ICS 65.020.40 DB51 B 61 DB**/T***-2014 四 川 省 地 方 标 准 DB51/T 2631—2019 赤枫组培繁育技术规程 2019-12-17 发布 四川省市场监督管理局 2020-01-01 实施 发 布 -1- DB51/T 2631—2019 目 前 次 言 ............................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 场地要求 .......................................................................... 1 4 培养基配制 ........................................................................ 2 5 组织培养 .......................................................................... 2 6 炼苗移栽 .......................................................................... 3 7 出圃 .............................................................................. 4 附录 A（资料性附录） MS 培养基配制表 ................................................. 5 附录 B（资料性附录） 赤枫组培瓶苗的质量分级 .......................................... 6 附录 C（资料性附录） 赤枫出圃苗的质量分级 ............................................ 7 -I- DB51/T 2631—2019 前 言 本标准按GB/T1.1-2009《标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由四川省林业和草原局提出并归口。 本标准由四川省林业和草原局负责解释。 本标准由四川省市场监督管理局批准。 本标准起草单位：四川七彩林科股份有限公司 本标准主要起草人员：谢松林、马建华、沈香兰、李飞鸿、罗雪梅、王小辉、朱晓菲、许艺、何程相、 丁龙梅、杨小霞、向明剑、黄良伟、张艳 - II - DB51/T 2631—2019 赤枫组培繁育技术规程 1 范围 本标准规定了赤枫（Acer palmatum ‘Sangokaku’）组培快繁技术的场地要求、培养基配制、组织 培养、炼苗移栽及出圃等。 本标准适用于赤枫组培育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 6001-1985 育苗技术规程 LY/T 1882-2010 林木组织培养育苗技术规程 SN/T 2586-2010 进出境组培苗检疫规程 DB51/T1899-2014 千层金组培快繁育苗技术规程 3 场地要求 3.1 组培室 3.1.1 操作间 操作间主要进行培养基和培养母液的配制及培养基灭菌工作。配制培养基所需化学试剂为附表A.1 所列及NaOH、HCl、蔗糖和琼脂等。操作间的配备标准参照DB51/T1899-2014的规定执行。 3.1.2 缓冲间 是从外部环境到内部洁净环境的过度空间。缓冲间的配备标准参照DB51/T1899-2014的规定执行。 3.1.3 接种室 组培材料的灭菌、接种、继代和生根工作。要求无菌环境。接种室的配备标准参照DB51/T1899-2014 的规定执行。 3.1.4 培养间 主要进行植物材料的培养。要求能控温控湿，并控制光培养和暗培养的时间，为无菌洁净空间。培 养间的配备标准参照DB51/T1899-2014的规定执行。 3.2 炼苗区 是植物材料移栽前的过度空间。搭建荫棚，有遮阴喷水设施。保持温度25℃～30℃，湿度85%以上， 光照3000Lux的半封闭状态。 -1- DB51/T 2631—2019 3.3 苗圃 栽植床排水良好，栽植床采用深沟高畦，畦宽1.6m～2.0m，沟深20cm～30cm，宽20cm，沟与沟之间 相连，利于排水。应有定时喷灌设施、排水设施、降温设施、增温设施和补光设施。大田苗床须搭建小 拱棚，保持温度25℃～30℃，湿度85%以上。 苗圃的建设按照GB 6001-1985的规定执行。 4 培养基配制 4.1 培养容器和接种器械的清洗 培养容器和接种器械先用洗涤剂浸泡过夜，后用清水冲洗至无泡沫。干燥后备用。 4.2 培养基配制 4.2.1 培养基母液的配制 培养基采用MS基本培养基，所需各元素见附录A。先按照标准配制大量元素、微量元素、铁盐、有 机成分母液，再按照工作液浓度分别取用各母液，同时添加30g/L蔗糖，6g/L琼脂，加热至100℃后分装。 4.2.2 激素母液配制 激素采用6-BA、IAA和NAA。6-BA用1mol/L NaOH预溶，IAA和NAA用95%乙醇预溶然后配制成1mg/ml 激素母液。 4.2.3 初代培养基的配制 初代培养基配方为MS+0.5mg/L IAA。用1mol/L NaOH调节pH值为6.5。分装至240ml组培瓶中。 配制方法依照LY/T 1882-2010的规定执行。 4.2.4 继代培养基的配制 继代培养基配方为MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA。用1mol/L NaOH调节pH值为6.5。分装至240ml 组培瓶中。 配制方法依照LY/T 1882-2010的规定执行。 4.2.5 生根培养基的配制 生根培养基配方为1/2MS+0.3mg/L NAA。用1mol/L NaOH调节pH值为6.2。分装至240ml组培瓶中。 配制方法依照LY/T 1882-2010的规定执行。 4.3 培养基灭菌 将分装好的培养基放入灭菌筐中，在121℃，0.5 MPa的环境中灭菌20min后，冷却凝固后，保存在 无菌环境中备用。 5 组织培养 5.1 外植体来源 选用观赏价值高的优良单株上的枝条。 -2- DB51/T 2631—2019 5.2 外植体准备 5.2.1 采集 外植体的采集时间为6月份的晴天早上。选用生长健壮、无病虫害、品种纯正母株的当年生枝条， 去除叶片，剪成3cm左右的带芽茎段。 5.2.2 预处理 将切好的外植体先用洗涤剂浸泡15min，再在流水下冲洗60min～120min，直至去除多余泡沫。用滤 纸滤干备用。 5.2.3 表面消毒 将处理好的外植体在超净工作台上，用50%可湿性多菌灵粉剂400倍液浸泡1 h后， 75％乙醇灭菌30 s，最后0.1％升汞灭菌处理10min。无菌水清洗5遍后，用无菌滤纸吸干多余水分备用。 5.3 初代培养 在超净工作台上，将灭菌好的外植体垂直插入初代培养基中。使腋芽芽点位于培养基之上。在光照 2000Lux，光培养/暗培养为16h/8h,温度24℃，湿度70%的培养室中培养30d～40d。 5.4 继代培养 待萌发的腋芽长至 2cm～3cm, 在超净工作台上将萌发的腋芽从原外植体上切下，然后转接至继代 培养基中进行继代增殖培养。选用 240ml 的组培瓶进行继代增殖，每瓶培养基 20ml～30ml，接种密度 为 7 株/瓶，增殖周期 40d。培养条件同 5.3 的规定。 5.5 生根培养 待增殖后的丛生芽单芽长至2cm～3cm时，在超净工作台上切割单芽转接于生根培养基上。培养条件 同5.3的规定，培养30d。 6 炼苗移栽 6.1 炼苗 选取高度5cm～8cm，单株根系数5条以上且叶片数5片以上的组培苗进行炼苗。组培瓶苗的质量分级 见附录B。在炼苗区放置6d后，拧松组培瓶盖，再放置3d后，完全打开瓶盖，放置7d左右。期间保持适 当湿度，注意遮阳，防止高温灼伤。 6.2 移栽 取出组培苗，用清水洗去基部培养基，用1000ppm可湿性多菌灵粉剂浸泡3min～5min后移栽至混合 基质中，其体积比为：V（草炭）：V（蛭石）：V（珍珠岩）=1:1:1。移栽后喷足定根水，遮阴保湿， 防止前期高温灼伤，后期逐渐放宽温光条件，使其与外界环境一致。每隔5d～7d用800ppm的可湿性多菌 灵粉剂或1000ppm代森铵或600ppm百菌清等喷洒防病。 6.3 后期管理 6.3.1 水分管理 -3- DB51/T 2631—2019 移栽前期保持土壤湿润，不可偏干。夏季应在早晚浇水，入秋后土壤稍干为宜，冬季减少水分。 6.3.2 施肥管理 移栽前期避免施肥，移栽一月后可视苗木情况适当施肥。夏季以氮肥为主，秋季以磷、钾混合肥为 主。每2周淋施一次。 6.3.3 病虫害管理 按照GB 6001-1985《育苗技术规程》的标准执行。 7 出圃 7.1 出圃要求 7.1.1 苗高 15cm 以上，具 5 条以上白嫩粗壮完整根，地径 2mm 以上。 7.1.2 要求小苗长势健康良好，株型匀称，茎秆健壮、叶色正常，无徒长、衰老和受抑制现象，根系 发达，颜色正常，无衰老、病害、生长异常现象，无病虫害，无黄叶、烂叶，无机械损伤。 7.1.3 出圃苗移栽时须保护好根系。 7.2 出圃苗质量分级 出圃苗的质量分级见附录C。 7.3 出圃苗检疫 出圃苗的检疫依照SN/T 2586-2010的规定执行。 -4- DB51/T 2631—2019 AA 附 录 A （资料性附录） MS 培养基配制表 表A.1 名称 大量元素（10×） 微量元素（100×） 铁盐（100×） 有机成分（100×） MS培养基所需各物质含量表 母液浓度 工作液浓度（mg/L） （g/L） NH4NO3 1650 16.5 KNO3 1900 19 MgSO4·7H2O 370 3.7 CaCl２·2H2O 440 4.4 KH2PO4 170 1.7 KI 0.83 0.083 H3BO3 6.2 0.62 MnSO4·4H2O 22