(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211142373.3 (22)申请日 2022.09.20 (71)申请人 江阴天江药业有限公司 地址 214400 江苏省无锡市江阴高新区新 胜路1号 (72)发明人 周海琴　查同乐　海丰　顾芹英　 陈盛君　李松　胡剑虹　张开雪　 钱润　邵琪　 (74)专利代理 机构 南京苏高专利商标事务所 (普通合伙) 32204 专利代理师 陆涛 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01)G01N 30/54(2006.01) G01N 30/74(2006.01) G01N 30/88(2006.01) (54)发明名称 一种区分不同基原凌霄花药 材的色谱方法 (57)摘要 本发明公开了一种区分不同基原凌霄花药 材的色谱方法， 包括1)供试品溶液的制备、 2)参 照物溶液的制备、 3)色谱方法的建立、 4)凌霄花 药材对照指纹图谱制定、 5)不同基原凌霄花药材 鉴别等步骤， 通过峰5的有无可区分凌霄花两基 原， 完成对凌霄花(美洲凌霄)药材与凌霄花(凌 霄)药材的区分。 本发明采用超高效液相色谱法 构建凌霄花(凌霄)和凌霄花(美洲凌霄)的UPLC 特征图谱， 对区别成分进行质谱指认和对照品确 认， 具有专属性强、 稳定性高、 重复性好的特点， 实现有效鉴别凌霄花多基原的目的， 同时有助于 完善凌霄花药 材的质量标准。 权利要求书2页 说明书6页 附图3页 CN 115469034 A 2022.12.13 CN 115469034 A 1.一种区分不同基原凌霄花药 材的色谱方法， 其特 征在于： 包括下述 步骤： 1)供试品溶液的制备： 取供试品粉末加入甲醇溶液溶解， 加热回流冷却后通过甲醇溶 液补足定量， 摇匀过 滤后取续滤 液， 获得供试品溶液； 2)参照物溶液的制备： 取凌霄花对照药材加水溶解， 加热回流冷却， 摇匀过滤后取续滤 液作为对照药材参照物溶液； 取毛蕊花糖苷对照品、 异毛蕊花糖苷对照品、 肉苁蓉苷F对照 品、 木犀草素 ‑7‑O‑二葡萄糖苷 酸对照品、 芹菜素 ‑7‑O‑二葡萄糖苷 酸对照品， 加甲醇溶液溶 解后制作对照品参照物溶 液； 3)色谱方法的建立： 取美洲凌霄与凌霄药材粉末， 通过步骤1)方法制备获得美洲凌霄 供试品溶液与凌霄 供试品溶液， 取步骤2)获得的对照药材参照物溶液、 对照品参照物溶液、 美洲凌霄 供试品溶液与凌霄供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪， 测定得到不同基原凌 霄花药材的UPLC特 征图谱； 4)凌霄花药材对照指纹图谱制定： 取美洲凌霄供试品溶液与凌霄供试品溶液若干批， 采用超高效液相色谱法， 分别建立美洲凌霄与凌霄的特征图谱， 对相应特征峰进行质谱指 认及对照品确认； 5)不同基原凌霄花药材鉴别： 美洲凌霄有8个共有峰， 凌霄有6个共有峰， 二者重合的共 有峰为： 峰1肉苁蓉苷F、 峰3campneoside  II、 峰4campneo side II异构体、 峰6毛蕊花糖苷和 峰7异毛蕊花糖苷； 与美洲 凌霄相比， 凌霄缺失峰5芹菜素 ‑7‑O‑二葡萄糖醛苷酸， 凌霄增加 一个峰A， 经质谱指认 为野黄芩素 ‑7‑O‑二葡萄糖醛苷酸； 通过峰5的有 无可区分凌霄花两基 原， 完成对美洲凌霄药 材与凌霄药 材的区分。 2.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法， 其特征在于： 所述的步 骤1)中供试品粉末 置于具塞锥形瓶中， 每克供试品粉末对应加入22ml～28ml的65％～75％ 的甲醇溶液进行溶解。 3.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法， 其特征在于： 所述的步 骤1)中加热回流时间为1.4小时～1.6小时。 4.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法， 其特征在于： 所述的步 骤2)中每克凌霄花对照药 材对应加入2 2ml～28ml的水进行 溶解。 5.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法， 其特征在于： 所述的步 骤2)中每1ml对照品溶液对应含有140 μg～160 μg毛蕊花糖苷、 100 μg～120 μg异毛蕊花糖苷、 25 μg～35 μg肉苁蓉苷F、 35 μg～45 μg木犀草素 ‑7‑O‑二葡萄糖苷酸和35 μg～45 μg芹菜素 ‑7‑ O‑二葡萄糖苷酸。 6.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法， 其特征在于： 所述的步 骤3)中制备美洲凌霄供试品溶液与凌霄供试品溶液时， 提取溶剂为甲醇、 70％甲醇、 50％甲 醇、 30％甲醇或者水， 提取时间为15min、 30min或者45min， 提取方式为超声处理、 振摇提取 或者加热回流， 提取体积为15ml、 25ml或者5 0ml。 7.根据权利要求1所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法， 其特征在于： 所述的步 骤3)或步骤4)中超高效液相色谱仪分析的色谱条件为： 采用Eclipse  Plus C18RRHD(2.1mm ×100mm， 1.8 μm)色谱柱； 以乙腈为流动相 A， 以0.1％冰醋酸溶液为流动相B进行梯度洗脱， 流速为0.25ml/min～0.35ml/min， 柱温为25℃～35℃， 检测波长为210nm～400nm， 进样量 0.5 μl/mi n～1.5 μl/mi n。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115469034 A 28.根据权利要求7所述的区分不同基原凌霄花药材的色谱方法， 其特征在于： 所述的梯 度洗脱条件为： 0～2min时， 流动相A的体积分数为5％ →11％， 流动相B的体积分数为95％ → 89％； 2min～4min时， 流动相A的体积分数变化为11％ →13％， 流动相B的体积分数变化为 89％→87％； 4min～16min时， 流动相A的体积分数为13％ →18％， 流动相B的体积分数为 87％→82％； 16min～21min时， 流动相A的体积分数变化为18％ →40％， 流动相B的体积分数 变化为82％ →60％； 21min～24min时， 流动相A的体积分数为40％ →60％， 流动相B的体积分 数为60％ →40％； 24min～25min时， 流动相 A的体积分数变化为60％ →5％， 流动相B的体积 分数变化 为40％→95％。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115469034 A 3