ICS 65.020.01 B 05 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 3852—2019 银杏培育指南 组培育苗 Guidebook for Ginkgo biloba cultivation—Tissue culture for seedlings 2019 - 12 - 31 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 01 - 31 实施 发 布 DB37/T 3852—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省自然资源厅提出并组织实施。 本标准由山东省林业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东农业大学、山东省林木种质资源中心。 本标准主要起草人：孙霞、邢世岩、单超、鲁仪增、孙立民、门晓妍、张谦、曹钟允、许楠、李影、 董遥、倪召欣。 I DB37/T 3852—2019 银杏培育指南 组培育苗 1 范围 本标准规定了银杏组培育苗的外植体采集和消毒、培养基配制与保存、接种、瓶苗培养、炼苗与移 栽、质量标准、商品苗包装、运输和档案管理等技术要求。 本标准适用于银杏的组培育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6001 育苗技术规程 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 外植体采集和消毒 3.1 外植体采集 外植体主要包括茎尖、茎段和胚。选取1～2年生生长健壮、具有品种典型性状的优良单株，取幼苗 外围当年生幼嫩枝条，采集时间在3～4月；胚取当年种仁，种子采集时间为10月上中旬，沙藏贮存70 d～ 90 d。种核除去外种皮、中种皮和内种皮，分离出种胚。 3.2 外植体消毒 3.2.1 茎尖和茎段 茎尖和茎段剪去叶片，用肥皂水擦洗，然后用自来水冲洗干净，无菌操作台下依次用70 %酒精消毒 30 s，含有吐温20的0.1 %氯化汞消毒8 min～10 min，无菌水冲洗3～5次，然后用无菌滤纸吸去茎尖和 茎段表面的水分。 3.2.2 种胚 种胚先用肥皂水擦洗，然后用自来水冲洗干净，无菌操作台下依次用70 %酒精消毒30 s，含有吐温 20的0.1 %氯化汞消毒6 min～8 min，无菌水冲洗3～5次，然后用无菌滤纸吸去种胚表面的水分。 3.3 外植体制备 3.3.1 茎尖和茎段 在无菌环境下，剪取0.5 cm～1.0 cm长的茎尖或1 cm～2 cm长的茎段，每段留1～2个腋芽或顶芽， 转入已消毒的培养皿中备用。 3.3.2 胚 1 DB37/T 3852—2019 将已消毒的种胚，转入培养皿中备用。 4 培养基配制与保存 培养基的配制与保存执行LY/T 1882标准。 5 接种 在无菌状态下，将培养皿中的外植体用镊子直插式接种于培养瓶中，每瓶接种2～3个。封口膜要及 时捆绑，并将品种代号、培养基类型、个人编号以及接种日期标示在瓶上。 6 瓶苗培养 6.1 初代培养 茎段外植体的初代培养使用芽诱导培养基，配方为MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.5 mg/L+0.20 % AC； 胚外植体的初代培养使用MS培养基，pH 5.8～6.0。培养温度为25 ℃±2 ℃，置于1 500 lx～2 000 lx 的光照条件下培养10 d～15 d，光照8 h/d～12 h/d。 6.2 增殖培养 外植体增殖3～5倍后，剪成1.0 cm～2.0 cm带芽小段，转入新的增殖培养基中。培养基配方为MS+NAA 0.1～0.5 mg/L+6-BA 0.1～2.0 mg/L+0.25 % AC。培养条件同初代培养。增殖周期为30 d～45 d。 6.3 复壮 继代培养8～10代后进行复壮。 6.4 生根培养 选择生长健壮、叶色正常，高3 cm～5 cm的嫩茎接种于生根培养基中，培养基配方为1/2MS+IBA 0.5 mg/L。培养条件同初代培养。 7 炼苗与移栽 7.1 瓶苗炼苗 选取有活力，生长健壮，叶色正常，根数≥5条，根长≥0.8 cm的组培苗，温室自然光闭口炼苗2～ 3周，开口炼苗5 d～9 d，温度保持25 ℃±3 ℃。 7.2 出瓶驯化 洗净组培苗残留的培养基，移栽到无纺布容器中驯化。栽培基质采用细河沙+珍珠岩+草炭土，其体 积比为1:1:2，使用前12 h～24 h用0.5 %～0.7 %的高锰酸钾消毒。驯化期间保持温度20 ℃～30 ℃， 空气湿度70 %～80 %，光照强烈时可使用遮光度60 %～70 %的遮阳网遮阳。小苗长出新叶后，每7 d～ 10 d喷施叶面肥一次。 7.3 移栽 2 DB37/T 3852—2019 经过25 d～30 d驯化即可移栽至大田。 7.4 苗期管理 执行GB/T 6001标准。 8 质量标准 8.1 组培苗质量标准 苗木粗壮、挺直、有活力，具原品种特性。苗高3 cm～5 cm，叶片≥3片，大小协调、有层次感、 色泽正常。根3～5条，根长适中，长势好。同一批次达标的组培苗在90 %以上，且培养基无污染。 8.2 移栽苗的质量标准 苗木健壮、挺拔，形态完整，具原品种特性。苗高5 cm～10 cm，地径≥0.2 cm。叶片≥6片，大小 协调，色泽正常。根系完整、发达。同一批次达标的组培苗在90 %以上，无检疫性病虫害。 9 包装、运输 9.1 包装 瓶苗保留在培养瓶中，出瓶苗洗去琼脂后装入塑料小盒，移栽苗统一泡沫箱包装。可再加外包装。 9.2 运输 琼脂苗应使用纸托盘运输。装车时切勿倒置。用有蓬车辆运输，高温和严寒季节选用冷藏车。运输 途中温度保持8 ℃～15 ℃，72 h内到达目的地。移栽苗路途时间不能超过48 h。 10 档案管理 参照GB/T 6001执行。 _________________________________ 3