SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3868—2014 出口植物油中黄曲霉毒素B1B、G1、G2 的 检测 免疫亲和柱净化高效液相色谱法 Determination of aflatoxin B,,B2,G1,G2 in edible oil for export- Immunoaffinity column clean-up and HPLC withfluorescence detection 行业标准信息服务平台 2014-01-13发布 2014-08-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3868—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国山东出入境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人：鲍蕾、许艳丽、吴振兴、静平、吕宁、金莹。 行业标准信息服务平台 SN/T3868—2014 出口植物油中黄曲霉毒素Bi、B2、G1、G2的 检测免疫亲和柱净化高效液相色谱法 1范围 本标准规定了出口植物油中黄曲霉毒素BI、B2、GI、G2的检测方法。 本标准适用于花生油、橄榄油、芝麻油中黄曲霉毒素的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中的黄曲霉毒素用甲醇-水（55十45，体积比）提取，提取液经离心、过滤、稀释后，用免疫亲和柱 净化，采用液相色谱结合荧光检测器柱后衍生法测定黄曲霉毒素的含量，外标法定量。 4试剂和材料 除特殊规定外，所用化学试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 标准信息服 4.1甲醇:HPLC级。 4.2乙腈:HPLC级。 4.3硝酸：65%。 4.4氯化钠。 4.5溴化钾。 4.6提取液：甲醇-水（55十45，体积比）。 4.7淋洗液：甲醇-水（10十90，体积比）。 4.8黄曲霉毒素标准品：A6636（黄曲霉毒素B）、A9887（黄曲霉毒素B,）、A0138（黄曲霉毒素Gi）、 A0263（黄曲霉毒素Gz），SigmaAldrich，或相当者；纯度≥99.0%。 4.9黄曲霉毒素标准储备液：将1mg黄曲霉毒素标准品B、B2、G和G²（4.8）分别溶解于乙（4.2）， 并定容至10mL，得100μg/mL的标准储备液I，准确移取四种黄曲霉毒素标准储备液I各1mL，分 别溶解于乙（4.2）并定容至10mL，得10ug/mL黄曲霉毒素Bl、Bz、Gi、G2的标准储备液Il，保存于 -18 ℃. 一容量瓶中，以乙睛（4.2）稀释至刻度线，作为标准混合中间液，含有黄曲霉毒素总量400ng/mL（包含 黄曲霉毒素BlBz、GlGz分别为200，50，100和50ng/mL），保存于一18℃ 4.11黄曲霉毒素标准工作液：移取适量的不同体积的黄曲霉毒素混合标准中间液（4.10），以50%甲 醇-水溶液按表1配制浓度梯度的标准曲线，即用即配。 1 SN/T 3868—2014 表1黄曲霉毒素标准工作液配制 AFB,/ AFBz/ AFG// AFG2/ AF总量/ 浓度梯度 (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) STD1 0.125 0,25 0.125 0.5 1 STD2 0.25 0.25 0.5 1 2 2.5 STD3 0.625 1.25 0.625 5 1.25 2.5 STD4 5 1.25 10 2.5 STD5 10 5 2.5 20 STD6 0 0 0 0 4.12 离心管：50mL。 4.13 定性滤纸。 4.14 玻璃微纤维滤纸。 4.15 黄曲霉毒素免疫亲和柱：VICAMAflatestWB柱（G1o24；Vicam，Watertown，MA），或相当者 4.16 10mL前处理玻璃针筒。 仪器与设备 5.1高效液相色谱仪：配荧光检测器，或相当者 5.2柱后衍生装置：可使用KobraCell电化学衍生装置、UVE光化学衍生装置或者相当者 行业标准信息 5.3离心机：7000r/min。 5.4振荡器。 操作方法 6.1提取 准确称取5.0g样品，置于50mL离心管中，加入1.0g氯化钠。加入25mL提取液（4.6）。旋涡振 荡，让样品与提取液充分混合；以400r/min振荡10min，以7000r/min离心10min；取下层澄清提取 液，定性滤纸过滤；用量筒量取15mL滤液，置于50mL量筒中，加人30mL水，混匀后，以微纤维滤纸 过滤。 6.2免疫亲和柱净化 将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下，准确移取30.0mL（相当于2.0g试样）上述澄清滤液过 免疫亲和柱，以每秒钟一至两滴的流速全部通过亲和柱：加人10mL淋洗液（4.7）以每秒钟一至两滴的 流速淋洗柱子，直至空气进人到亲和柱中，重复冲洗柱子一次，弃去全部流出液：加入0.6mL甲醇（4.1） 对免疫亲和柱进行洗脱，洗脱流速为每秒钟一至两滴，再次加人0.6mL甲醇（4.1）进行洗脱，以2mL容 量瓶收集洗脱液，适量双蒸水补充至2mL，供上机检测用。 2