ICS 67.120.30 CCS B50 DB53 云南省地 标准 DB53/T 1370—2025 滇池高背鲫种质特征基因分子鉴定 技术规程 2025－05－09 发布 2025-08-09 实施 云南省市场监督管理局 发布 DB53/T 1370—2025 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由云南大学提出。 本文件由云南省农业标准化技术委员会（YNTCO7）归口。 本文件起草单位：云南大学、云南省标准化研究院。 本文件主要起草人：罗静、项晴雪、赵杰玉、蒋传娣、于虹漫、严晖、黄典一、冷云、刘仪莲、殷 琦丰、殷立京、赵忠。 I DB53/T1370—2025 滇池高背鲫种质特征基因分子鉴定 技术规程 1范围 本文件规定了滇池高背鲫（Carassius auratus）种质特征基因分子鉴定的鉴定原理、鉴定流程、 种质特征鉴定与判定等内容。 本文件适用于滇池高背鲫种质的鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T18654.3养殖鱼类种质检验第3部分：性状测定 GB/T35892实验动物福利伦理审查指南 HJ628生物遗传资源采集技术规范（试行） 3 ：术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 分子鉴定 molecular determination 利用核酸技术对生物中细胞核或非核区的DNA或RNA进行长度分析、序列比较，从而区分生物的不同 种属。 3. 2 基因组genome 一个生物体内所有遗传物质的总和。 3. 3 滇池高背鲫carassius auratus 因物种地和鱼体特别高而得名，属于脊椎动物门（Vertebrata）、硬骨鱼纲（Osteichthyes）、鲤 形目（Cypriniformes）、鲤科（Cyprinidae）、鲫属（Carassiu）鱼类。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid） HI-C：高通量染色体构象捕获技术（High-throughput Chromosome Conformation Capture） PBS：磷酸缓冲盐溶液（Phosphate BufferSaline） 1 DB53/T 1370—2025 PI：碘化丙啶（Propidium Iodide） RNA：核糖核酸（Ribonucleic Acid） 5生物学特征 滇池高背鲫学名、分类及生物学特征见附录A，生物学特征测定方法应符合GB/T18654.3的要求。 6 鉴定原理 基于遗传学和生物信息学技术，通过分析物种基因阻大小及特征进行物种鉴定。 郎 7 鉴定流程 7.1流程概述 鉴定流程主要为样本采集、 核酸提取、文库构建及测序, 最终进行基因组水平的种质特行 体流程见图1。 样本采集 试 核酸提取及 定 血液样品制备 文库构建及测序 4 PI染色 基因组组装及注释 流式细胞仪 基因组水平 检测与分析 质量评估 确定基因组 确定基因组大小 结构特征 获得鉴定结果 图1 鉴定流程图 7.2样本采集 2 DB53/T 1370—2025 7.2.1采集范围 样本采集范围如下： -血液; 一成体组织（胸鳍、腹鳍、尾鳍、背鳍、臀鳍、脾脏、肝脏、肾脏、心脏、脑、皮肤、肌肉、 肠、眼晴、、鳃、性腺）； 胚胎（1K、30ep、GR、Bud、14S、650、pf）。 7.2.2采集要求 样本采集应符合如下要求： 采集雌性滇池高背鲫与雄性高背鲫各 符合HJ628及GB/T 35892 的相 7.3流式细胞术实验流程 7.3. 1试剂配制 地方标准 853 7. 3. 1. 1 实验制备试剂材料 抗凝剂-肝素钠（肝 鱼用PBS（0.85×PBS) -PI 染液; -RNA 水解酶; 缓冲液。 7.3.1.2 PBS 和 PI 工作液具 7.3.2血液样品制备 血液样品制备具体方法见 7.3.3 PI染色 PI染色具体流程见附录B.3。 南 7.3. 4 流式细胞仪检测与分析 流式细胞仪检测与分析具体方法见附录B. 7.4核酸提取及测定 7.4.1核酸提取 7.4.1.1应采用苯酚/氯仿抽提纯化方法，从成体组织和胚胎样品中提取总DNA，具体流程见附录C.1。 7.4.1.2应采用TRIzo1和苯酚/氯仿抽提纯化方法，从成体组织和胚胎样品中提取总RNA，具体流程 见附录 C.2。 7. 4. 2 DNA/RNA 含量测定 7.4.2.1应使用 NanoDrop 测定 DNA/RNA 纯度，通过紫外分光光度计测定 DNA/RNA 溶液在 260 nm 处的 吸光值来计算DNA/RNA含量。