ICS 65.020.30 CCS B 44 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 3756—2024 阿拉善白绒山羊肉脂肪酸指纹特征 测定方法 Method for determination of fatty acid fingerprint characteristics of Alashan white cashmere goat meat 2024-12-18发布 2025-01-18实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 3756 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（ SAM/TC 19 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古农业大学、鄂尔多斯市农畜产品质量安全中 心、内蒙古自治区质量和标准化研究院、内蒙古自治区计量测试研究院、锡林郭勒盟检验检测中心。 本文件主要起草人：孙海洲、金鹿、张春华、李胜利、周俊文、付乐、陈攀亮、萨初拉、张崇志、 焦兴刚、爱东、王博、赵亚星、郭军、孙余卓、要铎、李占元、王娟、郭大伟、翟鹏程、高永生、包佳 力。 DB15/T 3756 —2024 1 阿拉善白绒山羊肉脂肪酸指纹特征测定 方法 1 范围 本文件规定了阿拉善白绒山羊肉脂肪酸指纹特征测定方法的试剂、仪器和设备、测定步骤。 本文件适用于阿拉善白绒山羊肉中脂肪酸指纹特征的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 5009.168 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 9695.19 肉与肉制品 取样方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 脂肪酸指纹特征 fatty acid fingerprint profiling 通过采集被研究对象的脂肪酸指纹图谱数据，结合化学计量学原理和方法对其进行差异分析。 4 试剂 试剂 4.1.1 硫酸铜。 4.1.2 硫酸钾。 4.1.3 浓硫酸。 4.1.4 无水乙醇。 4.1.5 无水乙醚：优级纯。 4.1.6 正庚烷：色谱纯。 4.1.7 三氟化硼甲醇：色谱纯。 4.1.8 无水硫酸钠。 4.1.9 氯化钠。 4.1.10 硼酸。 4.1.11 氢氧化钠。 4.1.12 甲基红。 DB15/T 3756 —2024 2 4.1.13 溴甲酚绿。 4.1.14 甲醇：色谱纯。 试剂配制 4.2.1 硼酸溶液 (4%)：称取40 g硼酸定容于 1000 mL蒸馏水。 4.2.2 氢氧化钠溶液 (35%)：称取350 g氢氧化钠溶于 1000 mL蒸馏水。 4.2.3 盐酸标准溶液 (0.1 mol/L) ：准确吸取 9.0 mL盐酸，用蒸馏水定容至 1000 mL，用无水碳酸钠 标定浓度。 4.2.4 混合指示剂：称取甲基红 0.17 g，溴甲酚绿 0.33 g，用95%乙醇溶解后定容至 100 mL。 4.2.5 盐酸溶液 (8.3 mol/L) ：按照GB 5009.168 规定的方法进行配制。 4.2.6 氢氧化钠 -甲醇溶液 (2% w/v)：按照GB 5009.168 规定的方法进行配制。 标准溶液配制 十一碳酸甘油三酯内标溶液 (5 mg/mL ，1000 ppm) ：按照GB 5009.168 规定的方法进行配制。 5 仪器和设备 分析天平（分度值 0.0001 g ）。 烘箱。 旋转蒸发仪 。 实验室用多功能粉碎机。 全自动凯氏定氮仪。 数显恒温水浴锅：控温范围 40 ℃～100 ℃。 玻璃冷凝回流装置。 气相色谱仪。 6 测定步骤 样品采集 根据GB/T 9695.19 中取样方法，采集至少 6只羊的不同部位（臂三头肌、背最长肌和股二头肌） 羊肉样品，去除筋膜，用自封袋密闭包装于 -20 ℃下保存，然后于 4 ℃解冻，肉样不见渗出液迅速切 丁，液氮冷冻后粉碎，移至样品管中于 -80 ℃冰箱保藏待测脂肪酸。另外一份置于烘箱内于 65 ℃烘干 至恒重，粉碎后装入自封袋中，室温保存备用。 测定步骤 6.2.1 脂肪酸指纹特征测定 6.2.1.1 样品的前处理 按照GB 5009.168中酸水解 -提取法对样品进行上机前处理。 6.2.2.2 气相色谱参考条件 6.2.1.1.1 检测器：氢火焰离子检测器（ FID）。 DB15/T 3756 —2024 3 6.2.1.1.2 色谱柱：毛细管色谱柱，柱长 100 m，内径0.25 mm，膜厚0.20 µm。 6.2.1.1.3 检测器温度： 250 ℃。 6.2.1.1.4 程序升温： 初始温度 110 ℃，保持10 min，以10 ℃/min升温至180 ℃，保持12 min； 继续以4 ℃/min升温至进样口温度 220 ℃，保持20 min。 6.2.1.1.5 载气：高纯氮气。 6.2.1.1.6 分流比： 20：1。 6.2.1.1.7 进样体积： 1.0 μL。 6.2.1.2 脂肪酸含量测定 上机检测 37种脂肪酸甲酯混合标准品后见附录 A，依据标准品色谱图出峰的保留时间以及每种脂 肪酸甲酯气相色谱图的峰面积， 计算响应因子。 对样品中检出的脂肪酸甲酯定性， 以碳十一烷酸 （ C11:0） 内标峰面积定量分析样品中脂肪酸的相对含量。具体按照 GB 5009.168 中内标法的公式进行计算。阿拉 善白绒山羊肉的脂肪酸测定结果见附录 B。 6.2.1.3 数据整理 与统计分析 原始数据经 Excel整理后，进行方差分析，以 p＜0.05作为差异显著判断标准，以 p＜0.01作为差 异极显著判断标准。 6.2.1.4 脂肪酸指纹特征图谱绘制 运用统计学软件对羊肉脂肪酸含量数据进行 PCA、PLS-DA和OPLS-DA分析， 绘制脂肪酸指纹特征图谱， 示例图见附录 C。 DB15/T 3756 —2024 4 A A 附录 A （资料性） 37种脂肪酸甲酯标准品气相色谱图 37种脂肪酸甲酯标准品气相色谱图见图 A.1。 图A.1 37种脂肪酸甲酯标准品气相色谱图 C4:0 C14:0 C13:0 C10:0 C11:0 C12:0 C8:0 C6:0 C14:1 C16:0 C15:0 C16:1 C15:1 C17:0 C22:2 C24:1 C20:5n3 C17:1 C23:0 C22:6n3 C24:0 C18:0 C18:2n6t C18:2n6c C18:3n6 C18:1n9t C18:1n9c C20:0 C20:2 C21:0 C20:4n6 C20:1 C22:0 C18:3n3 C20:3n3 C22:1n9 C22:3n6