(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211114254.7 (22)申请日 2022.09.14 (71)申请人 南京正大天晴制药有限公司 地址 210038 江苏省南京市经济技 术开发 区惠欧路9号 (72)发明人 王玉如　刘晓敏　卢忠秋　兰公剑　 徐丹　朱春霞　 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/88(2006.01) (54)发明名称 一种4-二甲氨基吡啶的检测方法 (57)摘要 本发明涉及一种4 ‑二甲氨基吡啶的检测方 法， 采用液相色谱 ‑质谱联用法进行测定， 该检测 方法灵敏度高、 准确度高、 耐用性好， 可有效控制 西格列汀中的基因毒杂质4 ‑二甲氨基吡啶的质 量， 减少了患者用药副反应的发生， 保证了用药 安全性。 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 CN 115326998 A 2022.11.11 CN 115326998 A 1.一种4‑二甲氨基吡啶的检测方法， 其特征在于： 采用高效液相色谱—质谱联用的方 法， 高效液相色谱的流动相为乙酸盐缓冲液 ‑乙腈。 2.如权利要求1所述的一种4 ‑二甲氨基吡啶的检测方法， 其特征在于， 所述流动相乙酸 盐缓冲液与乙腈的体积比为10: 88‑92， 优选为10： 90 。 3.如权利要求1所述的一种4 ‑二甲氨基吡啶的检测方法， 其特征在于， 所述流动相的乙 酸盐缓冲液为乙酸铵和乙酸的缓冲液， 优选乙酸铵缓冲液的浓度为10m mol/l。 4.如权利要求1所述的一种4 ‑二甲氨基吡啶的检测方法， 其特征在于， 所述乙酸盐缓冲 液的pH为3.0 ‑5.0； 优选pH为 4.0。 5.如权利要求1所述的一种4 ‑二甲氨基吡啶的检测方法， 其特征在于， 所述高效液相色 谱的色谱柱采用亚乙基桥杂化颗粒为 填料， 优选为 Waters ACQUITY BEH HILIC色谱柱。 6.如权利要求1所述的一种4 ‑二甲氨基吡啶的检测方法， 其特征在于， 所述高效液相色 谱的流动相的流速为0.25 ‑0.35ml/min； 优选为0.28 ml/min、 0.30ml/min或0.32ml/min， 进 一步优选为0.3 0ml/min。 7.如权利要求1所述的一种4 ‑二甲氨基吡啶的检测方法， 其特征在于， 所述高效液相色 谱的柱温为25 ‑35℃； 优选为25℃、 3 0℃或35℃； 进一 步优选为3 0℃。 8.如权利要求1所述的一种4 ‑二甲氨基吡啶的检测方法， 其特征在于， 所述质谱采用电 喷雾离子源， 多重 离子反应正离 子检测模式。 9.如权利要求1所述的一种4 ‑二甲氨基吡啶的检测方法， 其特征在于， 所述质谱的离子 源参数干燥气温度300℃； 干燥气流速6L/min； 鞘 气温度325℃； 鞘 气流速11L/min； 雾化器压 力45psi； 喷 嘴电压500V； 毛细管电压 3500V。 10.如权利要求1所述的一种4 ‑二甲氨基吡啶的检测方法， 其特征在于， 采用高效液 相—质谱联用法； 其中， 高效液相的相关条件如下： 色谱柱： Waters  ACQUITY BEH HILIC； 流速： 0.3 0ml/min； 流动相： 乙酸盐缓冲溶液 ‑乙腈， 所述乙酸盐缓冲溶液 ‑乙腈的体积比为10： 90， 所述乙 酸铵缓冲液的浓度为10m mol/l， pH为 4.0； 质谱的相关条件如下： 采用电喷雾 离子源， 多重 离子反应正离 子检测模式； 离子源参数： 干燥气温度300℃； 干燥气流速6L/min； 鞘气温度325℃； 鞘气流速11L/ min； 雾化器压力45psi； 喷 嘴电压500V； 毛细管电压 3500V。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115326998 A 2一种4‑二甲氨基吡啶的检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于生物医药领域， 涉及一种基因毒杂质的检测方法,具体涉及的是一种 4‑二甲氨基吡啶的检测方法。 背景技术 [0002]磷酸西格列汀是一种高选择性 的DPP‑IV抑制剂的口服降糖药物， 临床用于2型糖 尿病患者的治疗， 可有效调节血糖和血脂水平， 改善胰岛功能， 具有不良反应少和安全性高 等优点。 在磷酸西格列汀合成工艺中用到 了4‑二甲氨基吡啶， 具体结构如下： [0003] [0004]其含有警示结构芳 香杂环， 属于潜在基因毒性杂质。 [0005]基因毒性杂质在微量的水平下能诱导DNA发生突变， 具有潜在的致癌性， 威胁人类 的健康， 已被广泛关注及严控。 因此有必要建立一种磷酸西格列汀中4 ‑二甲氨基吡啶的检 测方法。 根据欧洲EMA、 美国FDA、 ICH  M7和中华人民共和国药典(四部)关于基因毒性杂质的 指导原则等要求， 基因毒性杂质的毒理学关注阈值(TTC)为1.5ug/天。 磷酸西格列汀制剂一 般日最大使用剂量为128.5mg， 所以磷酸西格列 汀中4‑二甲氨基吡啶的限度为11ppm， 限度 较低， 液相色谱方法达不到灵敏度要求。 针对如何检测西格列汀中的4 ‑二甲氨基吡啶目前 无相关文献报道。 [0006]因此， 找到一种灵敏度高、 专属性好的检测该基因毒杂质的方法， 实现对西格列汀 中该杂质的有效控制， 从而在一定程度上保证西格列汀的质量和患者用药 的安全性， 具有 重要研究意 义。 发明内容 [0007]本发明的目的是提供一种西格列汀中基因毒杂质4 ‑二甲氨基吡啶的检测方法， 从 而实现对西格列汀中该基因毒杂质的有效控制， 以减少患者用药副反应的发生， 保证用药 安全性。 [0008]本发明提供一种高效液相色谱—质谱联用的方法， 用于磷酸西格列汀中基因毒性 杂质4‑二甲氨基吡啶的检测。 [0009]在一些实施方案中所述高效液相色谱的流动相为 乙酸盐缓冲液 ‑乙腈， 在一些典 型的实施方案中乙酸盐缓冲液与乙腈的体积比为 10:88‑92， 在一些更为典型的实施方案中 乙酸盐缓冲液与乙腈的体积比为10： 90 。 [0010]在一些实施方案中， 所述 乙酸盐缓冲液为 乙酸铵和乙酸的缓冲液， 在一些实施方 案中乙酸铵缓冲液的浓度为10m mol/l。 [0011]在一些实施方案中， 所述乙酸盐缓冲液的pH为3.0 ‑5.0； 在一些更为典型的实施方说　明　书 1/5 页 3 CN 115326998 A 3