(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210888332.2 (22)申请日 2022.07.27 (71)申请人 南京锐志生物医药有限公司 地址 211100 江苏省南京市江宁区龙眠大 道568号1幢6层 (72)发明人 姬莉芳　李明显　王飞　徐丽　 沙向阳　 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/54(2006.01) (54)发明名称 一种多肽中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶 的检测方法 (57)摘要 本发明提供一种多肽中N,N ‑二异丙基碳二 亚胺和哌啶的检测方法。 采用 气相色谱法， 通过 选择适当的色谱柱和检测器， 设计合理的升温程 序， 建立了一套操作简单、 定量准确 并且实用的 定量分析方法， 能够准确快速的同时检测样品中 N,N‑二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量， 特别是醋 酸西曲瑞克产品中N,N ‑二异丙基碳二亚胺和哌 啶的含量， 克服了现有技术的不足， 保证了用药 安全， 具有较大的积极进步效果和实际应用价 值。 权利要求书2页 说明书8页 附图2页 CN 115184507 A 2022.10.14 CN 115184507 A 1.一种多肽中N,N ‑二异丙基碳二亚胺和哌啶的检测方法， 其特征在于， 采用气相色谱 分析法同时检测醋酸西曲瑞 克中N,N‑二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量， 所述检测方法包括 以下步骤： 以DBU‑二甲基亚砜为稀释剂溶解醋酸西曲瑞克， 得 供试品溶液； 以DBU‑二甲基亚砜为稀释剂 分别溶解N,N ‑二异丙基碳二亚胺对照品和哌啶对照品， 得 对照品溶 液； 采用非极性固定相色谱柱或性质相同、 相似的其他色谱柱， 采用柱温梯度升温方法， 使 用气相色谱仪检测所述供 试品溶液中N,N‑二异丙基碳 二亚胺和哌啶的含量； 其中， 柱温梯度升温方法： 以30~50℃为初始温度， 保持5~10分钟， 后以1~5℃/min的速 率升温至90~120℃， 再以3 0~60℃/min的速率升温至240~260℃， 保持5~10分钟。 2.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述稀释剂中DBU和二甲基亚砜体积 比例为3： （5~10） ； 优选地， 所述稀释剂中DBU和二甲基亚砜体积比例为3： 7。 3.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述供试品溶液中醋酸西曲瑞克的浓 度为10~40 mg/ml； 优选地， 所述供 试品溶液中醋酸西曲瑞克的浓度为3 0 mg/ml。 4.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述对照品溶液中N,N ‑二异丙基碳二 亚胺浓度为9~60 μg/ml， 哌啶浓度为1.8~12 μg/ml； 优选地， 所述对照品溶液中N,N ‑二异丙基 碳二亚胺浓度为3 0 μg/ml， 哌啶浓度为6 μg/ml。 5.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述检测方法使用的色谱柱为 Agilent CP‑Volamine色谱柱， 规格为3 0m×0.32mm×5 μm。 6.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述柱温梯度升温方法： 以40℃为初 始温度， 保持10分钟， 后以2℃/min的速率升温至110℃， 再以50℃/min的速率升温至250℃， 保持5分钟。 7.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述检测器采用氢火焰离子化检测 器， 进样口温度为100~200℃， 检测器温度为200~300℃； 优选地， 进样口温度为150℃， 检测 器温度为26 0℃。 8.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述检测器载气为高纯度氮气或氦 气， 纯度为9 9.999％以上； 载气流速为2.0ml/mi n。 9.根据权利 要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述检测器的进样量为1ml～10ml， 优 选地， 进样量为1ml； 所述检测器为分流进样， 其中分流进样的分流比为1:1~1:5； 优选地， 分 流进样的分流比为1:1。 10.根据权利要求1~9任一项所述的检测方法， 其特征在于， 所述检测方法包括以下步 骤： （1） 稀释剂配制： 量取DBU和二甲基亚砜， 混合均匀即得； （2） 样品配制： 供试品溶液制备： 用稀释剂溶解并稀释醋酸西曲瑞克， 得 供试品溶液； 对照品溶液制备： 用稀释剂分别溶解并稀释N,N ‑二异丙基碳二亚胺对照品和哌啶对照 品， 得对照品溶 液； （3） 色谱条件设置：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115184507 A 2色谱柱： Agi lent CP‑Volamine色谱柱； 柱温梯度升温方法： 以40℃为初始温度， 保持10分钟， 后以2℃/min的速率升温至110 ℃， 再以5 0℃/min的速率升温至25 0℃， 保持5分钟； 进样口温度： 15 0℃ 检测器： 氢火焰离 子化检测器 （FID） ， 检测器温度为25 0~270℃ 载气： 氮气 载气流速： 2.0ml/mi n 进样体积： 1ml 分流比： 1： 1 （4） 检测： 取稀释剂注入气相色谱仪， 记录色谱图， 色谱图中不得有其他峰干扰N,N ‑二异丙基碳 二亚胺和哌啶的测定； 取配制的对照品溶液注入气相色谱仪， 记录色谱图， 色谱图中哌啶和N,N ‑二异丙基碳 二亚胺依次出峰， 两者之间的分离度应符合要求； 取配制的供 试品溶液注入气相色谱仪， 记录色谱图； （5） 结果计算： 按外标法计算哌啶和N,N ‑二异丙基碳 二亚胺含量。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115184507 A 3