SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3858—2014 出口食品中异抗坏血酸的测定 高效液相色谱法 Determination of erythorbic acid in food for export- HPLC method 行业标准信息服务平台 2014-01-13发布 2014-08-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3858—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任， 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国厦门出人境检验检疫局技术中心、中华人民共和国镇江出入境检 验检疫局。 本标准主要起草人：张志刚、陈达捷、赵鹏、徐敦明、张缙。 行业标准信息服务平台 H SN/T38582014 出口食品中异抗坏血酸的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了出口食品中异抗坏血酸的高效液相色谱检测方法。 本标准适用于肉类罐头、鱼肉罐头、八宝粥罐头、水果罐头、葡萄酒、醋、啤酒、牛奶中异抗坏血酸的 测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中异抗坏血酸采用水提取，经活性炭催化脱氢后，与邻苯二胺衍生成具有强荧光性的物质，用 配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。 4.1乙腈：液相色谱纯。 业标准信息服 4.2 甲醇。 4.3乙酸钠。 4.4冰乙酸。 4.5 邻苯二胺：液相色谱纯。 4.6 十二水合磷酸氢二钠（NazHPO·12H,O 4.7 磷酸。 4.8 活性炭粉：200目。 标准品：异抗坏血酸标准品，纯度大于等于99%，CAS号：89-65-6。 4.10 乙酸钠缓冲溶液：称取30.13g乙酸钠溶解于80mL水中，用冰乙酸调节pH值至5.0后，用水定 容至100mL，备用。 4.1120mmol/L邻苯二胺甲醇溶液：称取邻苯二胺2.16g，溶解于1L的甲醇中，备用。 4.1220mmol/LNa2HPO4溶液：称取7.16gNa2HPO4·12H2O溶解于1L水中，用磷酸调节pH值 至7.0，备用。 4.13标准储备液：称取适量异抗坏血酸标准品（精确至0.1mg），用水配制成100mg/L的储备液，避 光保存，标准及衍生后产物保存时间为24h。 1 SN/T 3858—2014 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配荧光检测器（FLD)。 5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5.3离心机：转速不低于4000r/min。 5.4冷冻离心机：转速不低于4000r/min。 5.5高速均质器：18000r/min。 5.6组织捣碎机。 5.7 微孔滤膜：0.2μm，水相。 6试样制备、保存 6.1试样制备 至少取同一批次3个最小完整包装样品（混合后的固体样品总量100g～500g，液体样品100mL~ 500mL），固体或半固体样品用组织捣碎机粉碎混匀，液体样品混合均匀，混匀后样品置于密闭容器中，待 称样处理，样品制备后应尽快完成试验。 6.2试样保存 试样于0℃～4℃密封保存；在制样的操作过程中及样品保存期间，应避免样品长时间与大量空气 接触，防止样品中被测物质受到氧化导致被测物含量发生变化。 7测定步骤 7.1试样处理 7.1.1试样提取 固体试样：称取样品10g（精确至0.01g），加入水15mL，用均质器均质后，4000r/min离心 3min，移取上层液体，再加入15mL水，经相同方法处理后，合并两次提取液，用水定容至100.0mL，混 勾后待衍生化。 液体试样：称取试样10g（精确至0.01g）用水定容至100.0mL，混匀后待衍生化， 7.1.2试样衍生化 取上述提取液50mL，加人活性炭粉（4.8）2.0g，置于250mL锥形瓶中，剧烈摇动5min，用定性滤 纸过滤，取滤液2.00mL置于10mL容量瓶中，加入乙酸钠缓冲溶液（4.10）2.0mL，再加入5.0mL邻 苯二胺甲醇溶液（4.11），充分摇勾后，避光条件下放置35min后用水定容至10.0mL，混勾后过微孔滤 膜（5.7）后，供HPLC测定。 7.2测定 7.2.1色谱条件 色谱条件如下： a） 色谱柱：C18柱，250mmX4.6mm（内径），5μm，或相当者； 2