ICS 65.120 GB CCS B 46 中华人民共和国国家标准 GB/T21514—202X 代替GB/T21514—2008 饲料中脂肪酸的测定 Determinationof fattyacidsinfeeds (IS0/Ts 17764:2002, Animal feeding stuffs—Determination of the content of fatty acids, MoD) （公开征求意见稿） 202×-× ×-× ×发布 202×-× ×-× ×实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T21514—202X 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T21514一2008《饲料中脂肪酸含量的测定》，与GB/T21514一2008相比，除结构 调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： 适用范围更改为“配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和饲料原料”（见第1章，2008年版的第1 章）; 更改了索氏提取法（见4.5.1.1）； 增加了水解提取法（见4.5.1.2）； 更改了试样溶液制备方法（见4.5.2，2008年版的5.3.4） 更改了试验数据处理（见4.6，2008年版的第7章） 更改了精密度要求（见4.7，2008年版的第8章） 增加了归一化法（见第5章）； 增加了37种脂肪酸甲酯中英文名称、分子式、CAS号和标准溶液色谱图（见附录A、附录B）： 增加了脂肪酸甲酯和脂肪酸转化系数（见附录C）； 本文件修改采用ISO/TS17764:2002《动物饲料脂肪酸含量的测定》。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。 本文件起草单位：四川威尔检测技术股份有限公司、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究 所【国家饲料质量检验检测中心（北京）]、通威股份有限公司。 本文件主要起草人： 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： -2008年首次发布为GB/T21514一2008； 一本次为第一次修订。 GB/T21514—202X 饲料中脂肪酸的测定 1范围 本文件描述了饲料中脂肪酸的气相色谱测定方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和饲料原料中脂肪酸的测定。 本文件脂肪酸的检出限为0.6mg/kg，定量限为2.0mg/kg。 规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6433 饲料中粗脂肪的测定（GB/T6433一2006，ISO6492:1999，IDT） GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682一2008，ISO3696:1987，MOD） GB/T15687动植物油脂试样的制备（GB/T15687-2008，ISO661:2003，IDT） GB/T 20195 5动物饲料试样的制备（GB/T20195-2006，ISO6498:2012，MOD） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 脂肪酸含量fattyacidcontent 油、脂肪、脂肪提取物、游离脂肪酸或皂类等试样中脂肪酸的质量分数。 3. 2 脂肪酸相对含量fatty acid relativecontent 油、脂肪、脂肪提取物、游离脂肪酸或皂类等试样中某种脂肪酸占所有脂肪酸总量的质量分数。 4内标法 4.1原理 试样中的脂肪经索氏提取或水解提取（动植物油脂试样不提取），在碱性条件下，脂肪酸经皂化、 甲酯化生成脂肪酸甲酯，用气相色谱仪测定，内标法定量。 4. 2 试剂或材料 1 GB/T21514-202X 警告：三氟化硼是有毒物质，建议分析人员在配制三氟化甲醇溶液时不直接使用甲醇和三氟化硼，直接购买该溶 液，皂化、甲酯化操作均在通风橱中完成。 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.2.1水：GB/T6682，二级。 4.2.2正庚烷：优级纯。 4.2.3甲醇：色谱纯。 4.2.4乙醇：95%。 4.2.5石油醚：沸程30℃C~60℃。 4.2.6 焦性没食子酸。 4.2.7 氨水。 4.2.8 无水硫酸钠：500℃C灼烧4h，冷却至约200℃C，取出，置于干燥器中，冷却后密封保存，备用。 4.2.9 盐酸溶液（8.3mol/L）：量取500mL盐酸，用220mL水稀释，混匀。 4.2.10 乙醚-石油醚混合溶液（1+1）：取等体积的95%乙醚和石油醚（4.2.5），混匀。 4.2.11 2%氢氧化钠甲醇溶液：称取10g氢氧化钠，溶解于500mL甲醇中，混匀。 4.2.12 三氟化硼甲醇溶液：15%。 4.2.13 饱和氯化钠溶液：称取360g氯化钠，加入1000mL水，搅拌溶解，澄清后备用。 4.2.14 37种脂肪酸甲酯混合标准溶液（100mg/mL）：购置有证标准物质。一18C以下保存，有效期2 年。 4.2.15脂肪酸甲酯标准储备溶液：准确称取适量脂肪酸甲酯（名称、CAS号和纯度要求详见附录A， 纯度≥98.0%），分别置于10mL容量瓶中，用正庚烷溶解、定容，混匀。其中十六碳酸甲酯、顺-9-十 八碳一烯酸甲酯、顺,顺-9,12-十八碳二烯酸甲酯、顺,顺,顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯浓度为50mg/mL 其它脂肪酸甲酯浓度为5mg/kg。一18℃以下保存，有效期3个月。 4.2.16十七烷酸内标溶液（10.0mg/mL）：准确称取100mg（精确至0.01mg）十七烷酸（CAS号：506-12-7， 纯度≥99.0%），置于10mL容量瓶中，用甲醇（4.2.3）溶解、定容，混匀。一18℃以下保存，有效期 3个月。 4.2.17脂肪酸甲酯混合标准系列溶液：分别准确移取适量脂肪酸甲酯标准储备溶液适量，用正庚烷溶 解、定容，混匀，配制成十六碳酸甲酯、顺-9-十八碳一烯酸甲酯、顺，顺-9,12-十八碳二烯酸甲酯、顺， 顺,顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯分别为0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL、4.0mg/mL、8.0mg/mL、 10.0mg/mL，其它脂肪酸甲酯浓度为0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL、0.80mg/mL、 1.00mg/mL。临用现配， 4.3仪器设备 4.3.1气相色谱仪：配氢火焰离子检测器（FID）。 4.3.2电子天平：感量0.1g、0.0001g、0.00001g。 4.3.3索氏提取器。 4.3.4恒温水浴锅：80℃±1℃。 4.3.52 分液漏斗振荡器。 4.3.6旋转蒸发仪。 4.3.7 涡旋混合仪。 4.3.8[ 圆底烧瓶：50mL、200mL。 4.3.9 分液漏斗：200mL。 2 GB/T21514—202X 4.4样品 按GB/T20195制备固体样品，至少200g，粉碎使其全部通过1mm孔径的分析筛，装入密闭容器 中，备用。动植物油脂试样按照GB/T15687制备。 4.5试验步骤 4.5.1试样称量和处理 4.5.1.1试样称量 平行做两份试验。动植物油脂试样称取0.1g~0.2g（精确至0.1mg）于50mL圆底烧瓶中，准确加 入1.0mL十七烷酸内标溶液（4.2.16），按4.5.2操作。非动植物油脂试样称取0.2g～10g（精确至0.1 mg，约含脂肪100mg~200mg），按照4.5.1.2或4.5.1.3提取脂肪后，再按4.5.2操作。 4.5.1.2索氏提取法 准确加入1.0mL十七烷酸内标溶液（4.2.16），按照GB/T6433规定，如果试样不易粉碎，脂肪含 量超过20%而不易获得均质、缩减的试样应预先提取脂肪，A类样品进行脂肪提取，在不超过40C的 水浴中用旋转蒸发仪除去溶剂；B类样品通过酸水解、提取，合并两次提取溶液，在不超过40°C的水 浴中用旋转蒸发仪除去溶剂。残留物为脂肪提取物，待皂化和甲酯化。 4.5.1.3水解提取法 4.5.1.3.1水解 将试样转移至250mL圆底烧瓶中，准确加入1.0mL十七烷酸内标溶液（4.2.16）、100mg焦性没 食子酸、4~6粒沸石，再加入2mL95%乙醇和4mL水，混匀。 酸水解法：适用于不含乳制品的饲料原料和饲料产品。加入10mL~30mL盐酸溶液（4.2.9），混 匀。将烧瓶放入80℃C水浴中水解40min。每隔10min振摇一次烧瓶，使黏附在烧瓶壁上的颗粒物混入 溶液中。 碱水解法：适用于含乳制品的饲料原料和饲料产品。加入10mL~30mL氨水，混匀。将烧瓶放入 80C水浴中水解40min。每隔10min振摇一次烧瓶，使黏附在烧瓶壁上的颗粒物混入溶液中。 4.5.1.3.2提取 水解完成后，取出烧瓶，冷却至室温。加入10mL95%乙醇，混匀，将烧瓶中的水解液全部转移至 分液漏斗中，用50mL石油醚-乙醚混合溶液（4.2.10）冲洗烧瓶和塞子，冲洗液并入分液漏斗中，加盖。 振摇5min，静置10min。将石油醚-乙醚提取溶液收集到另一250mL圆底烧瓶中，重复提取3次，最 后用石油醚-乙醚混合溶液（4.2.10）冲洗分液漏斗，并收集到250mL烧瓶中。用不超过40℃C水浴的旋 转蒸发仪除去溶剂，残留物为脂肪提取物，待皂化和甲酯化。 注：根据实际工作需要选择内标，对于组分不确定的试样。第一次检测时不应加内标物，观察在内标物峰位置处是 否有干