SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3728—2013 出口食品中空肠弯曲菌快速检测方法 量子点免疫荧光法 Rapid determination of Campylobacter jejuni in food for export- Quantum dots immuno-fluorescencemethod 行业标准信息服务平台 2013-11-06发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3728—2013 前言 本标准是按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、合肥工业 大学。 本标准主要起草人：薛峰、张睿、蒋原、曾德新、陈雷、陈颖、栾军、张鹏飞、陈伟。 行业标准信息服务平台 SN/T3728—2013 出口食品中空肠弯曲菌快速检测方法 量子点免疫荧光法 1范围 本标准规定了出口食品中空肠弯曲菌的量子点免疫荧光检测方法。 本标准适用于出口食品中空肠弯曲菌的快速检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T4789.9食品微生物学检验空肠弯曲菌检验 GB19489实验室生物安全通用要求 3生物安全措施 为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员检测空肠弯曲菌，所有培养物和废弃物应参 照GB19489中的有关规定执行。 4技术概要 本标准采用量子点免疫荧光分析技术检测空肠弯曲菌，主要包含以下步骤： a）增菌，按照GB/T4789.9方法进行样品制备和增菌 b）以免疫磁珠为载体，将菌液中的空肠弯曲菌快速富集在磁珠表面。 服务平台 c） 将荧光量子点标记的空肠弯曲菌抗体与免疫磁珠富集的空肠弯曲菌溶液相互作用，利用荧光 显微镜检测磁珠复合物表面的荧光，结果判定 5试剂和材料 5.1表面带羧基的水溶性量子点（浓度：5μmol/L）。 5.2 空肠弯曲菌单克隆抗体包被的免疫磁珠（浓度约10°个磁珠/mL）。 5.3空肠弯曲菌多克隆抗体（浓度约1mg/mL）。 5.41-乙基-（3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺（EDC)。 5.5N-羟基琥珀酸亚胺（Sulfo-NHS)。 5.6超滤离心管（截留相对分子质量：10kDa）。 5.7 透析袋（截流相对分子质量：14kDa，直径1cm）。 5.8单氨基聚乙二醇（PEG-NH，相对分子质量：5kDa）。 SN/T 3728—2013 5.9 载玻片。 5.10 盖玻片。 5.11 空肠弯曲菌株参考菌株：Campylobacter，ATCC110902、ATCC110903、ATCC110904、ATCC110905。 5.12 PBS缓冲液：参见附录A中A.1。 5.13 PBST洗涤液：参见A.2。 5.14 MES缓冲液：参见A.3。 6 仪器和设备 6.1一次性手套。 6.2移液器：量程0.5μL~10μL，精度0.01μL；量程10μL~100μL，精度0.1μL；量程100μL~ 1000μL，精度1μ 6.3灭菌移液器吸头。 6.41.5mL塑料离心管。 6.5 1.5mL离心管架。 6.61.5mL磁架。 6.7 高速台式离心机，转速不低于20000r/min，最大相对离心力不低于10000Xg。 6.8 恒温摇床，温度偏差不超过土1℃。 6.9涡旋混合器。 6.10 旋转混合器。 6.11 高压灭菌锅。 6.12 计时器。 6.13 3荧光显微镜，配置有汞灯光源和600nm士20nm附近窄带滤光片。 7 检测程序 食品中空肠弯曲菌量子点免疫荧光检测程序见图 2