行高效液相检测， 得到复方阿胶浆中低 聚糖的检测结果； 所述检 测结果包括低聚糖特征图谱和/或甘露三糖的含量； 所述低聚糖包括葡萄糖、 果糖、 蔗糖、 蜜 二糖、 三糖、 四糖、 甘露三糖和水 苏糖； 所述高效液相的检测条件 包括： 流动相体系包括流动相A和流动相B， 所述流动相A包括0.1～0.3v/v％三 乙胺水溶液， 所述流动相B包括乙腈； 梯度洗脱程序： 0～5min， 流动相B体积分数为78％， 5～18min， 流动相B体积分数由78％匀速降低至70％， 18～28min， 流动相B体积分数由70％匀速降低至 60％， 28～32mi n， 流动相B体积分数为6 0％， 32～33min， 流动相B体积分数由6 0％匀速增 加至78％， 33～40min流动相B体积分数为78％； 检测器为蒸发光散射检测器， 所述蒸发光散射检测器的条件包括： 漂移管温度85～95 ℃， 空气流速2.0～ 2.5L·min‑1。 7.根据权利要求6所述的检测方法， 其特征在于， 所述乙腈水溶液与制备待测复方阿胶 浆低聚糖用复方阿胶浆的体积比为3～5： 1。 8.根据权利要求6或7所述的检测方法， 其特征在于， 所述高效液相的检测条件还包括： 色谱柱为 Waters XBridge BEH Amide； 柱温为25～40℃； 进样量 为5～10 μL。 9.根据权利要求6或7所述的检测方法， 其特征在于， 所述蒸发光散射检测器的条件还 包括增益 值为1～3。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115219628 A 2一种复方阿胶浆的前处理 方法和复方阿胶浆中 低聚糖的检测 方法 技术领域 [0001]本发明涉及分析检测技术领域， 具体涉及 一种复方阿胶 浆的前处理方法和复方阿 胶浆中低聚糖的检测方法。 背景技术 [0002]复方阿胶浆是由党参、 红参、 熟地、 山楂及阿胶经现代加工炮制而成的中药成方制 剂， 主要功效为补气养血， 用于气血两虚， 头晕目眩， 心悸失眠等。 复方阿胶浆具有辅助抗 癌、 抗疲劳、 治疗妇科疾病以及补血等功效。 2020版 《中国药典》 对复方阿胶浆的质量标准规 定了总氮及正 丁醇提取物含量、 还 对其特征性氨基酸进行了 定性规定， 但无 特征图谱项。 [0003]现代药理研究发现， 党 参低聚糖可通过调节MAPKs信号通路调节免疫， 地黄低聚糖 具有增强免疫、 增强造血、 改善糖代谢紊及保护氧化性肝脏损伤等生理活性， 因此， 低聚糖 是复方阿胶浆发挥其补气 养血核心功效的重要物质基础。 糖类作为复方阿胶浆中的重要组 分， 其含量约为总提取物含量的40wt％， 然而以往有关复方阿胶浆四味植物药化学物质基 础研究多集中在 皂苷类、 黄酮 类、 多酚类等， 对复方阿胶浆中糖类的研究较少。 因此， 构建一 种简便的复方阿胶浆低聚糖分析方法用于复方阿胶浆低聚糖类成分的定性定量研究具有 着重要的意 义。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种复方阿胶 浆的前处理方法和复方阿胶 浆中 低聚糖的检测方法， 本发明提供 的前处理方法所得待测复方阿胶浆低聚糖的杂质含量少， 低聚糖的纯度较高， 本发明提供的检测方法能够实现 复方阿胶浆低聚糖类成分的定性和准 确定量检测。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种复方阿胶浆的前处 理方法， 包括以下步骤： [0007]将复方阿胶浆与第一醇溶剂混合， 进行第一 沉淀， 得到醇沉物； [0008]将所述醇沉物、 水和第二醇溶剂混合， 进行第二沉淀， 得到液体组分； 所述水和第 二醇溶剂的体积比为1： (1～1.5)； [0009]将所述液体组分浓 缩， 得到待测复方阿胶浆低聚糖。 [0010]优选的， 所述第一醇溶剂的体积为复方阿胶浆与第一醇溶剂总体积的95～ 98％。 [0011]优选的， 所述复方阿胶浆与水的体积比为1： (2 ～50)。 [0012]优选的， 所述第一醇溶剂和第二醇溶剂独立 地包括乙醇和/或甲醇。 [0013]优选的， 所述第一 沉淀和第二 沉淀的时间独立 地为12～18h。 [0014]本发明还提供了一种复方阿胶浆中低聚糖的检测方法， 包括以下步骤： [0015]将上述技术方案所述前处理方法得到的待测复方阿胶浆低聚糖溶解于乙腈水溶 液中， 得到待测样品液； 所述乙腈水 溶液中乙腈的体积分数为5 0～70％；说　明　书 1/13 页 3 CN 115219628 A 3